Expansion of CD25-Negative Forkhead Box P3-Positive T Cells during HIV and Mycobacterium tuberculosis Infection

Tuberculosis (TB) and HIV alter the immune system, and coinfected (HIV-TB) individuals usually present deregulations of T-lymphocytic immune response. We previously observed an increased frequency of “unconventional” CD4+CD25−FoxP3+ Treg (uTreg) population during HIV-TB disease. Therefore, we aimed to explore the phenotype and function of uTreg and conventional CD4+CD25+FoxP3+ Treg subsets (cTreg) in this context. We evaluated the expression of CD39, programmed cell death protein 1 (PD1), glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (GITR), and the effector/memory distribution by flow cytometry in cTreg and uTreg. Also, IL-10, TGF-β, IFN-γ production, and the suppressor capacity of uTregs were analyzed in cocultures with effector lymphocytes and compared with the effect of regulatory T cells (Tregs). We found diminished expression of CD39 and higher levels of PD1 on uTreg compared to cTreg in both HIV-TB and healthy donors (HD). In addition, uTreg and cTreg showed differences in maturation status in both HIV-TB and HD groups, due to the expansion of effector memory uTregs. Interestingly, both HIV-TB and HD showed a pronounced production of IFN-γ in uTreg population, though no significant differences were observed for IL-10 and TGF-β production between uTreg and cTreg. Moreover, IFN-γ+ cells were restricted to the CD39− uTreg population. Finally, when the suppressor capacity was evaluated, both uTreg and cTreg inhibited polyclonal T cell-proliferation and IFN-γ production in a similar extent. These findings suggest that uTregs, which are expanded during HIV-TB coinfection, exert regulatory functions in a similar way to cTregs despite an altered surface expression of Treg characteristic markers and differences in cytokine production.Fil: Angerami, Matias. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Suárez, Guadalupe Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Vecchione, María Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Laufer, Natalia Lorna. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Ameri, Diego. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos ; ArgentinaFil: Ben, Graciela. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos ; ArgentinaFil: Perez, Hector. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital General de Agudos ; ArgentinaFil: Sued, Omar Gustavo. Fundación Huésped; ArgentinaFil: Salomon, Horacio Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Quiroga, María Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentin

7-oxo-DHEA enhances impaired M. tuberculosis-specific T cell responses during HIV-TB coinfection

Mycobacterium tuberculosis (Mtb) is the causative agent of tuberculosis (TB), affecting approximately one third of the world’s population. Development of an adequate immune response will determine disease progression or progress to chronic infection. Risk of developing TB among human immunodeficiency virus (HIV)-coinfected patients (HIV-TB) is 20–30 times higher than those without HIV infection, and a synergistic interplay between these two pathogens accelerates the decline in immunological functions. TB treatment in HIV-TB coinfected persons is challenging and it has a prolonged duration, mainly due to the immune system failure to provide an adequate support for the therapy. Therefore, we aimed to study the role of the hormone 7-oxo-dehydroepiandrosterone (7-OD) as a modulator of anti-tuberculosis immune responses in the context of HIV-TB coinfection.Fil: Vecchione, María Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Laufer, Natalia Lorna. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Sued, Omar Gustavo. Fundación Huésped; ArgentinaFil: Corti, Marcelo. Gobierno de la Ciudad de Buenos Aires. Hospital de Infecciosas "Dr. Francisco Javier Muñiz"; ArgentinaFil: Salomon, Horacio Eduardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Quiroga, María Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentin

PD-1/PD-L1 Pathway Modulates Macrophage Susceptibility to Mycobacterium tuberculosis Specific CD8+ T cell Induced Death

CD8+T cells contribute to tuberculosis (TB) infection control by inducing death of infected macrophages. Mycobacterium tuberculosis (Mtb) infection is associated with increased PD-1/PD-L1 expression and alternative activation of macrophages. We aimed to study the role of PD-1 pathway and macrophage polarization on Mtb-specifc CD8+T cell-induced macrophage death. We observed that both PD-L1 on CD14+ cells and PD-1 on CD8+T cells were highly expressed at the site of infection in pleurisy TB patients’ efusion samples (PEMC). Moreover, a signifcant increase in CD8+T cells’ Mtb-specifc degranulation from TB-PEMC vs. TB-PBMC was observed, which correlated with PD-1 and PDL-1 expression. In an in vitro model, M1 macrophages were more susceptible to Mtb-specifc CD8+T cells’ cytotoxicity compared to M2a macrophages and involved the transfer of cytolytic efector molecules from CD8+T lymphocytes to target cells. Additionally, PD-L1 blocking signifcantly increased the in vitro Ag-specifc CD8+T cell cytotoxicity against IFN-γ-activated macrophages but had no efect over cytotoxicity on IL-4 or IL-10-activated macrophages. Interestingly, PD-L1 blocking enhanced Mtbspecifc CD8+ T cell killing of CD14+ cells from human tuberculous pleural efusion samples. Our data indicate that PD-1/PD-L1 pathway modulates antigen-specifc cytotoxicity against M1 targets in-vitro and encourage the exploration of checkpoint blockade as new adjuvant for TB therapies.CD8+T cells contribute to tuberculosis (TB) infection control by inducing death of infected macrophages. Mycobacterium tuberculosis (Mtb) infection is associated with increased PD-1/PD-L1 expression and alternative activation of macrophages. We aimed to study the role of PD-1 pathway and macrophage polarization on Mtb-specifc CD8+T cell-induced macrophage death. We observed that both PD-L1 on CD14+ cells and PD-1 on CD8+T cells were highly expressed at the site of infection in pleurisy TB patients’ efusion samples (PEMC). Moreover, a signifcant increase in CD8+T cells’ Mtb-specifc degranulation from TB-PEMC vs. TB-PBMC was observed, which correlated with PD-1 and PDL-1 expression. In an in vitro model, M1 macrophages were more susceptible to Mtb-specifc CD8+T cells’ cytotoxicity compared to M2a macrophages and involved the transfer of cytolytic efector molecules from CD8+T lymphocytes to target cells. Additionally, PD-L1 blocking signifcantly increased the in vitro Ag-specifc CD8+T cell cytotoxicity against IFN-γ-activated macrophages but had no efect over cytotoxicity on IL-4 or IL-10-activated macrophages. Interestingly, PD-L1 blocking enhanced Mtbspecifc CD8+ T cell killing of CD14+ cells from human tuberculous pleural efusion samples. Our data indicate that PD-1/PD-L1 pathway modulates antigen-specifc cytotoxicity against M1 targets in-vitro and encourage the exploration of checkpoint blockade as new adjuvant for TB therapies.Fil: Suarez, Guadalupe Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Suarez, Guadalupe Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Melucci Ganzarain, Claudia del Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Melucci Ganzarain, Claudia del Carmen. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Vecchione, María Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Vecchione, María Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Trifone, César Ariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Trifone, César Ariel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Marin Franco, Jose Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Marin Franco, Jose Luis. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Genoula, Melanie. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Genoula, Melanie. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Moraña, Eduardo José. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Tisioneumonología "raúl F. Vaccarezza".; ArgentinaFil: Moraña, Eduardo José. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Tisioneumonología "raúl F. Vaccarezza".; ArgentinaFil: Balboa, Luciana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Balboa, Luciana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Quiroga, María Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina. Universidad de Buenos Aires; ArgentinaFil: Quiroga, María Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina. Universidad de Buenos Aires; Argentin

Respuesta inmune contra SARS-CoV-2 en personas con VIH convalecientes de COVID-19

Desde principios de la pandemia de SARS-CoV-2 se ha debatido el curso de la enfermedad COVID-19 en personas con VIH. Por un lado, la inmunodeficiencia derivada de la infección por VIH y la mayor prevalencia de comorbilidades estarían asociadas al desarrollo de enfermedad grave. Por otro lado, la disfunción inmunológica podría evitar una respuesta inflamatoria exacerbada. En este trabajo de revisión analizamos la evidencia disponible en cuanto a la relación entre la manifestación clínica de COVID-19 y la respuesta inmune humoral y celular contra SARS-CoV-2 en el contexto de la coinfección con VIH. La bibliografía sugiere que las personas con VIH que reciben tratamiento antirretroviral logran respuestas eficaces contra SARS-CoV-2, a pesar de presentar algunas de las funciones celulares alteradas. Esto sugiere un impacto significativo de la terapia antirretroviral, no solo en el control del VIH sino en potenciar la inmunidad para restringir otras infecciones.Fil: Vecchione, María Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Giannone, Denise Anabella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Czernikier, Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Longueira, Yesica Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Turk, Gabriela Julia Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Laufer, Natalia Lorna. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Quiroga, María Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentin

Novel use of all-trans-retinoic acid in a model of lipopolysaccharide-immunosuppression to decrease the generation of myeloid-derived suppressor cells by reducing the proliferation of cd34+ precursor cells

All-trans-Retinoic Acid (ATRA) is a derivative of vitamin A with anti-proliferative properties. Endotoxin shock and subsequent immunosuppression (IS) by lipopolysaccharide (LPS) stimulates myelopoiesis with expansion of myeloid-derived suppressor cells (MDSC). Since we have previously shown that ATRA reverses the IS state by decreasing functional MDSC, our aim was to investigate if ATRA was able to modulate MDSC generation by regulating myelopoiesis in murine hematopoietic organs. We found that ATRA administration in vivo and in vitro decreased the number of CD34+ precursor cells that were increased in IS mice. When we studied the cellular mechanisms involved, we did not find any differences in apoptosis of CD34+ precursors or in the differentiation of these cells to their mature counterparts. Surprisingly, ATRA decreased precursor proliferation, in vitro and in vivo, as assessed by a reduction in the size and number of colony forming units (CFU) generated from CD34+ cells and by a decreased incorporation of H-thymidine. Moreover, ATRA administration to IS mice decreased the number of MDSC in the spleen, with a restoration of T lymphocyte proliferation and a restitution of the histological architecture. Our results indicate, for the first time, a new use of ATRA to abolish LPS-induced myelopoiesis, affecting the proliferation of precursor cells, and in consequence, decreasing MDSC generation, having a direct impact on the improvement of immune competence. Administration of ATRA could overcome the immunosuppressive state generated by sepsis that often leads to opportunistic life-threatening infections. Therefore, ATRA could be considered a complementary treatment to enhance immune responsesFil: Martire Greco, Daiana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Rodriguez Rodrigues, Nahuel Emiliano. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Castillo Montañez, Luis Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Vecchione, María Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: de Campos Nebel, Ildefonso Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Córdoba Moreno, Marlina Olyissa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Meiss, Roberto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Vermeulen, Elba Monica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Landoni, Verónica Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Fernández, Gabriela Cristina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; Argentin

Report on the immunomodulatory capacity of dehydroepiandrosterone and its oxygenated metabolites on Mycobacterium tuberculosis-specific responses in the context of HIV-1 coinfection

Mycobacterium tuberculosis (Mtb) es el agente causal de la tuberculosis (TB), una enfermedad infecciosa que en la actualidad afecta a aproximadamente un tercio de la población mundial y constituye una de las 10 principales causas de mortalidad globalmente. El tipo de respuesta inmunológica que el individuo despliegue, determinará si la enfermedad progresa o si desarrolla una infección crónica controlada. En particular, la probabilidad de enfermar en una persona coinfectada con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) es de 20 a 30 veces mayor que en la población general. La interacción entre Mtb y el HIV es sinérgica, facilitando cada uno la patogenicidad del otro.El tratamiento de la TB en personas coinfectadas con HIV y Mtb (HIV-TB) es desafiante y tiene una duración extensa, debido a falla del sistema inmune en proveer un soporte adecuado para la terapia. Mediante el estudio y la identificación de los factores que conllevan a la progresión de la enfermedad, se podrían descubrir terapias dirigidas al hospedador centradas en potenciar los componentes clave de los mecanismos efectores anti-micobacterianos, limitando la inflamación y el daño patológico. La presente tesis de doctorado tiene como objetivo principal el estudio del rol de la hormona dehidroepiandrosterona (DHEA) y sus metabolitos oxigenados androstenediol (AED), androstenetriol (AET) y 7-oxo-DHEA como moduladores de la respuesta inmune anti-tuberculosa en el contexto de la coinfección HIV-TB. Para llevar adelante este objetivo principal, el trabajo se dividió en dos objetivos específicos.En primer lugar, se determinó la concentración de estas hormonas en plasma y su posible relación con el estado clínico del paciente. Para ello se optimizó la síntesis de los compuestos en estudio y se desarrolló una metodología basada en cromatografía líquida de alta resolución acoplada a espectrometría de masas (HPLC-MS/MS) para la cuantificación. En segundo término, se estudió el efecto inmunomodulador de los compuestos mencionados sobre la respuesta antígeno-específica de células mononucleares de sangre periférica (CMSP) provenientes de pacientes coinfectados, comparando su respuesta con donantes sanos (DS).Los resultados obtenidos respecto de la cuantificación de hormonas inmunomoduladoras mostraron niveles plasmáticos estadísticamente más altos de DHEA, AET y 7-oxo-DHEA en pacientes HIV-TB, cuando se compararon con los valores provenientes de muestras de DS. Además, las concentración de 7-oxo-DHEA correlacionó positivamente con el recuento absoluto de células T CD4+, con un mayor valor nadir de LT CD4+ y con la localización de la TB, ya que aquellos individuos que presentaban una infección restringida a los pulmones mostraron niveles más altos de 7-oxo-DHEA en comparación con el grupo de pacientes que presentaron TB diseminada.Por otra parte, se ensayó el efecto inmunomodulador de los compuestos, estimulando las CMSP de HIV-TB y DS con un antígeno Mtb (cepa H37rv, irradiada y muerta por calor) y estudiando la proliferación celular y la producción de citoquinas antígeno-específica. Interesantemente, 7-oxo-DHEA a su concentración más efectiva (1x10-6M) fue capaz de estimular la proliferación celular y modular una respuesta con un perfil de citoquinas de tipo Th1, al incrementar los niveles de IFN- y TNF-, sin suprimir la acción necesaria de IL-10 (regulación) e inhibiendo la secreción de IL-17A (inflamación). Para conocer si alguna de las hormonas en estudio era capaz de promover un perfil Th1 sobre el perfil regulatorio, se estudió la relación entre IFN-, IL-17A, TNF- e IL-10. El efecto ejercido por 7-oxo-DHEA se manifestó en un incremento significativo de los niveles de IFN- y TNF- por sobre los de IL-10 y de la relación IFN-/IL-17A en HIV-TB y DS, lo que sugiere que podría articular una respuesta inmunoprotectora en lugar de una patológica.En base a los prometedores resultados encontrados sobre el efecto de 7-oxo-DHEA, no descripto hasta el momento, y con el fin de profundizar el conocimiento en cuanto a función inmunomoduladora, se realizaron dos estudios adicionales. Primero, se infectaron líneas celulares de macrófagos humanos THP-1 y alveolares murinos MH-S con Mtb cepa H37Rv en presencia de la hormona. Se observó que los cultivos expuestos a 7-oxo-DHEA mostraron una mayor capacidad fagocítica y un aumento en el control del crecimiento bacteriano, acompañado de un perfil de citoquinas pro-inflamatorio. Por último, se realizó un ensayo pre-clínico con un modelo murino de tuberculosis pulmonar progresiva. Se infectaron ratones BALB/c con Mtb cepa H37Rv y se trataron con 7-oxo-DHEA (15, 50 o 200 g/día, 3 veces por semana) desde el día 60 post-infección. Los resultados mostraron que luego de un mes de tratamiento, la carga bacteriana en pulmón y bazo de ratones infectados se redujo de forma significativa.Los resultados de este trabajo de investigación en el marco de una tesis doctoral permiten concluir que 7-oxo-DHEA actúa como un potente compuesto inmunoprotector. Se propone que esta hormona podría utilizarse como un adyuvante de la terapia para mejorar el tratamiento de la TB, acortando los tiempos de tratamiento y mejorando la calidad de vida de los pacientes, particularmente aquellos inmunocomprometidos como los individuos HIV+.Mycobacterium tuberculosis (Mtb) is the causative agent of tuberculosis (TB), an infectious disease that currently affects approximately one third of the world's population and it constitutes one of the top 10 causes of deaths worldwide. The type of individual's immune response will determine disease progression or its development into a chronic infection. Particularly, the risk of developing TB in human immunodeficiency virus (HIV)-coinfected patients is 20 to 30 times higher than those without HIV infection. The synergistic interplay between these two pathogens accelerates a decline in immunological functions. TB treatment in people coinfected with HIV and Mtb (HIV-TB) is challenging and it has a prolonged duration, mainly due to failure of the immune system to provide an adequate support for the therapy. Novel host-directed therapy could be discovered by studying and identifying factors that lead to disease progression. Thus, the aim of this PhD thesis work was to study the role of the hormone dehydroepiandrosterone (DHEA) and its oxygenated metabolites androstenediol (AED), androstenetriol (AET) and 7-oxo-DHEA as modulators of the anti-tuberculous immune response in the context of HIV-TB coinfection. To achieve the main objective, the work was divided into two specific purposes. First, plasma hormone concentrations were determined and related with the clinical status of the patient. To this end, the synthesis of the compounds studied was optimized, and a methodology based on high resolution liquid chromatography coupled to mass spectrometry (HPLC-MS/MS) was developed. Secondly, the immunomodulatory effect of the aforementioned compounds on peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from co-infected patients was studied, comparing their response with healthy donors (HD). Regarding hormone´s quantitation, the results showed statistically higher plasma levels of DHEA, AET and 7-oxo-DHEA in HIV-TB patients, compared to samples from HD. In addition, 7-oxoDHEA plasma concentration positively correlated with the absolute CD4+ T cell count, with nadir CD4+ T cell count values and with TB localization, as those individuals who had an infection restricted to the lungs showed higher levels of 7-oxo-DHEA, compared to the group of patients with disseminated TB. On the other hand, the immunomodulatory effect of the above-mentioned steroid compounds was tested stimulating PBMCs from HIV-TB and HD with heat-killed gamma-irradiated Mtb H37Rv. Cell proliferation and cytokine production were studied. Interestingly, 7-oxo-DHEA at its most effective concentration (1x10-6M) was able to increase cell proliferation and to modulate a Th1-like cytokine profile, by increasing the levels of IFN-γ and TNF-, without suppressing the necessary action of IL-10 (a regulatory cytokine) and reducing the secretion of IL-17A (pro-inflammatory). With the aim to explore if hormones could promote a Th1 phenotype over a regulatory profile, the relationship between IFN-, IL-17A, TNF- and IL-10 was studied. The effect exerted by 7-oxoDHEA was manifested by significant increase in the levels of IFN- and TNF- over those of IL-10 and by an augmented IFN-/IL-17A ratio in HIV-TB and HD, suggesting that 7-oxo-DHEA could articulate an immunoprotective response instead of a pathological condition. Based on the promising results found in 7-oxo-DHEA, and in order to deepen the knowledge regarding its immunomodulatory function, two additional studies were performed. Initially, human macrophage THP-1 and murine alveolar MH-S cell lines were infected with Mtb strain H37Rv in the presence of the hormone. It was observed that cultures exposed to 7-oxo-DHEA showed a higher phagocytic capacity and an improved control of bacterial growth, associated with a profile of pro-inflammatory cytokines. Finally, a pre-clinical trial using a murine model of progressive pulmonary tuberculosis was performed. BALB/c mice were infected with Mtb strain H37Rv and treated with 7-oxo-DHEA (15, 50 or 200 g/day, 3 times per week) from day 60 postinfection. The results showed that after one-month treatment, the bacterial load in lung and spleen from infected mice had decreased significantly. The results of this PhD thesis work allowed us to conclude that 7-oxo-DHEA seems to be a potent immunoprotective compound. Therefore, it is proposed that 7-oxo-DHEA could be used as an adjuvant to improve TB treatment, shortening therapy times and improving the quality of life of patients, particularly those immunocompromised, such as HIV+ individuals.Fil: Vecchione, María Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentin

Deletion of A44L, A46R and C12L Vaccinia Virus Genes from the MVA Genome Improved the Vector Immunogenicity by Modifying the Innate Immune Response Generating Enhanced and Optimized Specific T-Cell Responses

MVA is an attenuated vector that still retains immunomodulatory genes. We have previously reported its optimization after deleting the C12L gene, coding for the IL-18 binding-protein. Here, we analyzed the immunogenicity of MVA vectors harboring the simultaneous deletion of A44L, related to steroid synthesis and A46R, a TLR-signaling inhibitor (MVAΔA44L-A46R); or also including a deletion of C12L (MVAΔC12L/ΔA44L-A46R). The absence of biological activities of the deleted genes in the MVA vectors was demonstrated. Adaptive T-cell responses against VACV epitopes, evaluated in spleen and draining lymph-nodes of C57Bl/6 mice at acute/memory phases, were of higher magnitude in those animals that received deleted MVAs compared to MVAwt. MVAΔC12L/ΔA44L-A46R generated cellular specific memory responses of higher quality characterized by bifunctionality (CD107a/b+/IFN-γ+) and proliferation capacity. Deletion of selected genes from MVA generated innate immune responses with higher levels of determining cytokines related to T-cell response generation, such as IL-12, IFN-γ, as well as IL-1β and IFN-β. This study describes for the first time that simultaneous deletion of the A44L, A46R and C12L genes from MVA improved its immunogenicity by enhancing the host adaptive and innate immune responses, suggesting that this approach comprises an appropriate strategy to increase the MVA vaccine potential

Determination of dehydroepiandrosterone and its biologically active oxygenated metabolites in human plasma evinces a hormonal imbalance during HIV-TB coinfection

Abstract An estimated one third of the world’s population is affected by latent tuberculosis (TB), which once active represents a leading cause of death among infectious diseases. Human immunodeficiency virus (HIV) infection is a main predisposing factor to TB reactivation. Individuals HIV-TB co-infected develop a chronic state of inflammation associated with hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis dysregulation. This results in a hormonal imbalance, disturbing the physiological levels of cortisol and dehydroepiandrosterone (DHEA). DHEA and its oxygenated metabolites androstenediol (AED), androstenetriol (AET) and 7-oxo-DHEA are immunomodulatory compounds that may regulate physiopathology in HIV-TB co-infection. In order to study possible changes in plasma levels of these hormones, we developed an approach based on high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS). To our knowledge, this represents the first report of their simultaneous measurement in HIV-TB individuals and the comparison with healthy donors, obtaining statistically higher plasma levels of DHEA, AET and 7-oxo-DHEA in patients. Moreover, we found that concentrations of 7-oxo-DHEA positively correlated with absolute CD4+ T cell counts, nadir CD4+ T cell values and with individuals who presented TB restricted to the lungs. This research contributes to understanding the role of these hormones in HIV-TB and emphasizes the importance of deepening their study in this context

SARS-CoV-2 humoral and cellular immune responses in COVID-19 convalescent individuals with HIV

Vecchione M.B. and Giannone D. Contributed equally to this work.Background: SARS-CoV-2-specific immune response features in people with HIV infection (PWH) remain to be fully elucidated. We aimed to evaluate the impact of HIV over humoral and cellular responses in COVID-19 convalescent PWH.Methods: Blood samples from 29 PWH with preserved CD4+T-cell counts on ART and 29 HIV-negative (HIVneg) donors were included. SARS-CoV-2-specific IgG levels and IgG titers were determined by ELISA. Antibody neutralization capacity was evaluated against the reference B1 strain SARS-CoV-2. IFN--secreting cells were detected by ELISpot using SARS-CoV-2 Spike, RBD, or Nucleocapsid protein or overlapping peptide pools. Frequency and phenotype of T, B and NK cells and levels of soluble cytokines and chemokines were assessed by flow cytometry.Results: SARS-CoV-2-specific antibodies were detected on 65.5% of PWH and 79.3% of HIVneg individuals, with no differences in serum IgG levels and anti-SARS-CoV-2 neutralizing antibodies. All donors exhibited SARS-CoV-2-specific cellular immunity, including those with undetectable antibody responses. PWH showed diminished percentages of antibody-secreting cells compared to HIVneg cohort, with similar B cell proportions between groups. PWH presented an increment in T follicular helper (Tfh, CD4+CXCR5+) percentage, which negatively correlated with IgG titers. Additionally, CD4+PD1+ and CD8+HLA-DR+ cell frequencies were augmented in PWH. Moreover, PWH presented a high proportion of CD95+, CD25+, NKp46+, HLA-DR+, and CD38+/HLA-DR+ NK cells. Both groups displayed similar Tregs frequency, effector/memory, and T-helper profile for CD4TL, exhaustion and memory phenotypes for CD8TL and subtle differences in classical monocytes. Profile of circulating cytokines and chemokines was significantly different between both groups. Magnitude of IFN-γ responses to S or N proteins, and RBD was lower in PWH compared to HIVneg donors. Correlation analysis of immune and clinical parameters showed a distinct immune landscape in the PWH group.Conclusions: PWH showed a distinctive immune profile although severity of COVID-19 was not exacerbated. PWH with conserved CD4+T-cell counts exerted both humoral and cellular responses against SARS-CoV-2. Even though cellular response was lower compared to HIVneg individuals, PWH achieved similar antibody responses with a high neutralization capacity. These data reinforce the impact of ART, not only in controlling HIV but also other infections.Fil: Vecchione, María Belén. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Giannone, Denise Anabella. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Czernikier, Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Polo, Maria Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Gonzalez Polo, Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Cruces, Leonel Hernán. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Ghiglione, Yanina Alexandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Balinotti, Silvia. Sanatorio Guemes Sociedad Anonima.; ArgentinaFil: Longueira, Yesica Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Turk, Gabriela Julia Ana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Laufer, Natalia Lorna. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Quiroga, María Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; Argentin