Detección molecular de micrometástasis en ganglio centinela : valor pronóstico

El cáncer de mama es el segundo cáncer más frecuente en el mundo y el tumor maligno más frecuente entre las mujeres. Cambios en las células tumorales junto con el microambiente tumoral facilitan el desprendimiento de células tumorales de la masa primaria del tumor. Cualquier nodo que reciba directamente el drenaje linfático del tumor primario será el ganglio centinela GC, que se convierte en el primer nodo involucrado en el proceso de metastatización de un tumor vía sistema linfático. Durante años las pacientes han sido sometidas a la disección axilar de la cadena ganglionar completa para evitar que estas células se diseminaran al resto del organismo, pero a la vez, esta intervención provoca una importante morbilidad. La técnica de la biopsia del ganglio centinela (BGC) surge de la idea de que la diseminación de células tumorales a través de los ganglios linfáticos se produce de manera ordenada, de modo que la ausencia de células tumorales metastásicas en el GC predice, de forma precisa, la ausencia de metástasis en los nodos axilares restantes.. Los GC extraídos se analizan por medio de tinción con hematoxilina-eosina (H&E) y por tinción inmunohistoquímica (IHQ). Se ha demostrado que con estas técnicas se produce un número importante de falsos negativos, quedando metástasis ocultas sin identificar..

Circulating tumoral cells in colorectal and breast cancer

Las metástasis de los tumores sólidos se producen cuando las células del tumor primario adquieren la capacidad de migrar a través del sistema circulatorio y/o linfático y origina nuevos tumores es lugares distantes del organismo. Estas Células Tumorales Circulantes (CTC) se pueden detectar debido a su origen epitelial, ya que este tipo celular no suele presentarse en el torrente circulatorio de individuos sanos. Para aislar y cuantificar las CTC se emplea el sistema CellSearch, de Veridex; el cual está aprobado por la FDA y constituye una novedosa tecnología altamente reproducible y con resultados fiables. Esta tecnología está basada en una extracción inmunomagnética a partir de 7,5 mL de sangre y un análisis citométrico de las muestras. En esta presentación se realiza, por una parte, una introducción a la tecnología en cuanto a su utilización e interpretación de los resultados y, por otra parte, se exponen dos protocolos llevados a cabo en nuestro laboratorio con pacientes de cáncer de mama y cáncer de colón de los cuales se extraen importantes conclusiones en relación al manejo de estos pacientes por el clínico y al pronóstico de su enfermedad. A la luz de los resultados obtenidos se puede concluir que esta tecnología se muestra cada vez más apta para su utilización en la práctica clínica, tratándose además de una prueba levemente invasiva, como es un análisis de sangre y cuyos resultados son un reflejo de la enfermedad casi a tiempo real.Sección Deptal. de Bioquímica y Biología Molecular (Biológicas)Fac. de Ciencias BiológicasTRUEunpu

COMPARACIÓN ENTRE DIFERENTES TÉCNICAS DE ESTUDIO DEL GANGLIO CENTINELA DESPUÉS DE NEOADYUVANCIA EN CÁNCER DE MAMA

<p><span style="color: #000000;"><strong>RESUMEN</strong></span> </p><table width="100%" border="0" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td valign="top" width="98%"><p><strong>Introducción</strong>. El papel de la biopsia del ganglio centinela realizada después de quimioterapia neoadyuvante es controvertido. El objetivo del presente estudio es analizar el valor del ganglio centinela en los tumores de mama avanzados que han recibido neoadyuvancia y estudiarlos con técnicas de hematoxilina y eosina, inmunohistoquímica y molecular de reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR). <strong>Material y métodos. </strong>Un total de 33 pacientes fueron incluidos en el estudio; estos enfermos recibieron neoadyuvancia y se les  realizó la técnica del ganglio centinela. Una vez  extraído el ga nglio, este era enviado a anatomía patológica, donde era evaluado y posteriormente se fragmentaba, utilizando entre un 25% y 50% del ganglio para el estudio en el laboratorio de biología molecular. <strong>Resultados. </strong>Los ganglios centinelas se estudiaron con las técnicas de hematoxilina y eosina, inmunohistoquímica y la molecular, encontrando un incremento de la sensibilidad con la última técnica, la del RT-PCR. Los ganglios centinelas fueron negativos en un 45.1% y las linfadenectomías fueron negativas en un 61.3% después de neoadyuvancia. Las recidivas locales a 5 años equivalen al 8.3%. Para nuestra serie la tasa de sobrevida libre de enfermedad a 5 años en estadio II es del 100% y en estadio III es del 87.5%. <strong>Conclusión</strong>. Existe un escaso número de pacientes estudiadas, sin un seguimiento que avale el uso de la biopsia del ganglio centinela después de neoadyuvancia, por lo que actualmente sólo debiera realizarse con fines de investigación.</p><p><span style="color: #00c000; font-family: Arial; font-size: small;"><span style="color: #000000;">Al comparar las técnicas de hematoxilina y eosina, inmunohistoquímica y molecular, comprobamos mayor sensibilidad en la técnica molecular, lo cual permite disminuir los falsos negativos y tener un mejor diagnóstico de las metástasis en los ganglios centinela.</span></span></p><p> </p><p><strong>Palabra clave:</strong> Técnica del ganglio centinela, carcinoma de mama avanzado, estudio molecular RT-PCR.</p><p> </p><p><strong>ABSTRACT</strong></p><p align="center"><strong><em>A COMPARISON BETWEEN DIFFERENT SENTINEL NODE DETECTION </em><em>TECHNIQUES AFTER NEOADJUVANCY IN BREAST CANCER</em></strong></p><p> </p><p><strong>Introduction. </strong>Since the role of sentinel node biopsy after neoadjuvant chemotherapy is controversial, the aim of our study was to analyze the value of sentinel node detection in advanced breast tumors that received neoadjuvant therapy. Technical study was done with hematoxylin/eosin stain, immunohistochemistry and molecular polymerase chain reaction (RT-PCR). <strong>Material and methods:</strong>We studied 33 patients who received neoadjuvant therapy and underwent sentinel node procedure. After removing the node, it was sent to pathology where it was evaluated; further fragments, using between 25% and 50% of the lymph node, were used for analysis at the molecular biology laboratory. </p><p><strong>Results</strong>: The sentinel nodes were studied with hematoxylin and eosin, immunohistochemistry and molecular techniques, finding an increase in sensitivity with RT-PCR. They were negative in 45.1% and lymphadenectomy tissue was negative in 61.3% after neoadjuvant therapy. Local recurrences at 5 years are equivalent to 8.3%. For our series the rate of disease-free survival at 5 years in stage II is 100% and stage III is 87.5%. <strong>Conclusion. </strong>Sentinel node biopsy after neoadjuvant therapy for breast cancer should only be a matter of research, since the number of studied patients is small and there have been no monitoring to endorse a wide use of the procedure. When comparing hematoxylin/eosin, immunohistochemistry and molecular techniques, increased sensitivity was found with the molecular one; RT-PCR can reduce false negative reports and furnish a better diagnosis of sentinel node metastases. </p><p><strong>Key words</strong>: Sentinel node technique, advanced breast cancer, molecular study RT-PCR.</p></td></tr></tbody></table&gt

Genetic alterations of IDH1 and Vegf in brain tumors

BACKGROUND: This study evaluates the presence of R132H mutation in isocitrate dehydrogenase (IDH1) gene and the vascular endothelial growth factor (VEGF) +936 C/T polymorphism in brain tumors. The impact of these genetic alterations on overall survival (OS) and progression free survival (PFS) was evaluated. METHODS: A cohort of 80 patients surgically treated at Hospital Clínico San Carlos, Madrid, between March 2004 and November 2012, was analyzed. Tumors were distributed in 73 primary brain tumors (gliomas, meningiomas, hemangiopericytomas and hemangioblastomas) and seven secondary tumors evolved from a low grade glioma, thus providing a mixed sample. RESULTS: IDH1 R132H gene mutation was found in 12 patients (15%) and appears more frequently in secondary tumors (5 (71.4%) whereas in 7 (9.7%) primary tumors (p < .001)). The mutation is related to WHO grade II in primary tumors and a supratentorial location in secondary tumors. The OS analysis for IDH1 showed a tendency towards a better prognosis of the tumors containing the mutation (p = .059).The IDH1 R132H mutation confers a better PFS (p = .025) on primary tumors. The T allele of VEFG +936 C/T polymorphism was found in 16 patients (20%). No relation was found between this polymorphism and primary or secondary tumor, neither with OS or PFS. CONCLUSIONS: IDH1 R132H gene mutation is exclusive in supratentorial tumors and more frequent in secondary ones, with a greater survival trend and better PFS in patients who carry it. The T allele of VEGF +936 C/T polymorphism is more common in primary tumors, although there is no statistical relation with survival.S