Resistencia de tres poblaciones de Rhipicephalus microplus a la ivermectina por el ensayo de inmersión de larvas

ABSTRACT: in Colombia, the control of tick infestation in cattle is almost exclusively performed with chemical acaricides. It is important to determine the degree of resistance of Riphicephalus microplus field populations to ivermectins (IVM) as the first step to design strategies to increase the useful life of acaricides and decrease the reliance on chemical controls. Objective: to test the degree of resistance to IVM. Methods: three cattle farms in Antioquia (Colombia) where IVM had previously failed to control infestations of R. microplus ticks were studied. Ticks were collected several months apart in 2013, and the larval immersion test (LIT) was performed on the progeny of the adult females. Concentration-mortality data were subjected to probit analysis. Results: the three populations showed lethal concentrations (LC) 50 and 99 of ≥ 30 ppm and ≥ 400 ppm, respectively. There was no difference observed in the LC at different times of collection for each population studied. Such high values for LC, together with very low regression slopes (≤ 2), indicated a very heterogeneous response to increasing concentrations of IVM, which is common for resistant populations. At two farms, subcutaneous injection with a long-acting formulation of IVM at a dosage of 630 μg/Kg was ineffective at eliminating existing infestations and protecting against reinfestations, confirming farmer suspicions of lost efficacy. Conclusion: epidemiological studies are necessary to assess the current status of resistance to IVM in this region of Colombia, and it is likely that the intensive use of IVM will aggravate this situation in the future.RESUMEN: en Colombia, el control de la infestación de garrapatas en el ganado se ha realizado casi exclusivamente con acaricidas químicos y es importante determinar el grado de resistencia de las poblaciones de campo de Riphicephalus microplus a ivermectinas (IVM) como el primer paso para diseñar tácticas que aumenten su vida útil y disminuyan la dependencia de los controles químicos. Objetivo: probar el grado de resistencia a IVM. Métodos: se evaluó la resistencia de R. microplus a IVM en tres fincas ganaderas en Antioquia (Colombia) donde se sospechaba que productos con IVM estaban fracasando para controlar infestaciones por garrapatas. Se recolectaron garrapatas con varios meses de diferencia durante el año 2013 y se empleó la prueba de inmersión de larvas (LIT) con la descendencia de las hembras adultas. Los datos de concentraciónmortalidad fueron sometidos a análisis probit. Resultados: los resultados para las tres poblaciones estudiadas mostraron concentraciones letales (LC) 50 y 99 de ≥ 30 ppm y ≥ 400 ppm, respectivamente. No se observó diferencia en las LC obtenidas en diferentes momentos de recogida para cada población estudiada. Los altos valores de LC, junto con pendientes muy bajas en las rectas de regresión (≤ 2), indicaron una respuesta muy heterogénea a concentraciones crecientes de IVM, propio de poblaciones resistentes. En dos de las granjas, la administración de inyecciones subcutáneas con una formulación de acción prolongada de la IVM a dosis de 630 μg/Kg fue incapaz de eliminar las infestaciones y proteger frente a reinfestaciones, confirmando las sospechas de los ganaderos de pérdida de eficacia. Conclusión: estudios epidemiológicos son necesarios para evaluar el estado actual de la resistencia a IVM en esta región de Colombia, y es probable que el uso intensivo de IVM agrave esta situación en el futuro

Asociación de los alelos BoLA-DRB3 y TLR4 con mastitis subclínica en vacas de Colombia

ABSTRACT: molecular markers for genetic resistance can be used to control mastitis in dairy cattle. The Major Histocompatibility Complex and the Toll-like receptor 4 (TLR4) are two promising genes that warrant investigation. Objective: to identify associations between genotypes of BoLA-DRB3 locus and T4CRBR2 fragment and subclinical mastitis (SM). Methods: 996 lactating cows from 32 herds comprising Holstein (80%), Holstein x Jersey cross (12.5%), and other crosses (7.5%) were evaluated monthly during two years, diagnosed for SM and genotyped for the second exon of BoLA DRB3 and the TLR4 coreceptor-binding region 2 (T4CRBR2) using a Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism technique (PCR-RFLP). The association between candidate alleles and subclinical mastitis was measured by logistic regression. Results: the most frequently observed alleles for BoLA-DRB3 were DRB3.2 *8, *22, *24, *16, *10, *23, *gba, *11, *2, *mbb, *jba, *3, and *15, accounting for 58.9% of the population. Frequencies for T4CRBR2 alleles A and B were 0.352 and 0.647, respectively. Based on 57,408 observations during the period, the mean SM prevalence was 16.2% (95% CI 13.0 and 19.4) per udder quarter and 37.6% (95% CI 32.1 and 43.2) per cow. The predominant microorganisms isolated from SM quarters were Streptococcus agalactiae and Coagulase-Negative Staphylococci (CNS). Allele DRB3.2 *23 was associated with SM occurrence and CNS infection. No alleles were associated with Streptococcus agalactiae infection. Allele *mbb was associated with occurrence of CNS infection and alleles *jba and *15 were associated with resistance to CNS infection. No significant relationship between T4CRBR2 and SM was observed. Conclusion: DRB3.2 gen may play an important role in the occurrence of SM and certain alleles may confer resistance to specific pathogens.RESUMEN: los marcadores moleculares genéticos de resistencia para mastitis bovina son una herramienta para el control de la enfermedad en rebaños lecheros. Los genes del Complejo Mayor de Histocompatibilidad y el Receptor tipo Toll 4 (TLR4) son dos genes candidatos promisorios que justifica investigar. Objetivo: identificar asociaciones entre los genotipos del locus BoLA-DRB3 y del fragmento T4CRBR2 con la ocurrencia de mastitis subclínica. Métodos: 996 vacas lactantes de 32 hatos de las razas Holstein (80%), Holstein x Jersey (12,5%) y otros cruces (7,5%), fueron visitadas mensualmente por dos años, diagnosticadas para mastitis subclínica y genotipificadas para el segundo exón del DRB3 y para la región 2 de unión al correceptor del TLR4 (T4CRBR2) por medio de las técnicas de Reacción en cadena de la polimerasa y de Longitud del polimorfismo del fragmento de restricción (PCR-RFLP). La asociación entre los alelos candidatos y la mastitis subclínica se midió por regresión logística. Resultados: los alelos más frecuentes para el DRB3.2 fueron *8, *22, *24, *16, *10, *23, *gba, *11, *2, *mbb, *jba, *3 y *15, que suman el 58,9% del total en la población. Las frecuencias para los alelos A y B del T4CRBR2 fueron de 0,352 y 0,647, respectivamente. Basados en 57.408 observaciones, la prevalencia de MS a nivel de cuarto fue 16,2% (95% IC 13,0 y 19,4) y a nivel de vaca fue de 37,6% (95% IC 32,1 y 43,2). Los microorganismos más frecuentes fueron Streptococcus agalactiae y Estafilococo Coagulasa Negativo (ECN). El alelo DRB3.2 *23 fue el más asociado con la ocurrencia de MS y con la infección por ECN. No se hallaron alelos asociados a infección con mastitis por Streptococcus agalactiae. Con respecto a la infección por ECN, el *mbb se asoció con la ocurrencia y los alelos *jba y *15 se asociaron con resistencia. No se observó asociación entre T4CRBR2 y MS. Conclusión: el gen DRB3.2 puede jugar un papel importante en la presencia de MS y ciertos alelos pueden conferir resistencia a patógenos específicos

Prevalencia de parásitos gastrointestinales en equinos y factores de riesgo asociados en varias zonas de Antioquia, Colombia

ABSTRACT: There are few reports on the prevalence of gastrointestinal parasites in equines in Colombia. In this study, 946 horses were sampled from a total of 204 farms in the municipalities of Rionegro and those that comprise the Valle de Aburrá, in the department of Antioquia. Fecal samples were taken directly from the rectum and processed by the McMaster, Baermann and Graham techniques. The prevalence of parasites at the farm level was 56.3% for Strongylidae, 10.7% for Strongyloides spp, 2.8% for Oxyuridae and 0.3% for Dictyocaulus spp. From a practical point of view, the most pathogenic parasites and of greatest resistance concern were the Cyathostomids, which are included within the Strongylidae and whose prevalence was greater than 50%. The OR of presenting Strongylidae was 49% lower in equines that participated in fairs compared to those that did not. The OR of presenting Strongylidae was 56% lower in equines that use stables than those not being stalled. Also, the OR of being positive to Oxyuris equi was 88% lower in animals that participate in fairs compared to those that did not, and was 3.66 times higher in equines with body condition ≤ 2 in comparison with those of body condition ≥3. Based on this information, it is important to initiate studies that evaluate the state of antihelminthic resistance and the relationship between parasitic load and clinical condition in order to determine the real impact of these parasites on the equines of these regions.RESUMEN: Existen pocos reportes de la prevalencia de parásitos gastrointestinales en equinos en Colombia. En este estudio se muestrearon 946 caballos de un total de 204 predios en los municipios de Rionegro y los que comprenden el Valle de Aburra departamento de Antioquia. La materia fecal fue tomada directamente del recto y procesada por las tecnicas de McMaster, Baermann y Graham. La prevalencia de parásitos a nivel de predios fue del 56,3% para Strongylidae, 10,7% para Strongyloides spp, 2,8% para Oxyuridae y 0,3% para Dictyocaulus spp. Desde el punto de vista práctico, los más patogénicos y de mayor problema de resistencia son los Cyathostomidos, que se incluyen dentro de los Strongylidae y cuya prevalencia fue superior al 50%. El OR de presentar Strongylidae es 49% menor en equinos que participan en ferias en comparación con los que no lo hacen. El OR de presentar Strongylidae es 56% menor en equinos que usan pesebrera en comparación con los que no la usan. Por su parte, el OR de ser positivo a Oxyuris equi es 88% menor en animales que salen a ferias en comparación con los que no salen a feria y el OR de ser positivo a Oxyuris equi es 3,66 veces mayor en equinos con condición corporal ≤2 en comparación con equinos de condición corporal ≥3. Con base en esta información es importante iniciar estudios de resistencia a antihelminticos y evaluar la relación entre la carga parasitaria y las posibles afecciones clínicas para así determinar el impacto real de estas parasitosis en los equinos de estas regiones

Prevalence of Babesia Caballi, Theileria Equi and Trypanosomiasis and analysis of risk factors in horses of Antioquia, Colombia

ABSTRACT: This research was carried out due to the little existing national information on equine hemoparasites; the objective was to determine babesiosis and trypanosomiasis prevalence in the Aburrá Valley and Rionegro Antioquia (Colombia) as well as some risk factors associated with the seropositivitie of these diseases. In 223 lots with a population of 1.008 equine venous blood sample was taken for serological diagnosis and molecular. Epidemiological information was obtained through the application of a survey addressed to persons in charge of the animals. For the statistical analysis, Chi square of independence or Fisher’s Exact Test was applied when necessary. For the bivariate associations, risk estimates (OR) were calculated by explanatory variable, with their respective 95% confidence intervals (95% CI).It was found a prevalence of 11.9% for babesiosis and 1.9% for trypanosomiasis and as protection factor found the fact of going to trade fairs. Geographic location, sex and being neutered, be positive for Equine Infectious Anemia (AIE), strongyles or oxiurus was a risk factor for piroplasmosis. For Trypanosomiasis the risk factor was to be infested with ticks Dermacentor nitens or be mule. Methods of active epidemiological surveillance should be reinforced, especially in cases of continuous mobilization of equines or development of events that involve massive presence of horses.RESUMEN: La investigación se llevó a cabo debido a la poca información nacional existente en hemoparásitos equinos y su objetivo fue determinar la prevalencia de babesiosis y tripanosomiasis, en el Valle de Aburrá y Rionegro, municipios de Antioquia (Colombia), así como algunos factores de riesgo asociados a la presentación de seropositividad, a estas enfermedades. En 223 predios, con una población de 1.008 equinos, se tomó muestra de sangre venosa, para realizar el diagnóstico serológico y molecular. La información epidemiológica fue obtenida a través de la aplicación de una encuesta dirigida a las personas a cargo de los animales. Para el análisis estadístico, se aplicó Chi cuadrado de independencia y la Prueba Exacta de Fisher, cuando fue necesario. Para las asociaciones bivariadas, se calcularon estimaciones del riesgo (OR) por variable explicativa, con sus respectivos intervalos de confianza, del 95% (I.C. 95%). Se encontró una prevalencia del 11,9%, para babesiosis y de 1,9%, para tripanosomiasis; como factor de protección, se encontró el hecho de salir a una feria. Para la piroplasmosis, el lugar geográfico, el sexo, estar castrado, ser positivos a Anemia Infecciosa Equina (AIE), estrongilidos u oxiurus fueron factores de riesgo. Para tripanosomiasis, el factor de riesgo fue estar infestado con Dermacentor nitens o ser mular. Se deben reforzar métodos de vigilancia epidemiológica activa, sobre todo, en casos de movilización continua de equinos o desarrollo de eventos, que involucren presencia masiva de ejemplares

Pruebas de diagnóstico para el hiperadrenocorticismo canino: caso clínico

An 11.5-year-old Poodle was referred with an uncertain history of possible hyperadrenocorticism. Physical examination and paraclinical examinations revealed the following presumptive signs of hyperadrenocorticism: lethargy, abdominal distension, polydipsia/polyuria, panting, hyposthenuria, lymphopenia, elevated liver enzymes. Two hormonal tests were performed to assess the hypothalamus-hypophysis (or pituitary)-adrenal axis (HHA or HPA): low dose dexamethasone suppression test and measurement of endogenous corticotropic hormone (ACTH). Baseline serum cortisol was slightly elevated with a value of 8.52 µg / dL (normal = 1.8 - 6.0). Cortisol values at 4 and 8 hours post-dexamethasone administration were 2.46 and 6.91 µg/dL, respectively. These results showed a lack of suppression at 4 hours (with concentrations above 1.4 µg/dL) and 8 hours (concentrations >50% the baseline value). Furthermore, because cortisol values were 2.4 µg/dL at 4 hours post-administration of dexamethasone (exceeding the cut-off point of 1.4 µg/dL), the hyperadrenocorticism was not suggestive of pituitary origin but caused by tumor/s in the adrenal glands. The diagnosis was corroborated by an endogenous ACTH test, whose values ​​were below the reference range: 10 pg/mL (15.0 - 60.0 pg/mL). In conclusion, the steps to follow in the diagnosis of hyperadrenocorticism begin with a good clinical and laboratory analysis before performing specific hormonal tests to assess the HPA axis. From the point of view of therapy, it is important to differentiate between hyperadrenocorticism of pituitary and adrenal origin.Canina raza caniche de 11.5 años se remitió con una historia incierta de posible hiperadrenocorticismo. La exploración física y exámenes paraclínicos evidenciaron signos y hallazgos presuntivos de hiperadrenocorticismo incluyendo: letargo, distensión abdominal, polidipsia/poliuria, jadeo, hipostenuria, linfopenia, elevación de enzimas hepáticas. Se hicieron dos pruebas hormonales de valoración del eje hipotálamo-hipófisis (o pituitaria)-adrenales (HHA ó HPA): prueba de supresión con dosis baja de dexametasona y medición de la hormona corticotropa (ACTH) endógena. El cortisol basal en suero estaba ligeramente elevado con un valor de 8.52 µg/dL (normal = 1.8 – 6.0). Los valores de cortisol a las 4 y 8 horas post-administración de dexametasona fueron de 2.46 y 6.91 µg/dL, respectivamente. Dichos resultados evidenciaron una falta de supresión a las 4 horas (concentraciones >1.4 µg/dL) y 8 horas (concentraciones >50% del valor basal). Además, el hecho de que a las 4 horas post-administración de dexametasona los valores estuviesen en 2.4 µg/dL, superando el punto de corte de 1.4 µg/dL, es sugerente de que el hiperadrenocorticismo no era de origen pituitario y sí de origen adrenal. El diagnóstico fue corroborado por la prueba endógena de ACTH, cuyos valores estuvieron por debajo del rango de referencia: 10 pg/mL (15,0 - 60,0 pg/mL). En conclusión, los pasos a seguir en el diagnóstico de hiperadrenocorticismo comienzan por un buen análisis clínico y laboratorial antes de realizar pruebas hormonales específicas para valorar el eje HPA. Del punto de vista de la terapia, es importante diferenciar entre hiperadrenocorticismo de origen pituitario y adrenal

Estudio transversal de 13 serovares de Leptospira en vacas en una region lechera colombiana

ABSTRACT:Leptospirosis in cattle is recognized as a major cause of reproductive loses due to abortions, early embryonic death, and infertility. The type of Leptospira serovars that are currently circulating in Colombian herds is largely unknown due to the lack of national reports. Objective: The prevalence of antibodies specific to 13 Leptospira spp serovars was investigated in unvaccinated cows from 26 herds in San Pedro de los Milagros (Province of Antioquia) dairy region. Methods: Microscopic agglutination test was used on serum samples, following WHO recommendations. Results: A total of 112/900 (12.4%) of the animals had antibody titers of 1:100 or greater to at least one Leptospira serovar. Of those positive, 34/900 (3,8%) animals seroconverted to two or more serovars. In order of decreasing prevalence, the serovars detected were: hardjo prajitno, pomona, grippotyphosa, tarassovi, copenhageni, canicola, cellodeni and bratislava. There were 28 animals seropositive.RESUMEN:la leptospirosis es la mayor causal de pérdidas reproductivas debidas a abortos, muerte embrionaria temprana e infertilidad. Se desconocen los serovares de Leptospira que actualmente se encuentran circulando en el rebaño colombiano debido a la falta de reportes nacionales. Objetivo: se investigó la prevalencia de anticuerpos específicos para 13 serovares de Leptospira spp en vacas no vacunadas de 26 rebaños en la región lechera de San Pedro de los Milagros (Provincia de Antioquia). Métodos: La prueba de aglutinación microscópica fue empleada en muestras de suero de acuerdo a las recomendaciones de la OMS. Resultados: un total de 112/900 (12,4%) de los animales presentaron títulos de anticuerpos de 1:100 o superiores para al menos un serovar de Leptospira. Entre los positivos, el 34/900 (3,8%) de los animales presentaron seroconversión para dos o más serovares. En orden decreciente de prevalencia, los serovares detectados fueron: hardjo prajitno, pomona, grippotyphosa, tarassovi, copenhageni, canicola, cellodeni y Bratislava. En total, 28 animales fueron seropositivos al serovar hardjo. Conclusion: La leptospirosis deberia ser incluida como diagnostico diferencial en problemas reproductivos en esta región

Reduced Efficacy of Commercial Acaricides against Populations of Resistant Cattle Tick Rhipicephalus microplus from Two Municipalities of Antioquia, Colombia

Two distant Antioquian cattle farms where systemic and topical acaricides had previously failed to control infestations by Rhipicephalus ( Boophilus) microplus were studied. An initial in vivo study was conducted using single subcutaneous injections with a long-acting formulation of ivermectin (630 μg/kg). Injections were made at 3-month intervals on animals at each farm to evaluate the therapeutic and persistent efficacy of ivermectin against R. microplus. Body tick counts and reproductive parameters of semi- or fully engorged females ≥5 mm) were assessed at 10-day intervals, and since no negative control group could be included, values were compared against those for day 0. Although there was an overall reduction of 50%-75% in tick numbers that persisted for 30-40 days, it was not significantly different at one of the farms and not enough to afford protection from severe infestations. The engorgement weight and egg mass weight of ticks from treated animals were significantly lower throughout the 50-day posttreatment period. Egg hatch was not significantly reduced posttreatment and remained at levels of 80%-90%. A random selection of 9 out of 28 commercial formulations of ivermectin sold in Colombia were analyzed by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). All were within the expected labeled concentration (∓15% deviation) of 1% and 3.15% ivermectin except for one. A popular unregistered injectable widely used in both farms and labeled as “natural pyrethrin”, was found to contain 10.5% ivermectin. An adult immersion test was conducted to evaluate the efficacy of topical acaricides to recommended concentrations of five commercial products and/or their combinations. Efficacy was determined by comparing the reproductive index of each treated group to that of the control group. Cypermethrin (150 ppm) was completely ineffective at both farms. Amitraz (208 ppm) exhibited low and intermediate efficacies of 14% and 56%. The combination of amitraz (100 ppm) and cypermethrin (150 ppm) was less efficacious than the amitraz alone. A generic product based on amitraz + citronella (208 ppm + 10 ppm, respectively) was shown to be less efficacious than the name-brand amitraz product. Products containing the organophosphate chlorpyrifos or trichlorfon exhibited intermediate efficacies of approximately 60% at the Tarso farm. We conclude that at these two locations, there is a high degree of resistance to many of the acaricides available in Colombia and confirm suspicions that ivermectin is no longer able to eliminate tick infestations