Estudio de cultivos celulares primarios de Psorophora confinnis (Díptera: Culicidae)

With the purpose of obtaining a Ps. confinniscell line for arbovirus infection susceptibility studies, the primary cultures of this species were initiated, this being a vector of the Venezuelan Equine Encephalitis virus, epidemo-epizootic type. Starting from embryonated eggs, neonate larvae and adult females' ovaries, embryonic tissue explants in diverse culture media (supplemented with 20% foetal bovine serum and a mixture of antibiotics and 1% antimycotics) were carried out. Biological material was sterilised by immersion in different substances, such as 1.6% sodium hypochloride, 70% ethanol and 0.25% mercuric chloride solution in 70% ethanol. Cellular growth only began after 62 days of incubation in MMNP12 medium; proliferation of isolated colonies also started from larval fragments' cut ends. Evolution of cellular growth until confluent monolayer formation was extremely slow and was only reached 8 months post-explant, presenting a predominantly epithelioid cellular morphology. Cell growth was not successful starting from adult female ovarian tissue. lnitiation of this specie's cell growth presented different times compared to that spent on cell cultivation of other mosquitoes, which indicates that, in spite of using similar methodology in the process in order to obtain primary cell cultures, cell adaptations to physical, environmental and nutritional conditions are different for each one of the,species. This is the first report of cell cultures of a species of mosquito belonging to the Psorophora genus.Con el propósito de obtener una línea celular de Psorophora confinnis (Arribalzaga, 1891) para estudios de susceptibilidad a infecciones con arbovirus, se iniciaron los cultivos primarios de esta especie, vectora del virus de la encefalitis equina venezolana, tipo epidemo-epizoótico. A partir de huevos embrionados, larvas de primer estadio recién eclosionadas y ovarios de hembras adultas, se realizaron explantes por separado de tejidos embrionarios en diversos medios de cultivos, suplementados con 20% de suero fetal bovino y una mezcla de antibióticos y antimicóticos al 1%. La esterilización del material biológico se efectuó mediante la inmersión de éste en diversas sustancias, tales como: hipoclorito de sodio al 1,6%, etanol al 70% y una solución de 0,25% de cloruro de mercurio disuelto en 70% de etanol. El crecimiento celular se inició sólo en el medio MMNPl2 en un tiempo promedio de 62 días después de efectuadas las siembras, mediante la proliferación de colonias aisladas procedentes de tejidos embrionarios, y también a partir de las terminaciones de los fragmentos larvales. La evolución del crecimiento celular hasta la formación de la monocapa confluente fue supremamente lenta y sólo se alcanzó a los 8 meses post-explante, presentando ésta una morfología celular predominantemente epitelioide. No fue exitoso el crecimiento celular a partir de los tejidos ováricos de hembras adultas. La iniciación del crecimiento celular en esta especie presentó tiempos diferentes comparados con los empleados en los cultivos celulares de otros mosquitos, lo cual indica que a pesar de utilizarse una metodología similar en el proceso para obtener cultivos primarios, las adaptaciones celulares a las condiciones físicas, ambientales y nutricionales son diferentes en cada una de las especies. Este es el primer informe de cultivos celulares de una especie de mosquito perteneciente al género Psorophora

Estudios de infectividad de la especie anopheles albimanus wiedemann, 1820 (Diptera: culicidae)

In order to evaluate the infectivity of Anopheles albimanus Wiedemann, 1820 Cartagena strain, malarial infection attempts were performed from human and non-human primates. 67 attempts from naturally infected patients with P. falciparum and 36 with P. vivax were performed. Dissection of salivary glands were made on 654 P. falciparum infected females of which 11.9% were positive for sporozoites. Out of the 93 P. vivax infected mosquitoes examined, 31.2% presented sporozoites. A total of 4 An albimanus infection attempts were done from experimentally P. falciparum infected Aotus monkeys and none of them presented sporozoites. From 14 P. vivax infected Aotus monkeys 75 infection attempts were done; only 5.2% out of 810 dissected salivary glands presented sporozoites. The results obtained suggeated that the above mentioned strain of An. albimanushas low infectivity under laboratory conditions.Con el propósito de evaluar la infectividad del mosquito Anopheles albimanus Wiedemann, 1820, cepa Cartagena, se realizaron infecciones a partir de pacientes naturalmente infectados con Plasmodium falciparum y Plasmodium vivax y de primates del genero Aotus experimentalmente infectados con ambas especies de Plasmodium. 67 intentos de infección de Anopheles albimanus se realizaron e partir de pacientes con P. falciparum y 36 a partir de pacientes con P. vivax. Se examinaron 654 glándulas salivares en hembras An. albimanus infectadas con P. falciparum de las cuales el 11.9% presentaron esporozoitos, mientras que el 31.2% de 93 glándulas salivares examinadas desarrollaron esporozoitos de P. vivax. Un total de 4 intentos de infección de Anopheles albimanus se realizaron a partir de un Aotus infectado con P. falciparum en los cuales los mosquitos no desarrollaron esporozoitos. A partir de 14 Aotus infectados con P. vivax se realizaron 75 intentos de infección de Anopheles albimanus; solo el 5.2% de un total de 810 glándulas salivares examinadas produjeron esporozoitos. Los resultados obtenidos sugieren que esta cepa Anopheles albimanus tiene una baja infectividad en condiciones experimentales

Hallazgo del mosquito Haemagogus equinus (Theobald, 1903) en el área metropolitana de Bucaramanga, Santander

Utilizando un sistema de vigilancia entomológica, se registra por primera vez en Colombia el hallazgo del mosquito Haemagogus equinus, eficiente vector del virus de la fiebre amarilla selvática, en criaderos artificiales (llantas). Se recolectaron 181 larvas de H. equinus en cuatro ovilarvitrampas encontradas positivas, localizadas en el área metropolitana de Bucaramanga

Estudios comparativos del ciclo de vida del mosquito Aedes taeniorhynchus (Diptera: culicidae) de dos colonias de la costa atlántica colombiana

This pilot study was carried out in the laboratory to establish whether the Aedes taeniorhynchus mosquito, found in Cartagena and Barranquilla, is really a single strain and if the colonisation process (cultured in the laboratory) influences the time taken in the developmental stages of this dipthera's life cycle. Colonies were established with adult mosquitoes, both males and females, collected from sites close to the cities of Cartagena and Barranquilla.The insects were taxonomically identified and placed in Gerberg jars into which cupfuls of humid earth were introduced so that oviposition could take place. Six continuous generations were kept at an average temperature of 27°C and 80% average relative humidity. lmmature forms were fed with minced Ken-L; sugar solution was given to adults of both sexes and females were given a guinea pig to provide their blood intake. The duration of each stage of the biological cycle for each generation was recorded and these were analysed by means of the t-test for comparison of averages of independent samples. For larva (t=1 .SI) and pupa (k0.30) duration time for the two mosquito populations no significant differences were found; however, hatching time, when it occurred, was k4.21. No significant differences were found for pupa or for larva hatching duration time for the six generations of mosquito from Cartagena, but when significant differences in larval stage duration time were presented, they occurred from the fourth generation onwards. This pilot study's results suggest that the Aedes taeniorhynchus mosquito from Cartagena and Barranquilla represents a sole species. Furthermore, it shows that its colonisation process, being that which involves the adaptation of this insect to the special conditions and have an influence on the duration of its biological cycle.Este estudio se realizó con el propósito de establecer, en forma preliminar, en el laboratorio, si el mosquito Aedes taeniorhynchus procedente de Barranquilla y Cartagena es realmente una sola cepa y si el proceso de colonización (cría en el laboratorio) influye en el tiempo de duración de las etapas de desarrollo del ciclo de vida de este díptero. Las colonias se establecieron con mosquitos adultos, machos y hembras, recolectados en lugares cercanos a Barranquilla y Cartagena. Los insectos se identificaron taxonómicamente y se colocaron en jaulas Gerberg, en las que se introdujeron tazas con tierra húmeda para que las hembras ovipositaran. De cada localidad, se mantuvieron seis generaciones continuas a una temperatura promedio de 27°C y una humedad relativa promedio de 80%. Los estadios inmaduros se alimentaron con Ken-L molido; los adultos de los dos sexos, con solución azucarada y a las hembras se les colocó un curí para que tomaran su comida de sangre. Se registraron los tiempos de duración de cada etapa del ciclo biológico en cada una de las generaciones y se analizaron por medio de la prueba t de comparación de promedios para muestras independientes. Para los tiempos de duración de larva (t=1,51) y pupa (t=0,30) de las dos poblaciones del mosquito, no se encontraron diferencias significativas; sin embargo, para el tiempo de eclosión de la larva sí las hubo (t=4,21). Al relacionar las seis generaciones de Cartagena no se encontraron diferencias significativas para el tiempo de duración de pupa y eclosión de la larva, pero sí se presentaron a partir de la cuarta generación, para el tiempo de duración de los estadios larvarios. Los resultados de este estudio preliminar sugieren que el mosquito Aedes taeniorhynchus de Barranquilla y Cartagena representa una sola especie. Se demostró, además, que su proceso de colonización, el cual involucra la adaptación de este insecto a las condiciones específicas de un insectario, influye en la duración de su ciclo biológico

Evaluación de tres técnicas citogenéticas diferentes en los estudios morfométricos del carioti po de Aedes taeniorhynchus (Di ptera: culicidae

Morphometric studies of the Aedes taeniorhynchus mosquito karyotype are of veterinary medical interest because this mosquito is a vector of epidemo-epizootic Venezuelan equine encephalitis. Three different cytogenetic techniques were used for chromosome preparation: squash, air-drying and cell culture. These three techniques were compared to each other to evaluate the obtained metaphases' chromosome length and morphology. The diploid number of the species was 6 in al1 the cariological preparations when any one of the three procedures was used. However, with the squash technique, brain-cell mytotic chromosomes were shorter, discontinuous and had less apparent grades of chromatin compaction. When air-drying was used, better cytological extensions were obtained, the chromosomes being more separated and of a slightly greater length. The best resolution was obtained using ceil culture because of the structure and separation of chromosome homology and length.Se efectuaron estudios morfométricos del cariotipo de Aedes taeniorhynchus, mosquito de interés médico-veterinario, por ser vector del virus de la encefalitis equina venezolana, tipo epidemo-epizoótico. En las preparaciones cromosómicas fueron utilizadas tres técnicas citogenéticas diferentes: squash, secado al aire y cultivos celulares. Estas se compararon entre sí para evaluar, en las metafases obtenidas, la longitud y morfología de los cromosomas. El número diploide de la especie fue de seis en todas las preparaciones cariológicas al utilizar cualquiera de los tres procedimientos; sin embargo, con la técnica de squash, los cromosomas mitóticos de cerebro fueron más cortos, discontinuos y con menor grado aparente de compactación de la cromatina; al utilizar la iécnica de secado al aire, se obtuvieron mejores extendidos citologicos, cromosomas más separados y ligeramente de mayor longitud; en tanto que los resultados de mejor resolución, por la estructura, separación de homólogos y longitudes cromosómicas, se lograron con cultivos celulares

Fauna de insectos hematófagos del sur del Parque Natural Nacional Chiribiquete, Caquetá, Colombia

As part of the management and conservation study at the Chiribiquete National Natural Park developed by the Puerto Rastrojo Foundation, an entomological study was done at the Puerto Abeja Biological Station (Mesay river, Solano municipality, Caqueta department). Jaccard similarity index, Shannon-Vileaver diversity index and attacks rates were calculated for diurnal diptera in each of the six forests evaluated. 31 species of Culicidae, 1 of Triatominae, 1 of Ceratopogonidae, 2 of Simuliidae. 10 of Phlebotomine and 6 of Tabanidae were reported. Three new Culicidae species were reported for Colombia: Sabethes glaucodaemon. Trichoprosopon espini and Uranotaenia pallidoventer and the Caqueta department hematophagous insect's distribution was enlarged. Diurna1 species activity and association between species and forests was obtained. Control measures were recommended aimed at preventing vectorial tropical diseases transmission and the epidemiological importante of potential vectors captured in the area was highlighted.Como parte del estudio para el manejo y la conservación del Parque Natural Nacional Chiribiquete, desarrollado por la Fundación Puerto Rastrojo, se realizó un inventario de la fauna entomológica hematófaga en la estación biológica de Puerto Abeja (rio Mesay, municipio de Solano, departamento de Caquetá). Se calcularon los índices de similitud de Jaccard y el indice de diversidad de Shannon-Weaver y se determinaron los patrones de picadura de los dipteros diurnos para los seis tipos de bosques evaluados. Se registraron 31 especies de Culicidae, 1 de Triatominae, 1 de Ceratopogonidae, 2 de Simuliidae, 10 de Phlebotominae y 6 de Tabanidae. Se obtuvieron tres nuevos registros de especies de Culicidae para Colombia: Sabethes glaucodaemon, Trichoprosopon espini y Uranotaenia pallidoventer; y se amplió el registro de varios insectos hematófagos en el departamento de Caquetá. Se presentan los patrones de actividad de las especies diurnas y su relación con los tipos de bosque y se sugieren posibles medidas de control para evitar enfermedades transmitidas por diferentes vectores, resaltando la importancia epidemiológica de las especies capturadas que presentan capacidad vectorial

Distribución actual e importancia epidemiológica de las especies de triatominos (Reduviidae: Triatominae) en Colombia

We present the geographical distribution and epidemiological importance for Chagas' disease transmission of 23 triatomine species in Colombia. based on bibliographical reports available in the country and on reference collections housed in the Entomology Laboratory at the lnstituto Nacional de Salud and the Tropical Microbiology and Parasitology Research Center at Universidad de los Andes. We also discuss the ecological conditions under wich triatomines in countries bordering Colombia have been reported. airned at establishing the possible presence of species that have not been reported yet in our country. We, therefore, reportpossible presence in Colombia of species with wild habitats such as Alberprosenia malheiroi, Belminus lapofiei, and Cavernicola lenti, all of them located in the Amaron region; Triatoma nigromaculata. which shows intradomiciliary habits, in the Eastern mountain range; Panstrongylus chinai, probably located in wild habitats and also in settlers' dwellings in the Amazon region dueto its attraction to light, and Alberprosenia goyovargasi, located in wild habitats in our border with Venezuela. The importance of national surveillance programs is highlighted as an aid strategy for the study of triatomine species in Colombia.Se presenta la distribución geográfica y la importancia epidemiológica en la transmisión de la enfermedad de Chagas de las 23 especies de triatominos presentes en Colombia, tomando como base los registros bibliográficos existentes en el pais y las colecciones de referencia del Laboratorio de Entomologia del Instituto Nacional de Salud y del Centro de Investigaciones en Microbiologia y Parasitologia Tropical de la Universidad de los Andes; además, se realiza un análisis de las condiciones ecológicas en las cuales han sido registrados triatominos en los paises con fronteras con Colombia para poder establecer la presencia de posibles especies que aún no se han registrado en nuestro pais. De esta manera. existe la posibilidad de tener en Colombia especies con hábitos silvestres como: Alberprosenia malheiroi. Belminus laportei y Cavernicola lenti, preentes todas ellas en los departamentos amazónicos; Triatoma nigromaculata en la Cordillera Oriental y con hábitos intradomiciliarios; Panstrongylus chinai con posibilidad de encontrarse en hábitats selváticos o en las viviendas de los colonos de la Amazonia debido a su atracción por la luz y Alberprosenia goyovargasien hábitats silvestres de la frontera con Venezuela. Se resalta la importancia de la vigilancia entomológica a nivel nacional como estrategia para reforzar los estudios de triatominos silvestres en Colombia

Características de una línea celular de crecimiento continuo de Aedes taeniorhynchus (Diptera: Culicidae)

A new cell line was established, LSB-AT793, from the embryonic tissues of the mosquito Aedes taeniorhynchus. The first subculture was iniciated in July 1993. Up to the present, October 1995, 360 passages have been performed. The culture media used for cell growth and maintenance was MMNP12, with a pH of 6.8 and a temperature of 28°C. The majority of cells in the confluent monolayers were epithelial-like. The characteristics of the karyotype species were recognized and the G and C-banding patterns were established. Also, the isoenzyme profiles of the cell line, using four differents systems, PGI, PGM, MPI and 6-PGDH, were determined which coincide with the isoenzyme patterns derived from pupae extracts. The isoenzyme profiles of this cell line was compared with the isoenzyme phenotype of Anopheles albimanus and with the clone C6136. It was shown that cells are free of bacteria and fungi. The frozen technique in liquid nitrogen was standarized. This technique has allowed the storage of a variety of subcultures in different passages.Se estableció una nueva línea celular, LSB-AT0793, a partir de tejidos embrionarios del mosquito Aedes taeniorhynchus. El primer subcultivo se inició en julio de 1993 y hasta la fecha, octubre de 1995, se han efectuado 360 pases. El medio de cultivo utilizado para el crecimiento y mantenimiento de las células fue MMNP12, con un pH de 6,8 y una temperatura promedio de 28°C. La mayoría de las células en las monocapas confluentes fueron de formas epitelioides. Se reconocieron las características del cariotipo de la especie y se establecieron los patrones de bandas C y G. Se determinaron los perfiles isoenzimáticos de la línea celular, utilizando cuatro sistemas diferentes: PGI, PGM, MPI y 6-PGDH, los cuales coincidieron con los patrones obtenidos a partir de extractos de pupas de la especie. También, se compararon los perfiles isoenzimáticos de la presente Iínea celular con los de Anopheles albimanus y con los del clon C6136. Se demostró que las células están libres de bacterias y hongos. Se estandarizó la técnica de congelación en nitrógeno líquido en donde se mantienen varios subcultivos en diferentes pases

Detection of all four dengue serotypes in Aedes aegypti female mosquitoes collected in a rural area in Colombia

The Aedes aegypti vector for dengue virus (DENV) has been reported in urban and periurban areas. The information about DENV circulation in mosquitoes in Colombian rural areas is limited, so we aimed to evaluate the presence of DENV in Ae. aegypti females caught in rural locations of two Colombian municipalities, Anapoima and La Mesa. Mosquitoes from 497 rural households in 44 different rural settlements were collected. Pools of about 20 Ae. aegypti females were processed for DENV serotype detection. DENV in mosquitoes was detected in 74% of the analysed settlements with a pool positivity rate of 62%. The estimated individual mosquito infection rate was 4.12% and the minimum infection rate was 33.3/1,000 mosquitoes. All four serotypes were detected; the most frequent being DENV-2 (50%) and DENV-1 (35%). Two-three serotypes were detected simultaneously in separate pools. This is the first report on the co-occurrence of natural DENV infection of mosquitoes in Colombian rural areas. The findings are important for understanding dengue transmission and planning control strategies. A potential latent virus reservoir in rural areas could spill over to urban areas during population movements. Detecting DENV in wild-caught adult mosquitoes should be included in the development of dengue epidemic forecasting models