The Trypanosomatid Pr77-hallmark contains a downstream core promoter element essential for transcription activity of the Trypanosoma cruzi L1Tc retrotransposon

Background: Trypanosomatid genomes are highly colonized by non-LTR retroelements that make up to 5% of the nuclear genome. These elements are mainly accumulated in the strand switch regions (SSRs) where polycistronic transcription is initiated and have a 77nt-long sequence - Pr77 - at their 5' ends. L1Tc is the best represented retrotransposon in the Trypanosoma cruzi genome and is a potentially functional autonomous element that encodes its own retrotransposition machinery. The Pr77of the T. cruzi L1Tc element activates gene transcription via RNA polymerase II, generating abundant, unspliced transcripts which are translated. Results: The present manuscript describes the identification of a downstream core promoter element (DPE) in the L1Tc Pr77sequence. Just four nucleotides long (CGTG), it covers in Pr77positions +25 to +28 of the described L1Tc transcription start site. The Pr77-DPE motif is conserved in terms of sequence composition and position in the Pr77of most trypanosomatid non-LTR retrotransposons, independent of the coding or non-coding capacity of these retroelements. Transcription assays in T. cruzi stable transfectants with vector containing point mutations at 17locations of the Pr77nucleotide sequence evidence that the DPE motif is essential for the promoter function of Pr77. Furthermore, the obtained data show that other nucleotides also contributed to the promoter function of Pr77. In addition, the presented results indicate that parasite nuclear proteins specifically bind to different regions of the Pr77sequence although the strongest binding is to the DPE motif. Moreover, it is shown that the DPE sense single-stranded sequence is being required in DNA-protein recognition of nuclear factors. Conclusions: The Pr77sequence present in most of non-LTR retrotransposons of trypanosomatids contains a downstream core promoter element (DPE) which is conserved in terms of nucleotide composition and location. The Pr77-DPE motif is essential for the transcriptional activity of Pr77although other nucleotides are also involved. DPE has a high affinity binding for nuclear proteins in T. cruzi. The wide retroelement-mediated distribution of Pr77suggests that it may represent an important tool for regulating gene expression in trypanosomatids. © 2016 Macías et al.This work was supported by the Programa Estatal I+D+i (MINECO) via grants SAF2012-35777, SAF2013-48527-R and RTC-2014-2130, by the RICET Tropical Diseases Research Network via grant RD12/0018/0021, and via FEDER funds.Peer reviewe

A putative Leishmania DNA polymerase theta protects the parasite against oxidative damage

Leishmania infantum is a protozoan parasite that is phagocytized by human macrophages. The host macrophages kill the parasite by generating oxidative compounds that induce DNA damage. We have identified, purified and biochemically characterized a DNA polymerase θ from L. infantum (LiPolθ), demonstrating that it is a DNA-dependent DNA polymerase involved in translesion synthesis of 8oxoG, abasic sites and thymine glycol lesions. Stably transfected L. infantum parasites expressing LiPolθ were significantly more resistant to oxidative and interstrand cross-linking agents, e.g. hydrogen peroxide, cisplatin and mitomycin C. Moreover, LiPolθ-overexpressing parasites showed an increased infectivity toward its natural macrophage host. Therefore, we propose that LiPolθ is a translesion synthesis polymerase involved in parasite DNA damage tolerance, to confer resistance against macrophage aggression.Spanish Ministry of Science and Innovation [AGL2010-21806-C02-01 to V.L., BFU2012-37969 to L.B.]; Comunidad deMadrid [S2010/BMD-2361 to L.B.]; Ramón Areces Foundation [050204100014 to V.L.]Peer Reviewe

GRIDMAT—A Sustainable Material Combining Mat and Geogrid Concept for Ballasted Railways

Under ballast mats (UBM) have demonstrated their capacity to reduce section stiffness and ballast degradation. However, UBM can cause ballast destabilisation under some circumstances due to excessive vertical track deflections, requiring the installation of geogrids over the mat which increases costs and time. As alternative to this solution, this paper shows the design of GridMat: a sustainable technology for ballasted railways that combines the concepts of geogrids and under ballast mats (UBM) manufactured from recycled crumb rubber. This aims to provide damping capacity while limiting the oscillations and settlement of ballast layer. To obtain the optimal GridMat design, five different configurations varying the aperture size and void areas were assessed through laboratory box tests reproducing the track section including the GridMat. Results showed that the optimal Gridmat was of 55 mm aperture seize and 25% void area. To evaluate the sustainability of this design, the expected number of conservation and renewal operations were calculated from full-scale laboratory tests and a life-cycle assessment and life-cycle cost analysis were undertaken. GridMat showed long-term reduction in ballast degradation and track settlement, reducing need for maintenance and renewal operations in comparison with standard mats.Spanish Government RTI2018-102124-J-IO

Expresión de receptores inhibidores y capacidad funcional de las células T como factores de riesgo de transmisión congénita de T. cruzi.

Introducción / Objetivos: En el contexto de la enfermedad de Chagas, la transmisión congénita de T. cruzi es una importante vía de trasmisión de la enfermedad, y constituye un problema de salud pública en zonas endémicas y no endémicas. Durante el desarrollo del embarazo, debe establecerse en gestantes infectadas un equilibrio en el que se mantenga la competencia inmunológica para la defensa de la madre y, al mismo tiempo, inducir los mecanismos de tolerancia necesarios para prevenir una respuesta frente a aloantígenos fetales. El objetivo de este estudio fue caracterizar a nivel inmunológico las modificaciones inducidas por el proceso de gestación en su coexistencia con la infección con T. cruzi y su relación con la transmisión vertical. Métodos: Se evaluó la expresión de receptores inhibitorios y multifuncionalidad de las células T CD4+ y CD8+ en el contexto de la gestación, en un modelo murino de infección crónica con T. cruzi, empleando citometría de flujo multiparamétrica.. Resultados: Los resultados obtenidos muestran que la gestación induce en ratonas infectadas con T. cruzi la disminución del porcentaje de células T que expresan receptores inhibitorios, el aumento de la frecuencia de linfocitos T CD4+ y CD8+ muItifuncionales y el aumento de la carga parasitaria. Así, el 88% de las ratonas infectadas con PCR- antes de la gestación, presentan cantidades detectables del parásito durante la gestación. El 37% de las ratonas gestantes PCR+ son capaces de transmitir el parásito. Interesantemente, aquellas ratonas que transmiten el parásito a su progenie presentan una mayor frecuencia de linfocitos T CD4+ y CD8+ que co-expresan receptores inhibitorios, así como una menor frecuencia de células T multifuncionales. Conclusión: Las ratonas que transmiten verticalmente el parásito no revierten el proceso de homeostasis inducido por el embarazo afectándose así la calidad de respuesta de las células T del hospedador, lo cual parece ser un factor de riesgo en la transmisión congénita de T. cruzi. Palabras Claves: Transmisión congénita de Trypanosoma cruzi, células T, receptores inhibitorios. Keywords: Trypanosoma cruzi congenital transmission, T cells, inhibitory receptors

Atheists on the Santiago way : examining motivations to go on pilgrimage

In the past 30 years, the camino to Santiago de Compostela has been recreated as an eclectic pilgrimage, open to both religious and atheist travelers. Following previous work on motivational orientations and religion, we conducted a study examining atheist versus religious pilgrims' motivations to walk the Santiago way. We assessed pilgrims (N = 360) at various parts of the northern Spanish camino using a questionnaire that measured motivations to go on pilgrimage. In addition, we measured levels of positive and negative affect, physical exertion, and emotional problems. Atheists scored significantly lower on community and religious types of motivations. However, in several measures no differences were found between groups. We suggest that both atheist and religious pilgrims are exploring forms of horizontal and vertical transcendence characterized by a desire to connect to nature and one's deeper sel

Chromosomal localization of the KMP-11 genes in the KP1(+) and KP1(-) strains of Trypanosoma rangeli

Genes encoding for the KMP-11 protein were localized on the chromosomes of Trypanosoma rangeli. These genes were located in two chromosomes of 3,100 and 3,400 kb in the KP1(-) strain whereas in the KP1(+) H14 and Choachí strains, the genes are located in a chromosome of 1,600 kb. The Choachí strain presents an additional band of 1,400 kb. In the Shubacbarina and Munanta strains of Trypanosoma cruzi, the KMP-11 genes are located on a chromosomal band of 1,490 kb. Therefore, the chromosomal localization of the KMP-11 genes presents a potential tool to differentiate among these parasites.En este trabajo se determinó la localización cromosómica de los genes codificantes para la proteína 11 de membrana de los kinetoplástidos en Trypanosoma rangeli. Los resultados indican que estos genes se localizan en dos cromosomas de 3.100 y 3.400 kb en la cepa Tre, KP1(-) mientras que en las cepas KP1(+), H14 y Choachí se ubican en 1.600 kb; la cepa Choachí presenta una banda adicional de 1.400 kb. En las cepas Shubacbarina y Munantá de Trypanosoma cruzi, los genes KMP-11 se localizaron en una banda cromosómica de 1.490 kb. Estos resultados sugieren la potencialidad de la localización cromosómica de los genes kmp-11 para diferenciar estos parásitos.Este estudió fue financiado por Colciencias contrato No. 190-2000.Peer reviewe

Perfil fenotípico de las células CD8+ epítope-específicas como biomarcador de respuesta al tratamiento con benznidazol

Uno de los mayores desafíos en la investigación de la enfermedad de Chagas es la búsqueda de herramientas que permitan evaluar la eficacia del tratamiento. Estudios previos del laboratorio mostraron que los antígenos KMP11, PFR2, HSP70 y 3973d de T. cruzi son reconocidos por sueros de pacientes crónicos con alta especificidad. El uso de estos antígenos como set de biomarcadores, ¿Chagnostik¿, permitió establecer un criterio de eficacia terapéutica, basado en la disminución continua y sustancial de la reactividad de los sueros frente a dichas moléculas. Estos biomarcadores serológicos junto a la evaluación de parámetros inmunológicos celulares podría ser una potente herramienta de seguimiento terapéutico. .Programa Estatal I+D+I (SAF2016-81003-R y SAF2016-80996-R); Red de Investigación en Enfermedades Tropicales (RD16/0027/0005 y RD16/0027/0016) y FEDER

Perfil de respuesta inmunitaria de células T asociada a la protección frente a la re-infección por T. cruzi

Introducción: La enfermedad de Chagas representa un problema de salud pública global, que en su fase crónica implica un alto coste para el sistema de salud y a nivel laboral. No existe un tratamiento antiparasitario efectivo que produzca el aclaramiento del parásito y es escaso el conocimiento sobre los mecanismos que operan en protección. Así, el estudio de la dinámica de las poblaciones de linfocitos T asociados a protección permitirá nuevas aproximaciones terapéuticas. Objetivos: Analizar los procesos de primo- y re-infección con distintas cepas de T. cruzi en un modelo murino de infección experimental al objeto de determinar los patrones inmunológicos a activar para la obtención de una eficaz inmunoterapia frente al Chagas crónico. Materiales y Métodos: Infección experimental con T. cruzi en ratones Balb/c por vía intraperitoneal (5x102 tripomastigotes (primo-infección); 5x105 y 1x105 (re-infección) cepas Y(DTU-II) y SOL(DTUV), respectivamente. Detección anticuerpos antígeno-específicos (IgG e IgG1/IgG2a) mediante ELISA. El análisis del fenotipo y funcionalidad de las células T antígeno-específicas se realizó empleando citometría de flujo multiparamétrica. Resultados: Ratones en fase crónica de la infección por T. cruzi controlan la parasitemia que induce la re-infección con dicho parásito. Este comportamiento está asociado a un claro perfil inmunológico caracterizado por una mayor proporción de células T CD4+ y CD8+ de memoria central (TCM) y efectora (TEM). Asimismo, los ratones re-infectados presentan mayor porcentaje de células T CD8+ multifuncionales que producen IFN-¿, Granzima B y TNF¿ y menor frecuencia de aquellas que expresan los receptores inhibitorios PD-1 y CD160. Las células T CD4+ de los ratones re-infectados muestran una mayor proporción de células que expresan PD-1 y CTLA-4. Conclusiones: Los ratones en fase crónica de infección por T.cruzi controla la re-infección por dicho parásito, asociada a la presencia de una alta frecuencia de células T CD8+ antígeno-específicas de memoria con capacidad multifuncional. Financiación: Programa Estatal I+D+I (MINECO) Ref. SAF2016-81003R y SAF2016- SAF2016-80996-R; Red de Investigación en Enfermedades Tropicales (RICET) Ref. RD16/0027/0005, (ISCIII), España