Injection of Pseudomonas aeruginosa Exo Toxins into Host Cells Can Be Modulated by Host Factors at the Level of Translocon Assembly and/or Activity

Pseudomonas aeruginosa type III secretion apparatus exports and translocates four exotoxins into the cytoplasm of the host cell. The translocation requires two hydrophobic bacterial proteins, PopB and PopD, that are found associated with host cell membranes following infection. In this work we examined the influence of host cell elements on exotoxin translocation efficiency. We developed a quantitative flow cytometry based assay of translocation that used protein fusions between either ExoS or ExoY and the ß-lactamase reporter enzyme. In parallel, association of translocon proteins with host plasma membranes was evaluated by immunodetection of PopB/D following sucrose gradient fractionation of membranes. A pro-myelocytic cell line (HL-60) and a pro-monocytic cell line (U937) were found resistant to toxin injection even though PopB/D associated with host cell plasma membranes. Differentiation of these cells to either macrophage- or neutrophil-like cell lines resulted in injection-sensitive phenotype without significantly changing the level of membrane-inserted translocon proteins. As previous in vitro studies have indicated that the lysis of liposomes by PopB and PopD requires both cholesterol and phosphatidyl-serine, we first examined the role of cholesterol in translocation efficiency. Treatment of sensitive HL-60 cells with methyl-ß-cyclodextrine, a cholesterol-depleting agent, resulted in a diminished injection of ExoS-Bla. Moreover, the PopB translocator was found in the membrane fraction, obtained from sucrose-gradient purifications, containing the lipid-raft marker flotillin. Examination of components of signalling pathways influencing the toxin injection was further assayed through a pharmacological approach. A systematic detection of translocon proteins within host membranes showed that, in addition to membrane composition, some general signalling pathways involved in actin polymerization may be critical for the formation of a functional pore. In conclusion, we provide new insights in regulation of translocation process and suggest possible cross-talks between eukaryotic cell and the pathogen at the level of exotoxin translocation

Study of the susceptibility of host cells to toxin injection by the type 3 secretion system of Pseudomonas aeruginosa

La pathogénicité de P. aeruginosa (P. a) repose sur de nombreux facteurs de virulence dont le système de sécrétion de type III (SST3). Ce complexe multiprotéique est constitué d'une aiguille se terminant par un translocon composé des protéines PopB et PopD. En s'insérant dans les membranes plasmiques, le translocon permet le passage des exotoxines dans le cytoplasme de la cellule cible. L'induction de la synthèse et de la sécrétion des exotoxines est dépendante d'un contact entre P. a et la cellule cible. Dans ce travail, nous avons examiné l'influence de facteurs cellulaires sur l'efficacité de translocation des toxines. L'utilisation d'un système rapporteur fluorescent CCF2/β-lactamase a permis de visualiser l'injection de toxine. En parallèle, l'association des protéines du translocon avec la membrane de la cellule hôte a été évaluée par immunodétection de PopB/D après fractionnement des membranes sur gradient de sucrose. Les cellules promyelocytaires HL-60 et promonocytaires U937 sont résistantes à l'injection de toxine, bien que PopB et PopD soient associées à la membrane. Après différenciation en neutrophiles, or monocytes/macrophages, ces cellules deviennent sensibles à l'injection sans que l'on détecte de variation notable de la quantité de protéines du translocon insérées dans la membrane. Le traitement des cellules HL-60 sensibles avec un agent déplétant le cholestérol, entraine une diminution de l'injection de toxine. De plus, la protéine PopB est retrouvée dans la fraction membranaire, obtenue par purification sur gradient de sucrose, contenant le marqueur des radeaux lipidiques flotilline. Par une approche pharmacologique, nous apportons la preuve que, en plus de la composition de la membrane, des voies de signalisation intracellulaires impliquées dans la polymérisation de l'actine sont essentielles pour la formation d'un pore fonctionnel.The pathogenesis of Pseudomonas aeruginosa (P.a) implies multiple virulence factors among which the type III secretion system (T3SS). This multiprotein complex is composed of a needle through which four exotoxins are exported. The protein PopB and PopD form an oligomeric structure (translocon) at the end of the needle that inserts into the host cell membrane and translocates the exotoxins into the cytoplasm. Synthesis and toxin secretion is induced on contact with eukaryotic cell. In this work, we examined the influence of host cell elements on exotoxin translocation efficiency. The delivery of T3SS toxins was investigated using a CCF2/β-lactamase fluorescent reporter system In parallel, the association of translocon proteins with host plasma membranes was evaluated by immunodetection of PopB/D following sucrose gradient fractionation of membranes. Promyelocytic HL-60 cells and promonocytic U937 cells were found to be resistant to toxin injection even though PopB/D associated with host cell plasma membranes. Differentiation of these cells to neutrophil- or macrophage-like cells resulted in an injection-sensitive phenotype without any significant change in the level of membrane-inserted translocon proteins. Treatment of sensitive HL-60 cells with a cholesterol-depleting agent, resulted in a diminished injection of toxin. Moreover, the PopB translocator was found in the membrane fraction obtained from sucrose-gradient purifications and containing lipid-raft marker flotillin. Through a pharmacological approach, we brought evidence that, in addition to membrane composition, some general signalling pathways involved in actin polymerization may be critical for the formation of a functional pore

Etude de la susceptibilité des cellules eucaryotes à l'injection de toxines par le système de sécrétion de type 3 de Pseudomonas aeruginosa

The pathogenesis of Pseudomonas aeruginosa (P.a) implies multiple virulence factors among which the type III secretion system (T3SS). This multiprotein complex is composed of a needle through which four exotoxins are exported. The protein PopB and PopD form an oligomeric structure (translocon) at the end of the needle that inserts into the host cell membrane and translocates the exotoxins into the cytoplasm. Synthesis and toxin secretion is induced on contact with eukaryotic cell. In this work, we examined the influence of host cell elements on exotoxin translocation efficiency. The delivery of T3SS toxins was investigated using a CCF2/β-lactamase fluorescent reporter system In parallel, the association of translocon proteins with host plasma membranes was evaluated by immunodetection of PopB/D following sucrose gradient fractionation of membranes. Promyelocytic HL-60 cells and promonocytic U937 cells were found to be resistant to toxin injection even though PopB/D associated with host cell plasma membranes. Differentiation of these cells to neutrophil- or macrophage-like cells resulted in an injection-sensitive phenotype without any significant change in the level of membrane-inserted translocon proteins. Treatment of sensitive HL-60 cells with a cholesterol-depleting agent, resulted in a diminished injection of toxin. Moreover, the PopB translocator was found in the membrane fraction obtained from sucrose-gradient purifications and containing lipid-raft marker flotillin. Through a pharmacological approach, we brought evidence that, in addition to membrane composition, some general signalling pathways involved in actin polymerization may be critical for the formation of a functional pore.La pathogénicité de P. aeruginosa (P. a) repose sur de nombreux facteurs de virulence dont le système de sécrétion de type III (SST3). Ce complexe multiprotéique est constitué d'une aiguille se terminant par un translocon composé des protéines PopB et PopD. En s'insérant dans les membranes plasmiques, le translocon permet le passage des exotoxines dans le cytoplasme de la cellule cible. L'induction de la synthèse et de la sécrétion des exotoxines est dépendante d'un contact entre P. a et la cellule cible. Dans ce travail, nous avons examiné l'influence de facteurs cellulaires sur l'efficacité de translocation des toxines. L'utilisation d'un système rapporteur fluorescent CCF2/β-lactamase a permis de visualiser l'injection de toxine. En parallèle, l'association des protéines du translocon avec la membrane de la cellule hôte a été évaluée par immunodétection de PopB/D après fractionnement des membranes sur gradient de sucrose. Les cellules promyelocytaires HL-60 et promonocytaires U937 sont résistantes à l'injection de toxine, bien que PopB et PopD soient associées à la membrane. Après différenciation en neutrophiles, or monocytes/macrophages, ces cellules deviennent sensibles à l'injection sans que l'on détecte de variation notable de la quantité de protéines du translocon insérées dans la membrane. Le traitement des cellules HL-60 sensibles avec un agent déplétant le cholestérol, entraine une diminution de l'injection de toxine. De plus, la protéine PopB est retrouvée dans la fraction membranaire, obtenue par purification sur gradient de sucrose, contenant le marqueur des radeaux lipidiques flotilline. Par une approche pharmacologique, nous apportons la preuve que, en plus de la composition de la membrane, des voies de signalisation intracellulaires impliquées dans la polymérisation de l'actine sont essentielles pour la formation d'un pore fonctionnel

Etude de la susceptibilité des cellules eucaryotes à l'injection de toxines par le système de sécrétion de type 3 de Pseudomonas aeruginosa

The pathogenesis of Pseudomonas aeruginosa (P.a) implies multiple virulence factors among which the type III secretion system (T3SS). This multiprotein complex is composed of a needle through which four exotoxins are exported. The protein PopB and PopD form an oligomeric structure (translocon) at the end of the needle that inserts into the host cell membrane and translocates the exotoxins into the cytoplasm. Synthesis and toxin secretion is induced on contact with eukaryotic cell. In this work, we examined the influence of host cell elements on exotoxin translocation efficiency. The delivery of T3SS toxins was investigated using a CCF2/β-lactamase fluorescent reporter system In parallel, the association of translocon proteins with host plasma membranes was evaluated by immunodetection of PopB/D following sucrose gradient fractionation of membranes. Promyelocytic HL-60 cells and promonocytic U937 cells were found to be resistant to toxin injection even though PopB/D associated with host cell plasma membranes. Differentiation of these cells to neutrophil- or macrophage-like cells resulted in an injection-sensitive phenotype without any significant change in the level of membrane-inserted translocon proteins. Treatment of sensitive HL-60 cells with a cholesterol-depleting agent, resulted in a diminished injection of toxin. Moreover, the PopB translocator was found in the membrane fraction obtained from sucrose-gradient purifications and containing lipid-raft marker flotillin. Through a pharmacological approach, we brought evidence that, in addition to membrane composition, some general signalling pathways involved in actin polymerization may be critical for the formation of a functional pore.La pathogénicité de P. aeruginosa (P. a) repose sur de nombreux facteurs de virulence dont le système de sécrétion de type III (SST3). Ce complexe multiprotéique est constitué d'une aiguille se terminant par un translocon composé des protéines PopB et PopD. En s'insérant dans les membranes plasmiques, le translocon permet le passage des exotoxines dans le cytoplasme de la cellule cible. L'induction de la synthèse et de la sécrétion des exotoxines est dépendante d'un contact entre P. a et la cellule cible. Dans ce travail, nous avons examiné l'influence de facteurs cellulaires sur l'efficacité de translocation des toxines. L'utilisation d'un système rapporteur fluorescent CCF2/β-lactamase a permis de visualiser l'injection de toxine. En parallèle, l'association des protéines du translocon avec la membrane de la cellule hôte a été évaluée par immunodétection de PopB/D après fractionnement des membranes sur gradient de sucrose. Les cellules promyelocytaires HL-60 et promonocytaires U937 sont résistantes à l'injection de toxine, bien que PopB et PopD soient associées à la membrane. Après différenciation en neutrophiles, or monocytes/macrophages, ces cellules deviennent sensibles à l'injection sans que l'on détecte de variation notable de la quantité de protéines du translocon insérées dans la membrane. Le traitement des cellules HL-60 sensibles avec un agent déplétant le cholestérol, entraine une diminution de l'injection de toxine. De plus, la protéine PopB est retrouvée dans la fraction membranaire, obtenue par purification sur gradient de sucrose, contenant le marqueur des radeaux lipidiques flotilline. Par une approche pharmacologique, nous apportons la preuve que, en plus de la composition de la membrane, des voies de signalisation intracellulaires impliquées dans la polymérisation de l'actine sont essentielles pour la formation d'un pore fonctionnel

Etude de la susceptibilité des cellules eucaryotes à l'injection de toxines par le système de sécrétion de type 3 de Pseudomonas aeruginosa

The pathogenesis of Pseudomonas aeruginosa (P.a) implies multiple virulence factors among which the type III secretion system (T3SS). This multiprotein complex is composed of a needle through which four exotoxins are exported. The protein PopB and PopD form an oligomeric structure (translocon) at the end of the needle that inserts into the host cell membrane and translocates the exotoxins into the cytoplasm. Synthesis and toxin secretion is induced on contact with eukaryotic cell. In this work, we examined the influence of host cell elements on exotoxin translocation efficiency. The delivery of T3SS toxins was investigated using a CCF2/β-lactamase fluorescent reporter system In parallel, the association of translocon proteins with host plasma membranes was evaluated by immunodetection of PopB/D following sucrose gradient fractionation of membranes. Promyelocytic HL-60 cells and promonocytic U937 cells were found to be resistant to toxin injection even though PopB/D associated with host cell plasma membranes. Differentiation of these cells to neutrophil- or macrophage-like cells resulted in an injection-sensitive phenotype without any significant change in the level of membrane-inserted translocon proteins. Treatment of sensitive HL-60 cells with a cholesterol-depleting agent, resulted in a diminished injection of toxin. Moreover, the PopB translocator was found in the membrane fraction obtained from sucrose-gradient purifications and containing lipid-raft marker flotillin. Through a pharmacological approach, we brought evidence that, in addition to membrane composition, some general signalling pathways involved in actin polymerization may be critical for the formation of a functional pore.La pathogénicité de P. aeruginosa (P. a) repose sur de nombreux facteurs de virulence dont le système de sécrétion de type III (SST3). Ce complexe multiprotéique est constitué d'une aiguille se terminant par un translocon composé des protéines PopB et PopD. En s'insérant dans les membranes plasmiques, le translocon permet le passage des exotoxines dans le cytoplasme de la cellule cible. L'induction de la synthèse et de la sécrétion des exotoxines est dépendante d'un contact entre P. a et la cellule cible. Dans ce travail, nous avons examiné l'influence de facteurs cellulaires sur l'efficacité de translocation des toxines. L'utilisation d'un système rapporteur fluorescent CCF2/β-lactamase a permis de visualiser l'injection de toxine. En parallèle, l'association des protéines du translocon avec la membrane de la cellule hôte a été évaluée par immunodétection de PopB/D après fractionnement des membranes sur gradient de sucrose. Les cellules promyelocytaires HL-60 et promonocytaires U937 sont résistantes à l'injection de toxine, bien que PopB et PopD soient associées à la membrane. Après différenciation en neutrophiles, or monocytes/macrophages, ces cellules deviennent sensibles à l'injection sans que l'on détecte de variation notable de la quantité de protéines du translocon insérées dans la membrane. Le traitement des cellules HL-60 sensibles avec un agent déplétant le cholestérol, entraine une diminution de l'injection de toxine. De plus, la protéine PopB est retrouvée dans la fraction membranaire, obtenue par purification sur gradient de sucrose, contenant le marqueur des radeaux lipidiques flotilline. Par une approche pharmacologique, nous apportons la preuve que, en plus de la composition de la membrane, des voies de signalisation intracellulaires impliquées dans la polymérisation de l'actine sont essentielles pour la formation d'un pore fonctionnel

Design of original amphiphilic molecules derived from xylose originated from lignocellulosic biomass

Dans un contexte de transition écologique et de prise de conscience environnementale, la chimie s’est tournée vers l’utilisation de ressources renouvelables, et plus particulièrement la ressource bois ces dernières années, en tant que matière première pour la conception de nouvelles molécules ou en tant que substituts de composés pétrochimiques. En France métropolitaine, cette ressource est abondante (31% du territoire est recouvert de forêts), principalement des essences feuillues (62% du volume sur pied). Elle constitue donc une ressource renouvelable et locale de molécules plateformes pour la synthèse. Ces travaux de thèse s’intéressent plus particulièrement au xylose, pentose naturellement présent dans de nombreux végétaux ainsi que dans les bois de feuillus tels que le hêtre, essence prédominante dans la région Grand Est. Ce sucre, couplé à des amines grasses elles-aussi biosourcées, a été utilisé en tant que réactif pour la synthèse de molécules amphiphiles possédant des propriétés tensioactives, moussantes et gélifiantes. Les voies de synthèses ont été pensées pour limiter leur impact environnemental et respecter au mieux les principes de la chimie verte. Les composés cibles sont des composés bimodulaires à lien amine. Ils ont été obtenus par amination réductrice via une réduction par hydrogénation catalytique dans le méthanol avec des rendements allant de 12% à 70%. Tous les composés sont tensioactifs et montrent des propriétés moussantes dans l’eau. Seuls les composés en C16 et C18 permettent d’obtenir des hydrogels à des concentrations massiques inférieures à 5%. Les composés possédant de longues chaînes carbonées (C14 à C18) semblent les plus prometteurs en termes de propriétés physicochimiques. Le composé de type myristique (C14) présente le pouvoir moussant le plus important avec la plus forte capacité de mousse de la gamme et une stabilité de la mousse élevée (le temps de demi-vie de la mousse est supérieur à 24h). Dans une moindre mesure, le dérivé palmitique (C16) possède les mêmes propriétés auxquelles s’ajoutent des propriétés gélifiantes dans l’eau. Le dérivé de type stéarique (C18) présente également des propriétés gélifiantes intéressantes. Ces résultats laissent envisager des applications en détergence ou en cosmétique en tant qu’agents de surface, agents moussants ou agents texturants.To follow the ecological transition and the awareness of ecological issues, chemistry has started to focus on the use of renewable resources, especially wood, as raw material for molecular design and as substitute for petrochemicals. Metropolitan France is a densely forested country (31% of the land is covered by forests), mostly hardwoods (62% of wood volume). Wood is a renewable and local resource of molecular building blocks for chemical syntheses.This thesis focused on xylose which is naturally present in various plants such as Beech. Moreover, Beech is one of the predominant hardwoods in the Grand Est region. This pentose, linked with biobased fatty amines, has been used in this work as raw material for the synthesis of amphiphilic compounds with surfactant, foaming and gelling properties. The synthetic pathways have been designed to minimize environmental impact and to follow the principles of Green Chemistry. The target molecules are bimodular compounds with amine link. They were obtained through reductive amination via catalytic hydrogenation in methanol with yields between 12% and 70%. All the compounds are surfactants and exhibit foaming properties. Only the long-chain compounds (C16 and C18) show gelling properties and allow to form hydrogels at concentrations lower than 5 w%.Regards to physicochemical properties, the long-chain compounds (from C14 to C18) seem to be the most promising products. The myristic compound (C14) exhibits the best foaming ability with the highest foaming capacity and a half-life time of foam above 24 hours. To a lesser extent, the palmitic derivative (C16) shows the same properties plus gelling properties in water. The stearic derivative (C18) also exhibits interesting gelling properties.Considering these results, applications in detergency or in cosmetics as surfactants, foaming agents or texturing agents seem to be possible

The distancing of exiles in Reception and Orientation Centers by social action policies. A social geography of the forms of reception and living conditions of "migrants" in Normandy

Les Centres d’Accueil et d’Orientation (CAO) sont des dispositifs d’hébergement à destination des exilés transitant en France. Ils ont été créés lors du démantèlement de Calais (octobre 2016) pour permettre la mise à l’abri de ces personnes et pour leur proposer un premier suivi administratif et sanitaire. Mais ces centres d’accueil ne sont pas seulement un dispositif d’action sociale. Ils représentent également la néolibéralisation du travail social et sont des lieux où les exilés peuvent être contrôlés et triés dans le but de répondre aux mesures migratoires des Etats européens. Cette thèse vise ainsi à questionner les conséquences de la rencontre des champs de l’action sociale et des politiques publiques sur les bénéficiaires du dispositif et sur les communes d’accueil. Car là aussi les CAO sont des lieux singuliers. Depuis les années 2010, les gouvernements français successifs tendent vers la répartition des exilés entre les régions afin de répartir « la charge » entre les départements pour « désengorger » l’Ile-de-France, polarisante dans les parcours des émigrés. C’est ainsi que les CAO ont été mis en place de façon habituelle dans les grandes villes, mais aussi dans des espaces peu denses (petites villes et espaces ruraux) auprès de populations locales qui n’avaient parfois jamais rencontré de personnes étrangères. L’arrivée d’exilés dans ces espaces n’est toutefois pas nouvelle : de nombreux maires avaient déjà accueillis sur leurs communes des personnes étrangères, et des centres d’accueil (CADA) ont également pu être créés dans ce type de communes. Néanmoins les CAO ont permis une répartition de grande ampleur des exilés dans ces espaces, qui a ainsi donné l’occasion à l’Etat d’assurer et de pérenniser la dispersion des exilés hors des grandes villes. Ces arrivées ont changé les dynamiques sociales des espaces d’accueil.Reception and Orientation Centers (CAO) are accommodation schemes for exiles in transit in France. They were created during the dismantling of Calais (October 2016) to provide shelter for these people and to offer them initial administrative and health monitoring. But these reception centers are not only a social action measure. They also represent the neoliberalization of social work and are places where exiles can be controlled and sorted in order to respond to the migration measures of European states. This thesis aims to question the consequences of the meeting of the fields of social action and public policies on the beneficiaries of the scheme and on the host municipalities. Here again, CAOs are unique places. Since the 2010s, successive French governments have tended to distribute exiles among the regions in order to spread the "burden" among the counties and "relieve" the Ile-de-France, which is a focal point in the migrants' journeys. This is how CAOs were usually created in large cities, but also in sparsely populated areas (small towns and rural areas) with local populations who had sometimes never met foreigners. However, the arrival of exiles in these areas is not new: many mayors had already welcomed foreigners in their municipalities, and reception centers (CADA) had also been created in this type of municipality. However, the CAOs have enabled a large-scale distribution of exiles in these areas, which has given the state the opportunity to ensure and perpetuate the dispersion of exiles outside the major cities. These arrivals have changed the social dynamics of the hosting spaces

Etude de la susceptibilité des cellules eucaryotes à l'injection de toxines par le système de sécrétion de type 3 de Pseudomonas aeruginosa

La pathogénicité de P. aeruginosa (P. a) repose sur de nombreux facteurs de virulence dont le système de sécrétion de type III (SST3). Ce complexe multiprotéique est constitué d'une aiguille se terminant par un translocon composé des protéines PopB et PopD. En s'insérant dans les membranes plasmiques, le translocon permet le passage des exotoxines dans le cytoplasme de la cellule cible. L'induction de la synthèse et de la sécrétion des exotoxines est dépendante d'un contact entre P. a et la cellule cible. Dans ce travail, nous avons examiné l'influence de facteurs cellulaires sur l'efficacité de translocation des toxines. L'utilisation d'un système rapporteur fluorescent CCF2/b-lactamase a permis de visualiser l'injection de toxine. En parallèle, l'association des protéines du translocon avec la membrane de la cellule hôte a été évaluée par immunodétection de PopB/D après fractionnement des membranes sur gradient de sucrose. Les cellules promyelocytaires HL-60 et promonocytaires U937 sont résistantes à l'injection de toxine, bien que PopB et PopD soient associées à la membrane. Après différenciation en neutrophiles, or monocytes/macrophages, ces cellules deviennent sensibles à l'injection sans que l'on détecte de variation notable de la quantité de protéines du translocon insérées dans la membrane. Le traitement des cellules HL-60 sensibles avec un agent déplétant le cholestérol, entraine une diminution de l'injection de toxine. De plus, la protéine PopB est retrouvée dans la fraction membranaire, obtenue par purification sur gradient de sucrose, contenant le marqueur des radeaux lipidiques flotilline. Par une approche pharmacologique, nous apportons la preuve que, en plus de la composition de la membrane, des voies de signalisation intracellulaires impliquées dans la polymérisation de l'actine sont essentielles pour la formation d'un pore fonctionnel.The pathogenesis of Pseudomonas aeruginosa (P.a) implies multiple virulence factors among which the type III secretion system (T3SS). This multiprotein complex is composed of a needle through which four exotoxins are exported. The protein PopB and PopD form an oligomeric structure (translocon) at the end of the needle that inserts into the host cell membrane and translocates the exotoxins into the cytoplasm. Synthesis and toxin secretion is induced on contact with eukaryotic cell. In this work, we examined the influence of host cell elements on exotoxin translocation efficiency. The delivery of T3SS toxins was investigated using a CCF2/b-lactamase fluorescent reporter system In parallel, the association of translocon proteins with host plasma membranes was evaluated by immunodetection of PopB/D following sucrose gradient fractionation of membranes. Promyelocytic HL-60 cells and promonocytic U937 cells were found to be resistant to toxin injection even though PopB/D associated with host cell plasma membranes. Differentiation of these cells to neutrophil- or macrophage-like cells resulted in an injection-sensitive phenotype without any significant change in the level of membrane-inserted translocon proteins. Treatment of sensitive HL-60 cells with a cholesterol-depleting agent, resulted in a diminished injection of toxin. Moreover, the PopB translocator was found in the membrane fraction obtained from sucrose-gradient purifications and containing lipid-raft marker flotillin. Through a pharmacological approach, we brought evidence that, in addition to membrane composition, some general signalling pathways involved in actin polymerization may be critical for the formation of a functional pore.SAVOIE-SCD - Bib.électronique (730659901) / SudocGRENOBLE1/INP-Bib.électronique (384210012) / SudocGRENOBLE2/3-Bib.électronique (384219901) / SudocSudocFranceF