Novel site-specific PEGylated L-asparaginase

L-asparaginase (ASNase) from Escherichia coli is currently used in some countries in its PEGylated form (ONCASPAR, pegaspargase) to treat acute lymphoblastic leukemia (ALL). PEGylation refers to the covalent attachment of poly(ethylene) glycol to the protein drug and it not only reduces the immune system activation but also decreases degradation by plasmatic proteases. However, pegaspargase is randomly PEGylated and, consequently, with a high degree of polydispersity in its final formulation. In this work we developed a site-specific N-terminus PEGylation protocol for ASNase. The monoPEG-ASNase was purified by anionic followed by size exclusion chromatography to a final purity of 99%. The highest yield of monoPEG-ASNase of 42% was obtained by the protein reaction with methoxy polyethylene glycol-carboxymethyl N-hydroxysuccinimidyl ester (10kDa) in 100 mM PBS at pH 7.5 and PEG:ASNase ratio of 25:1. The monoPEG-ASNase was found to maintain enzymatic stability for more days than ASNase, also was resistant to the plasma proteases like asparaginyl endopeptidase and cathepsin B. Additionally, monoPEG-ASNase was found to be potent against leukemic cell lines (MOLT-4 and REH) in vitro like polyPEG-ASNase. monoPEG-ASNase demonstrates its potential as a novel option for ALL treatment, being an inventive novelty that maintains the benefits of the current enzyme and solves challenges.publishe

Post-intervention Status in Patients With Refractory Myasthenia Gravis Treated With Eculizumab During REGAIN and Its Open-Label Extension

OBJECTIVE: To evaluate whether eculizumab helps patients with anti-acetylcholine receptor-positive (AChR+) refractory generalized myasthenia gravis (gMG) achieve the Myasthenia Gravis Foundation of America (MGFA) post-intervention status of minimal manifestations (MM), we assessed patients' status throughout REGAIN (Safety and Efficacy of Eculizumab in AChR+ Refractory Generalized Myasthenia Gravis) and its open-label extension. METHODS: Patients who completed the REGAIN randomized controlled trial and continued into the open-label extension were included in this tertiary endpoint analysis. Patients were assessed for the MGFA post-intervention status of improved, unchanged, worse, MM, and pharmacologic remission at defined time points during REGAIN and through week 130 of the open-label study. RESULTS: A total of 117 patients completed REGAIN and continued into the open-label study (eculizumab/eculizumab: 56; placebo/eculizumab: 61). At week 26 of REGAIN, more eculizumab-treated patients than placebo-treated patients achieved a status of improved (60.7% vs 41.7%) or MM (25.0% vs 13.3%; common OR: 2.3; 95% CI: 1.1-4.5). After 130 weeks of eculizumab treatment, 88.0% of patients achieved improved status and 57.3% of patients achieved MM status. The safety profile of eculizumab was consistent with its known profile and no new safety signals were detected. CONCLUSION: Eculizumab led to rapid and sustained achievement of MM in patients with AChR+ refractory gMG. These findings support the use of eculizumab in this previously difficult-to-treat patient population. CLINICALTRIALSGOV IDENTIFIER: REGAIN, NCT01997229; REGAIN open-label extension, NCT02301624. CLASSIFICATION OF EVIDENCE: This study provides Class II evidence that, after 26 weeks of eculizumab treatment, 25.0% of adults with AChR+ refractory gMG achieved MM, compared with 13.3% who received placebo

Minimal Symptom Expression' in Patients With Acetylcholine Receptor Antibody-Positive Refractory Generalized Myasthenia Gravis Treated With Eculizumab

The efficacy and tolerability of eculizumab were assessed in REGAIN, a 26-week, phase 3, randomized, double-blind, placebo-controlled study in anti-acetylcholine receptor antibody-positive (AChR+) refractory generalized myasthenia gravis (gMG), and its open-label extension

Multivariate analysis to study carcass and ham traits in a pig population for production of dry cured ham

O objetivo desse estudo foi avaliar grupos genéticos utilizando-se técnicas de análise multivariada, e estudar a associação entre características de carcaça e de pernil com utilização da análise de correlações canônicas, em uma população de suínos para produção de presuntos maturados. Os seguintes grupos genéticos foram utilizados: DULL= Duroc x (Landrace x Large White), DULA=Duroc x Landrace, DUWI= Duroc x Large White, WIWI= Large White, DUDU= Duroc. Foram obtidas as seguintes medidas de carcaça: peso da carcaça quente (PCQ), espessura do toucinho (ET) e profundidade do músculo Longissimus (PM); e as seguintes medidas de pernil: peso bruto do pernil (PB), peso refilado do pernil (PR), espessura de gordura da borda interna do pernil (EIN), espessura de gordura da borda externa do pernil (EEX), pH do músculo Semimembranosus (pH) e cor superficial do músculo Semimembranosus (COR). Na avaliação de grupos genéticos, observou-se no diagrama de dispersão em relação às médias canônicas uma considerável distância entre os grupos genéticos DUDU e WIWI referente às características de carcaça, com abate aos 130 kg e aos 160 kg, e de pernil, com abate aos 130 kg. Os animais com 50% Duroc situaram-se próximos nas características de carcaça com abate aos 130 kg e 160 kg e foram pouco divergentes em relação ao grupo DUDU nas características de pernil com abate aos 130 kg. Na análise de agrupamento pelo método do vizinho mais próximo os animais DULL, DULA e DUWI foram agrupados com um nível de similaridade alto, em relação às características de carcaça, com abate aos 130 kg e aos 160 kg, e às características de pernil com abate aos 130 kg. No método de otimização de Tocher, os animais 50 % Duroc foram agrupados com os animais puros Duroc, nas análises relativas às características de Pernil, com abate aos 130 kg, o que indica que os animais 50 % Duroc são próximos dos animais puros Duroc com relação às características de pernil. Com base nos resultados obtidos pode-se recomendar a utilização de animais produtos de cruzamento Duroc x Large White, Duroc x Landrace e Duroc x (Landrace x Large White) para a produção de presunto maturado. No estudo da associação entre as características de carcaça e de pernil foi observado que as características de carcaça e de pernil não são independentes. As correlações canônicas (r) entre os conjuntos de características de carcaça e de pernil com abate aos 130 kg foram 0,77; 0,24 e 0,20 para o primeiro, segundo e terceiro par canônico respectivamente, sendo todas consideradas significativas pelo teste de Wilks (P0,05). Ao examinar o primeiro par canônico, observou-se que a variável PCQ obteve maior correlação com as variáveis canônicas dentro do grupo de características de carcaça com abate aos 130 kg e aos 160 kg. Nas características de pernil, com relação ao primeiro par canônico, as características PB e PR obtiveram as maiores correlações com as variáveis canônicas nos dois pesos de abate, 130 kg e 160 kg. Com relação ao segundo par canônico, as variáveis com maiores valores de correlação com as variáveis canônicas foram ET e PM, sendo o último com valores negativos, para as características de carcaça com abate aos 130 kg e 160 kg. Dentro do conjunto de características de pernil, com abate aos 130 kg e 160 kg, em relação ao segundo par canônico, a característica com maior valor de correlação foi a espessura de gordura da borda externa do pernil (EEX). As correlações entre as características e as variáveis canônicas possibilitaram observar que existe associação entre o peso da carcaça quente (PCQ), o peso bruto do pernil (PB) e o peso refilado do pernil (PR), bem como entre a espessura de toucinho (ET) e a espessura de gordura da borda externa do pernil (EEX). Deste modo, é possível concluir que o grupo de características de carcaça pode ser usado para descarte prévio de animais que não se enquadrem nos padrões estabelecidos para produção de presunto maturado.This study aimed to evaluate genetic groups using multivariate analysis, and to study the association between carcass and ham traits using canonical correlation analysis in a pig population for the production of dry cured ham. The genetics groups were: DULL= Duroc x (Landrace x Large White), DULA= Duroc x Landrace, DUWI= Duroc x Large white, WIWI= Large White, DUDU= Duroc. Carcass traits were obtained: hot carcass weight (HCW), backfat thickness (BT) and loin depth (LD), and ham traits were obtained: gross ham weight (GHW), trimmed ham weight (THW), ham inner layer fat thickness (HIFT), ham outer layer fat thickness (HOFT), pH (PH), and color (COL), with animals slaughtered at 130 kg and at 160 kg weights. In the genetic lines evaluation study, the first and the second canonical variables explained 97.51 %, 93.55% and 88.81% of the total variation of the carcass traits at 130 kg and 160 kg, and ham traits at 130 kg, respectively. In the dispersion graph concerning the canonical means, it was observed significant distance between the genetic groups DUDU and WIWI relative to the carcass traits at 130 kg and 160 kg, and ham traits at 130 kg. Pigs with 50% Duroc were little dispersed relative to the carcass traits at 130 kg and 160 kg and were not divergent to the genetic group DUDU relative to the ham traits 130 kg. In the clustering analysis using the single linkage method DULL, DULA and DUWI were grouped with a high similarity level, relative to the carcass traits with at 130 kg and 160 kg, and ham traits with at 130 kg. In the Tocher optimization method, pigs with 50% Duroc and 100% Duroc were grouped relative to the ham traits at 130 kg, suggesting that 50% Duroc pig s ham traits are similar to the 100% Duroc one. In this context, the utilization of the genetic groups Duroc x Large White, Duroc x Landrace and Duroc x (Landrace x Large White) production of dry cured ham should be recommended. In the study of association between carcass and ham traits it was observed that they were not independent. The canonical correlations (r) between the carcass and ham traits with slaughter weight at 130 kg were 0.77; 0.24; and 0.20 for the first, second and third canonical pair, respectively and all were significant using Wilks test (P0.05). The hot carcass weight (HCW) was the higher correlation with the first canonical variate pair relative to carcass traits with slaughter weight at 130 kg and 160 kg. The ham traits gross ham weight (GHW) and trimmed ham weight (THW) were the higher canonical correlation values for slaughter weights 130 kg and 160 kg, relative to the first canonical variate pair. The carcass traits backfat thickness (BT) and loin depth (LD), the last one with negative values,were the higher canonical correlation, for slaughter weights at 130 kg and at 160 kg, relative to the second canonical variate pair. In the ham traits group, ham outer layer fat thickness (HOFT) was the higher canonical correlation values for slaughter weights at 130 kg and 160 kg, relative to the second canonical variate pair. The correlations between the traits and the canonical variates showed an association among hot carcass weight (HCW), gross ham weight (GHW) and trimmed ham weight (THW), as well an association between backfat thickness (BT) and ham outer layer fat thickness (HOFT). These results allows to conclude that the carcass traits group should be used to cull pigs that are not suitable to the dry cured ham production.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológic

Multiple trait models in genetic evaluation of litter traits in pigs

O objetivo desse estudo foi avaliar geneticamente características de leitegada em suínos da raça Landrace, com a utilização de modelos bicaracterísticos linear e Poisson via metodologia Bayesiana, modelos tricaracterísticos linear e Poisson via metodologia Bayesiana, e modelos ulticaracterístico e de repetibilidade via máxima verossimilhança restrita (REML). Foram avaliadas as seguintes características: número de leitões nascidos no primeiro parto (NLN1), número de leitões nascidos no segundo parto (NLN2), número de leitões nascidos no terceiro parto (NLN3), número de leitões desmamados no primeiro parto (NLD1), número de leitões desmamados no segundo parto (NLD2) e número de leitões desmamados no terceiro parto (NLD3). Com os modelos bicaracterístico linear e bicaracterístico Poisson foram realizadas análises bicaracterísticas dentro de partos para número de leitões nascidos e número de leitões desmamados. Com os modelos tricaracterístico linear e tricaracterístico Poisson foram realizadas análises tri-características entre partos com três parições para o número de leitões nascidos e três parições para o número de leitões desmamados. Com os modelos multicaracterístico e de repetibilidade também foram realizadas análises entre partos para as mesmas características. Para as análises bi-características dentro de partos observou-se que as correlações genéticas entre o número de leitões nascidos e o número de leitões desmamados foram positivas e altas no primeiro, segundo e terceiro parto, o que indica que a seleção para aumento número de leitões nascidos resultará em ganho genético no número de leitões desmamados, que é uma característica de maior importância econômica. Com base no DIC (critério de informação da deviance ) o modelo linear é o mais indicado para se obter as distribuições a posteriori das herdabilidades e correlações genéticas para número de leitões nascidos e número de leitões desmamados nas três primeiras ordens de parto. Conclui-se que as características número de leitões nascidos e número de leitões desmamados são de baixa herdabilidade e estão positivamente correlacionadas entre si nas três ordens de parto avaliadas, e que o modelo bicaracterístico linear misto é o mais indicado para avaliar os animais desta população. Para as análises tri-características entre partos foi observado que as herdabilidades no primeiro, segundo e terceiro partos foram pouco diferentes tanto para o número de leitões nascidos, quanto para o número de leitões desmamados. O modelo linear foi o que melhor se ajustou aos dados nas análises tri-características entre partos, para todas as características avaliadas, considerando o DIC (critério de informação da deviance) como critério de comparação dos modelos. Foi concluído que as características avaliadas neste estudo são de baixa herdabilidade e devem ser analisadas com a utilização de um modelo tricaracterístico linear misto. Para as análises entre partos com os modelos multicaracterístico e de repetibilidade, via REML, observou-se uma tendência de aumento da variância genética aditiva e da herdabilidade ao longo das ordens de parto. Verificou-se que a estimativa de variância genética aditiva para número de leitões nascidos e para número de leitões desmamados no primeiro parto foi a mais discrepante em relação aos valores dessas estimativas para as demais ordens de parto, o que indica que, provavelmente, a expressão dessas características no primeiro parto é controlada por genes ou combinações gênicas diferentes daquelas que regulam a expressão do número de leitões nascidos, e do número de leitões desmamados no segundo e no terceiro parto. Foi possível concluir que o modelo multicaracterístico é o mais indicado para avaliação genética das características número de leitões nascidos número de leitões desmamados nas três primeiras ordens de parto.The aim of this study was to evaluate genetically litter traits in Landrace pigs, with the use of linear and Poisson bi-trait models via Bayesian methodology, linear and Poisson tri-trait models via Bayesian methodology and multi-trait and repeatability models via restricted maximum likelihood (REML). We obtained the following traits: number of piglets at first farrowing (NLN1), number of piglets born at second farrowing (NLN2), number of piglets at third farrowing (NLN3), number of piglets weaned at first farrowing (NLD1) number of piglets weaned at second farrowing (NLD2) and number of piglets weaned at third farrowing (NLD3). The bi-trait linear and bi-trait Poisson models analyzes were performed within parities, and two traits were used in each farrowing: number of piglets born and number of piglets weaned. The tri-trait linear and tri-trait Poisson models were analyzed across three orders of farrowing for the number of piglets born and for number of piglets weaned. Multi-trait models and repeatability model were analyzed across three orders of farrowing with the same traits. For bi-trait analysis within parities was observed that the genetic correlations between the number of piglets born and number of weaned piglets were positive and high in the first, second and third farrowing, which indicates that selection for increased number of piglets born result in genetic gain in the number of piglets weaned, which is a trait of greater economic importance. Based on DIC (deviance information criterion), linear model is the most appropriate to estimate the posterior distributions of heritabilities and genetic correlations for number of piglets born and number of piglets weaned in the first three orders of farrowing because it was the best fit of the data and less degree of complexity based on the criterion used. We conclude that number of piglets born and number of piglets weaned are of low heritability and are positively correlated between then in the three farrowing orders evaluated, and that the bitrait linear mixed model is the most appropriate to evaluate the animals in this population. For tri-trait across parities analysis was observed that the heritabilities in the first, second and third orders of farrowing were unequal both for the number of piglets born, and for the number of piglets weaned. The linear model was the best fit in the data for all traits evaluated considering DIC (deviance information criterion) as the criterion for comparing models. It was concluded that the traits evaluated in this study have low heritability and should be analyzed using a tri-trait linear mixed model. For the analyzes with multi-trait and repeatability models across three orders of farrowing, via REML, there was a trend of increased additive genetic variance and heritability along the orders of farrowing. It was found that the estimate of additive genetic variance for number of piglets born and number of piglets weaned at first farrowing was the most discrepant from the values of these estimates for all other orders of farrowing, indicating that probably the expression these characteristics at the first farrowing is controlled by genes or gene combinations other than those that regulate the expression of number of piglets born, and the number of piglets weaned in the second and third farrowing. It was concluded that the multi-trait is the most suitable for genetic evaluation of number of piglets born and number of piglets weaned in the first three orders of farrowing.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológic

Isotonic regression analysis of Guzerá cattle growth curves

The objective of this study was to apply data transformation via isotonic regression in growth curves studies of Guzerá cattle whose data presented disturbances characterized by decreased body weight in certain age groups. Weightage data were collected on newly weaned Guzerá males according to the methodology of weight gain tests (WGT) defined by the Brazilian Association of Zebu Breeders (ABCZ). The Logistic, Von Bertalanffy and Gompertz models were fitted to weight-age data using the generalized least squares method for non-linear regression models through the Gauss-Newton algorithm. The proposed transformation based on isotonic regression theory proved to be efficient; and the Logistic model was the best to describe the growth of animals, with a high percentage of convergence (100%) and goodness of fit assessed by the mean squared error (MSE) and the coefficient of determination (R2)

Isotonic regression analysis of Guzerá cattle growth curves

ABSTRACT The objective of this study was to apply data transformation via isotonic regression in growth curves studies of Guzerá cattle whose data presented disturbances characterized by decreased body weight in certain age groups. Weight-age data were collected on newly weaned Guzerá males according to the methodology of weight gain tests (WGT) defined by the Brazilian Association of Zebu Breeders (ABCZ). The Logistic, Von Bertalanffy and Gompertz models were fitted to weight-age data using the generalized least squares method for non-linear regression models through the Gauss-Newton algorithm. The proposed transformation based on isotonic regression theory proved to be efficient; and the Logistic model was the best to describe the growth of animals, with a high percentage of convergence (100%) and goodness of fit assessed by the mean squared error (MSE) and the coefficient of determination (R2)

Digestibilidade dos nutrientes de alimentos volumosos determinada pela técnica dos sacos móveis em eqüinos

Objetivou-se estimar a digestibilidade de nutrientes de forrageiras em eqüinos utilizando-se a técnica de sacos de náilon móveis. Foram avaliados alfafa (Medicago sativa), amendoim forrageiro (Arachis pintoi), desmódio (Desmodium ovalifolium), estilosantes (Stylosanthes guianensis), guandu (Cajanus cajan), macrotiloma (Macrotyloma axillare) e capim-coastcross (Cynodon dactylon cv. coastcross). O delineamento foi em blocos inteiramente casualizados com sete alimentos e cinco blocos (animais). Foram utilizados cinco eqüinos mestiços com 17 a 27 anos de idade e peso vivo médio de 350 kg. O ensaio teve duração de 12 dias: três para a adaptação às baias, cinco para inserção gástrica dos sacos através de sonda nasogástrica e quatro de coleta dos sacos nas fezes. No período pré-experimental de 30 dias, os animais foram mantidos em piquetes com dieta composta de 80% de feno de coastcross e 20% de concentrado. Na confecção dos sacos, utilizou-se náilon com porosidade de 45 µ e dimensão de 7,5 × 2 cm. Em cada saco, foram inseridos 510 mg de matéria seca de amostra do alimento. Os coeficientes de digestibilidade dos nutrientes das forragens foram calculados considerando o resíduo obtido no saco. A digestibilidade dos nutrientes do amendoim, estilosantes e macrotiloma foram superiores à da demais forrageiras, com destaque para a digestibilidade da proteína bruta, cujos valores foram de 91,4; 94,9 e 97,0%, respectivamente. O amendoim e macrotiloma apresentaram digestibilidade da fibra em detergente neutro de 72,3 e 65,2% e da fibra em detergente ácido de 70,9 e 59,4%, respectivamente. O amendoim forrageiro, macrotiloma e estilosantes apresentam digestibilidade dos nutrientes satisfatória e têm potencial para o uso em dietas para eqüinos