ORGANOGÊNESE E TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE MARACUJÁ AMARELO (Passiflora edulis f. flavicarpa DEG.) COM OS GENES CMe-ACO1 AS E nptII VIA Agrobacterium tumefaciens

Brazil is the main world producer of yellow passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa). Fruits have a great nutritive and pharmaceutic value. They are commercialized in natura and industrialized for national market and exportation. Passion fruits present a high loss of water during fruit ripening, what is a concern for transport. In order to improve fruit quality and storage life, experiments were carried out for regeneration of plants from leaf explants of Passiflora edulis and for introduction of an antisense melon ACCoxidase gene (LEM1) via Agrobacterium tumefaciens strain carrying binary vectors. During climateric fruits ripening process, like yellow passionfruit, 1-carboxylic-1-aminocyclopropane (ACC) is converted into ethylene by the action of ACCoxidase enzyme. Two regeneration experiments were conducted, using Murashige and Skoog (1962) as basic medium. The effect of several factors was evaluated: physiological age of the explants (juvenile and adult), position of the explant on culture medium (with abaxial or adaxial face in contact with the medium), and three concentrations of benzyladenine (BAP) (1.0, 1.5 and 2.0 mg.L-1). The following data were recorded: percentage of regenerating leaf explants, mean number of buds per explant, mean number of leaves, mean length of the regenerated shoots and percentage of explants forming calli. Every experiment was repeated twice, each treatment had four repetitions of ten leaf explants each. The concentration of 1.5 mg.L-1 originated the best results for all the recorded datas for both positions and for juvenile and adult material. Callogenesis was high in the presence of 2 mg.L-1 BAP. For juvenile material grown from seeds, 50,22% of the explants formed adventitious buds by organogenesis for both positions of the explants. For adult material, IAPAR genotypes 309, 156 x 123 and 352 originated the highest percentages of adventitious buds when cultivated with adaxial face in contact with the medium. Elongation and rooting of the regenerated shoots were obtained in the presence of MS medium or half-strength salts of MS medium and 1 mg.L-1 of gibberellic acid. However, stem size, mean root number, and size were higher on the half strenght of MS salts. Through transformation experiments, leaf explants were co-cultured with disarmed A. tumefaciens vector pGA643 carrying LEM1 gene and EHA101 strain containing a plasmid harbouring a NOS/NPTII gene. Three plants among nine growing in the presence of kanamycin were transformed with NPTII gene, and one plant among six growing in the presence of kanamycin contained LEM1 gene, with 4.3% and 1.43% of transformation efficiency, respectively, as indicated by PCR analysis. Colorimetric analysis of commercial fruits allowed to classify them into three groups: mainly green, mainly colored and partially colored. Ethylene production and enzymatic activity of ACCoxidase were measured and indicated that yellow passion fruit is an intermediary producer of ethylene and that ACCoxidase has a limited activity and needs cofactors to reach a maximum value.O Brasil é o principal produtor mundial de maracujá amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.). Seus frutos, de grande valor nutricional e farmacêutico são comercializados in natura e industrializados, garantindo o abastecimento do mercado interno e exportação. Contudo, seus frutos perdem grande quantidade de água durante o processo de maturação, conferindo à eles um aspecto de murcha em poucos dias, além de aumentar a fragilidade durante o transporte. Assim, o presente trabalho teve como principal objetivo, introduzir em tecidos desta espécie o gene que codifica para a enzima ACCO, em orientação antisense, via Agrobacterium tumefaciens. Esta enzima é responsável pela conversão do ácido 1-carboxílico -1 - aminociclopropano (ACC) em etileno, promovendo a maturação dos frutos. Como controle do processo de transformação, foi utilizado o gene nptII, que confere resistência ao antibiótico canamicina e que foi introduzido com sucesso nesta espécie em trabalhos anteriores. A transformação genética só é obtida com sucesso, se os explantes potencialmente transgênicos adquirirem aptidão para regenerar uma nova planta. Neste sentido, dois experimentos de organogênese foram realizados. Neles avaliou-se o efeito da idade fisiológica dos explantes (jovem e adulto); da posição de cultivo dos explantes (abaxial e adaxial) e o efeito da citocinina BAP: 1,0; 1,5 e 2,0 mg.L-1 na porcentagem de explantes com gemas, no número médio de gemas por explante, número médio de folhas por explante, comprimento médio das folhas, comprimento da haste principal e porcentagem de explantes que formaram calos. Os experimentos foram realizados sob delineamento experimental inteiramente casualizado, com quatro repetições de cada tratamento e dez explantes por parcela. A concentração 1,5 mg.L-1 de BAP promoveu os melhores resultados para todas as variáveis avaliadas, em ambas as posições de cultivo do explante e para tecidos jovens e adultos. Foi observada formação excessiva de calos na concentração de 2,0 mg.L-1 de BAP. Explantes foliares jovens, oriundos de sementes, regeneraram gemas adventícias em 50,22% dos casos após 30 dias de cultivo, em ambas as posições do explante no meio de cultura. Já os genótipos IAPAR 309, 156 x 123 e 352 (material adulto), apresentaram maior porcentagem de explantes regenerados quando estes foram cultivados na posição adaxial. O alongamento e enraizamento dos brotos foram obtidos em ambos os tratamentos: MS e MS/2 + 1 mg.L-1 de GA3. No entanto, o segundo tratamento resultou em maior comprimento de haste (3,73 cm), número médio de raízes por plântula (2,08) e comprimento de raízes (6,64 cm) após 60 dias de cultivo. Nos ensaios com Agrobacterium, apenas uma planta de seis regeneradas e enraizadas em meio seletivo apresentou o gene antisense da ACCO, com uma eficiência de transformação de 1,43%. Para o gene nptII esta eficiência foi de 4,3%. Estes resultados foram confirmados pela técnica de PCR. Uma análise colorimétrica de frutos comerciais foi realizada e permitiu a classificação destes frutos em três grupos: predominantemente verde, predominantemente colorido e totalmente colorido. A produção de etileno e atividade enzimática da ACCO foi avaliada, mostrando que o maracujá amarelo é produtor intermediário de etileno e que a atividade enzimática da ACCO é limitada, necessitando de cofatores para sua atividade máxima

Organogênese e transformação genética de maracujá amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.) com os genes CMe-ACO1 AS e nptll via Agrobacterium tumefaciens

O Brasil é o principal produtor mundial de maracujá-amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.). Seus frutos, de grande valor nutricional e farmacêutico são comercializados in natura e industrializados, garantindo o abastecimento do mercado interno e exportação. Contudo, seus frutos perdem grande quantidade de água durante o processo de maturação, conferindo à eles um aspecto de murcha em poucos dias, além de aumentar a fragilidade durante o transporte. Assim, o presente trabalho teve como principal objetivo, introduzir em tecidos desta espécie o gene que codifica para a enzima ACCO, em orientação antisense, via Agrobacterium tumefaciens. Esta enzima é responsável pela conversão do ácido 1-carboxílico-1-aminociclopropano (ACC) em etileno, promovendo a maturação dos frutos. Como controle do processo de transformação, foi utilizado o gene nptll, que confere resistência ao antibiótico canamicina e que foi introduzido com sucesso nesta espécie em trabalhos anteriores. A transformação genética só é obtida com sucesso, se os explantes potencialmente transgênicos adquirirem aptidão para regenerar uma nova planta. Neste sentido, dois experimentos de organogênese foram realizados. Neles avaliou-se o efeito da idade fisiológica dos explantes (jovem e adulto); da posição de cultivo dos explantes (abaxial e adaxial) e o efeito da citocinina BAP: 1,0; 1,5 e 2,0 mg.L-1 na porcentagem de explantes com gemas, no número médio de gemas por explante, número médio de folhas por explante, comprimento médio das folhas, comprimento da haste principal e porcentagem de explantes que formaram calos. Os experimentos foram realizados sob delineamento experimental inteiramente casualizado, com quatro repetições de cada tratamento e dez explantes por parcela. A concentração 1,5 mg.L-1 de BAP promoveu os melhores resultados para todas as variáveis avaliadas, em ambas as posições de cultivo do explante e para tecidos jovens e adultos. Foi observada formação excessiva de calos na concentração de 2,0 mg.L-1 de BAP. Explantes foliares jovens, oriundos de sementes, regeneraram gemas adventícias em 50,22% dos casos após 30 dias de cultivo, em ambas as posições do explante no meio de cultura. Já os genótipos IAPAR 309, 156 x 123 e 352 (material adulto), apresentaram maior porcentagem de explantes regenerados quando estes foram cultivados na posição adaxial. O alongamento e enraizamento dos brotos foram obtidos em ambos os tratamentos: MS e MS/2 + 1 mg.L-1 de GA3. No entanto, o segundo tratamento resultou em maior comprimento de haste (3,73 cm), número médio de raízes por plântula (2,08) e comprimento de raízes (6,64 cm) após 60 dias de cultivo. Nos ensaios com Agrobacterium, apenas uma planta de seis regeneradas e enraizadas em meio seletivo apresentou o gene antisense da ACCO, com uma eficiência de transformação de 1,43%. Para o gene nptll esta eficiência foi de 4,3%. Estes resultados foram confirmados pela técnica de PCR. Uma análise colorimétrica de frutos comerciais foi realizada e permitiu a classificação destes frutos em três grupos: predominantemente verde, predominantemente colorido e totalmente colorido. A produção de etileno e atividade enzimática da ACCO foi avaliada, mostrando que o maracujá-amarelo é produtor intermediário de etileno e que a atividade enzimática da ACCO é limitada, necessitando de cofatores para sua atividade máxim

Euphorbia heterophylla L. RESISTENTE AOS HERBICIDAS INIBIDORES DE ACETOLACTATO SINTASE: DISTRIBUIÇÃO E GENÉTICA DE BIÓTIPOS DO ESTADO DO PARANÁ

Avaliou-se a distribuição de populações da espécie Euphorbia heterophylla L., com resistência aos herbicidas inibidores da enzima acetolactato sintase (ALS), em propriedades localizadas nas regiões oeste e sudeste do estado do Paraná. Foram determinadas as principais práticas agronômicas associadas à resistência e caracterizadas populações resistentes geneticamente. Sementes de E. heterophylla foram coletadas em 103 localidades do estado do Paraná, durante o ano de 2002. Em cada local os agricultores informaram as práticas culturais adotadas na condução da lavoura de soja. Análises de Randomly Amplified Polymorphic DNA (RAPD) utilizando 30 primers foram realizadas em cinco populações provenientes do oeste paranaense. Os resultados evidenciaram que populações de E. heterophylla resistentes aos herbicidas inibidores de ALS estão amplamente distribuídas no estado do Paraná. A monocultura de soja conjuntamente com a utilização prolongada de herbicidas inibidores de ALS, provavelmente, estão associadas com a seleção de populações resistentes. A análise genética não permitiu assegurar se houve dispersão de sementes de E. heterophylla resistente ao herbicida na região analisada. Euphorbia heterophylla L. RESISTANT TO ACETOLACTATE SYNTHASE INHIBITING HERBICIDES: DISTRIBUTION AND GENETIC OF BIOTYPES FROM PARANÁ STATE Abstract The distribution of Euphorbia heterophylla L. species population resistant to acetolactate synthase inhibiting herbicides were evaluated in properties located in the west and southeast of the state of Paraná. The main agronomical practices associated to the resistant and the characterization of the population genetically resistant were determined. E. heterophylla seeds were collected in 103 locations of Paraná state, during the year of 2002. In each location, farmers informed soybean management practices adopted. RAPD analysis using 30 primers were performed on five populations of the west of the state. The results evidenced that the E. heterophylla populations resistant to the ALS inhibiting herbicides of are widely distributed in Paraná state. Soybean monoculture together with the prolonged utilization of ALS inhibiting herbicides, probably are associated with resistant population selection. The genetic analysis didnt permit to assure if there were dispersion of E. heterophylla seeds resistant to the herbicide in the region analysed

RESISTÊNCIA DE PLANTAS DANINHAS: SELEÇÃO OU INDUÇÃO À MUTAÇÃO PELOS HERBICIDAS INIBIDORES DE ACETOLACTATO

A resistência de plantas daninhas aos herbicidas, principalmente os inibidores da síntese de aminoácidos ramificados (isoleucina, leucina e valina), está se propagando no Brasil. A literatura propõem que a resistência aos herbicidas ocorre devido à seleção de indivíduos mutantes já presentes na comunidade vegetal aspergida pelo herbicida. Contudo, durante a replicação do DNA ocorrem erros que são corrigidos por diversas proteínas. Já foi identificada a composição de aminoácidos das proteínas do grupo MutS, responsáveis pela correção de erros replicativos em Arabidopsis thaliana. Com base na elevada composição dos aminoácidos ramificados nas proteínas do grupo MutS, este trabalho questiona se a ausência desses aminoácidos em momentos críticos da replicação do DNA pode estar prejudicando a correção dos erros do DNA das plantas daninhas. Comparações são feitas entre possíveis efeitos de inibidores de acetolactato sintase (ALS) e de enol-piruvil-shiquimatofosfato- sintase (EPSPS). Com base nessas informações sugere-se que herbicidas inibidores da síntese de aminoácidos ramificados podem propiciar o aparecimento de mais indivíduos mutantes resistentes aos mesmos. WEED RESISTANCE: SELECTION OR INDUCTION TO MUTATION BY INHIBITORS OF ACETO LACTATE SYNTASE HERBICIDES Abstract The weed resistance to herbicides is widely spread in Brazil, mainly for the compounds inhibitors of the synthesis of branched-chain amino acids, isoleucine, leucine and valine. The literature proposes that the resistance to herbicides appears as result of selection of mutant individual plants existent in the weed flora prior to herbicide application. However, during DNA replication occur replication errors, that are corrected by several proteins. It is already known the amino acid composition of the proteins from the group MutS, responsible for the correction of replication errors in Arabidopsis thaliana. Based on the high composition of branched-chain amino acids on the group MutS proteins, in this work it is hypothesized that the absence of these amino acids on critical moments of the DNA replication can be interfering on the correction of the DNA replication errors in weeds. Possible effect of aceto lactate syntase (ALS) and enolpyruvil- shiquimato-phosphate syntase (EPSPS) inhibithing herbicides are compared. This review suggests that herbicides inhibitor of branched chain amino acid synthesis can trigger the appearance of more mutant weeds resistant to the herbicides when sprayed by these compounds

Similaridade genética de biótopos de Euophorbia heterophylla resistentes aos herbicidas inibidores da síntese de aminoácidos de cadeia ramificada

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Caracterização genética de Euphorbia heterophylla resistente a herbicidas inibidores da acetolactato sintase

The increase of the number of weed plants resistant to enzyme acetolactate sintase (ALS)-inhibiting herbicides of is a subject frequently discussed by farmers and scientific community. In Brazil, nine species were registered with such problem. The objective of this work was to determine the genetic diversity of wild poinsettia (Euphorbia heterophylla L.) ALS-resistant populations. Forty populations deriving from seeds collected in areas of the State of Rio Grande do Sul, Brazil, with resistance suspicion, were selected from the previous application of herbicides in greenhouse. Twenty plants of each population were sampled for DNA extraction. Analysis of 30 random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers were performed. Each marker had 10 oligonucleotide of arbitrary sequence. On the grouping analysis, the overall coefficient of similarity was 40% and the populations were separated in seven groups. The populations of the counties of Pontão, Augusto Pestana and Não-me-Toque were genetically different. There is genetic variability related to herbicide resistence among E. heterophylla populations from plateaus of the State of Rio Grande do Sul.O aumento do número de plantas daninhas resistentes aos herbicidas inibidores da enzima acetolactato sintase é um tema abordado com freqüência por produtores e comunidade científica. No Brasil, nove espécies já foram documentadas por apresentarem tal problema. O objetivo deste trabalho foi determinar a diversidade genética de populações de leiteira (Euphorbia heterophylla L.) resistentes aos herbicidas inibidores da enzima acetolactato sintase. Quarenta populações de plantas oriundas de sementes coletadas em áreas do Estado do Rio Grande do Sul, Brasil, com suspeita de resistência, foram selecionadas, a partir da aplicação prévia de herbicidas com este mecanismo de ação em casa de vegetação. Vinte plantas de cada população serviram de amostra para a extração de DNA. Trinta marcadores de polimorfismo de DNA amplificado ao acaso (RAPD) foram selecionados, cada um com 10 oligonucleotídeos de seqüência arbitrária. Na análise de agrupamento, cujo coeficiente médio de similaridade foi de 40%, as populações foram separadas em sete grupos. As populações dos municípios de Pontão, Augusto Pestana e Não-me-Toque foram consideradas geneticamente diferentes. Há variabilidade genética relacionada à resistência do herbicida entre as populações de E. heterophylla que ocorrem no planalto do Estado do Rio Grande do Sul

Organogênese e transformação genética de maracujá amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.) com os genes CMe-ACO1 AS e nptll via Agrobacterium tumefaciens

O Brasil é o principal produtor mundial de maracujá-amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.). Seus frutos, de grande valor nutricional e farmacêutico são comercializados in natura e industrializados, garantindo o abastecimento do mercado interno e exportação. Contudo, seus frutos perdem grande quantidade de água durante o processo de maturação, conferindo à eles um aspecto de murcha em poucos dias, além de aumentar a fragilidade durante o transporte. Assim, o presente trabalho teve como principal objetivo, introduzir em tecidos desta espécie o gene que codifica para a enzima ACCO, em orientação antisense, via Agrobacterium tumefaciens. Esta enzima é responsável pela conversão do ácido 1-carboxílico-1-aminociclopropano (ACC) em etileno, promovendo a maturação dos frutos. Como controle do processo de transformação, foi utilizado o gene nptll, que confere resistência ao antibiótico canamicina e que foi introduzido com sucesso nesta espécie em trabalhos anteriores. A transformação genética só é obtida com sucesso, se os explantes potencialmente transgênicos adquirirem aptidão para regenerar uma nova planta. Neste sentido, dois experimentos de organogênese foram realizados. Neles avaliou-se o efeito da idade fisiológica dos explantes (jovem e adulto); da posição de cultivo dos explantes (abaxial e adaxial) e o efeito da citocinina BAP: 1,0; 1,5 e 2,0 mg.L-1 na porcentagem de explantes com gemas, no número médio de gemas por explante, número médio de folhas por explante, comprimento médio das folhas, comprimento da haste principal e porcentagem de explantes que formaram calos. Os experimentos foram realizados sob delineamento experimental inteiramente casualizado, com quatro repetições de cada tratamento e dez explantes por parcela. A concentração 1,5 mg.L-1 de BAP promoveu os melhores resultados para todas as variáveis avaliadas, em ambas as posições de cultivo do explante e para tecidos jovens e adultos. Foi observada formação excessiva de calos na concentração de 2,0 mg.L-1 de BAP. Explantes foliares jovens, oriundos de sementes, regeneraram gemas adventícias em 50,22% dos casos após 30 dias de cultivo, em ambas as posições do explante no meio de cultura. Já os genótipos IAPAR 309, 156 x 123 e 352 (material adulto), apresentaram maior porcentagem de explantes regenerados quando estes foram cultivados na posição adaxial. O alongamento e enraizamento dos brotos foram obtidos em ambos os tratamentos: MS e MS/2 + 1 mg.L-1 de GA3. No entanto, o segundo tratamento resultou em maior comprimento de haste (3,73 cm), número médio de raízes por plântula (2,08) e comprimento de raízes (6,64 cm) após 60 dias de cultivo. Nos ensaios com Agrobacterium, apenas uma planta de seis regeneradas e enraizadas em meio seletivo apresentou o gene antisense da ACCO, com uma eficiência de transformação de 1,43%. Para o gene nptll esta eficiência foi de 4,3%. Estes resultados foram confirmados pela técnica de PCR. Uma análise colorimétrica de frutos comerciais foi realizada e permitiu a classificação destes frutos em três grupos: predominantemente verde, predominantemente colorido e totalmente colorido. A produção de etileno e atividade enzimática da ACCO foi avaliada, mostrando que o maracujá-amarelo é produtor intermediário de etileno e que a atividade enzimática da ACCO é limitada, necessitando de cofatores para sua atividade máxim

ORGANOGÊNESE E TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE MARACUJÁ AMARELO (Passiflora edulis f. flavicarpa DEG.) COM OS GENES CMe-ACO1 AS E nptII VIA Agrobacterium tumefaciens

Brazil is the main world producer of yellow passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa). Fruits have a great nutritive and pharmaceutic value. They are commercialized in natura and industrialized for national market and exportation. Passion fruits present a high loss of water during fruit ripening, what is a concern for transport. In order to improve fruit quality and storage life, experiments were carried out for regeneration of plants from leaf explants of Passiflora edulis and for introduction of an antisense melon ACCoxidase gene (LEM1) via Agrobacterium tumefaciens strain carrying binary vectors. During climateric fruits ripening process, like yellow passionfruit, 1-carboxylic-1-aminocyclopropane (ACC) is converted into ethylene by the action of ACCoxidase enzyme. Two regeneration experiments were conducted, using Murashige and Skoog (1962) as basic medium. The effect of several factors was evaluated: physiological age of the explants (juvenile and adult), position of the explant on culture medium (with abaxial or adaxial face in contact with the medium), and three concentrations of benzyladenine (BAP) (1.0, 1.5 and 2.0 mg.L-1). The following data were recorded: percentage of regenerating leaf explants, mean number of buds per explant, mean number of leaves, mean length of the regenerated shoots and percentage of explants forming calli. Every experiment was repeated twice, each treatment had four repetitions of ten leaf explants each. The concentration of 1.5 mg.L-1 originated the best results for all the recorded datas for both positions and for juvenile and adult material. Callogenesis was high in the presence of 2 mg.L-1 BAP. For juvenile material grown from seeds, 50,22% of the explants formed adventitious buds by organogenesis for both positions of the explants. For adult material, IAPAR genotypes 309, 156 x 123 and 352 originated the highest percentages of adventitious buds when cultivated with adaxial face in contact with the medium. Elongation and rooting of the regenerated shoots were obtained in the presence of MS medium or half-strength salts of MS medium and 1 mg.L-1 of gibberellic acid. However, stem size, mean root number, and size were higher on the half strenght of MS salts. Through transformation experiments, leaf explants were co-cultured with disarmed A. tumefaciens vector pGA643 carrying LEM1 gene and EHA101 strain containing a plasmid harbouring a NOS/NPTII gene. Three plants among nine growing in the presence of kanamycin were transformed with NPTII gene, and one plant among six growing in the presence of kanamycin contained LEM1 gene, with 4.3% and 1.43% of transformation efficiency, respectively, as indicated by PCR analysis. Colorimetric analysis of commercial fruits allowed to classify them into three groups: mainly green, mainly colored and partially colored. Ethylene production and enzymatic activity of ACCoxidase were measured and indicated that yellow passion fruit is an intermediary producer of ethylene and that ACCoxidase has a limited activity and needs cofactors to reach a maximum value.O Brasil é o principal produtor mundial de maracujá amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa Deg.). Seus frutos, de grande valor nutricional e farmacêutico são comercializados in natura e industrializados, garantindo o abastecimento do mercado interno e exportação. Contudo, seus frutos perdem grande quantidade de água durante o processo de maturação, conferindo à eles um aspecto de murcha em poucos dias, além de aumentar a fragilidade durante o transporte. Assim, o presente trabalho teve como principal objetivo, introduzir em tecidos desta espécie o gene que codifica para a enzima ACCO, em orientação antisense, via Agrobacterium tumefaciens. Esta enzima é responsável pela conversão do ácido 1-carboxílico -1 - aminociclopropano (ACC) em etileno, promovendo a maturação dos frutos. Como controle do processo de transformação, foi utilizado o gene nptII, que confere resistência ao antibiótico canamicina e que foi introduzido com sucesso nesta espécie em trabalhos anteriores. A transformação genética só é obtida com sucesso, se os explantes potencialmente transgênicos adquirirem aptidão para regenerar uma nova planta. Neste sentido, dois experimentos de organogênese foram realizados. Neles avaliou-se o efeito da idade fisiológica dos explantes (jovem e adulto); da posição de cultivo dos explantes (abaxial e adaxial) e o efeito da citocinina BAP: 1,0; 1,5 e 2,0 mg.L-1 na porcentagem de explantes com gemas, no número médio de gemas por explante, número médio de folhas por explante, comprimento médio das folhas, comprimento da haste principal e porcentagem de explantes que formaram calos. Os experimentos foram realizados sob delineamento experimental inteiramente casualizado, com quatro repetições de cada tratamento e dez explantes por parcela. A concentração 1,5 mg.L-1 de BAP promoveu os melhores resultados para todas as variáveis avaliadas, em ambas as posições de cultivo do explante e para tecidos jovens e adultos. Foi observada formação excessiva de calos na concentração de 2,0 mg.L-1 de BAP. Explantes foliares jovens, oriundos de sementes, regeneraram gemas adventícias em 50,22% dos casos após 30 dias de cultivo, em ambas as posições do explante no meio de cultura. Já os genótipos IAPAR 309, 156 x 123 e 352 (material adulto), apresentaram maior porcentagem de explantes regenerados quando estes foram cultivados na posição adaxial. O alongamento e enraizamento dos brotos foram obtidos em ambos os tratamentos: MS e MS/2 + 1 mg.L-1 de GA3. No entanto, o segundo tratamento resultou em maior comprimento de haste (3,73 cm), número médio de raízes por plântula (2,08) e comprimento de raízes (6,64 cm) após 60 dias de cultivo. Nos ensaios com Agrobacterium, apenas uma planta de seis regeneradas e enraizadas em meio seletivo apresentou o gene antisense da ACCO, com uma eficiência de transformação de 1,43%. Para o gene nptII esta eficiência foi de 4,3%. Estes resultados foram confirmados pela técnica de PCR. Uma análise colorimétrica de frutos comerciais foi realizada e permitiu a classificação destes frutos em três grupos: predominantemente verde, predominantemente colorido e totalmente colorido. A produção de etileno e atividade enzimática da ACCO foi avaliada, mostrando que o maracujá amarelo é produtor intermediário de etileno e que a atividade enzimática da ACCO é limitada, necessitando de cofatores para sua atividade máxima

Similaridade genética de biótopos de Euophorbia heterophylla resistentes aos herbicidas inibidores da síntese de aminoácidos de cadeia ramificada

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