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    Estudo do mecanismo de ação da eupafolina sobre o metabolismo energético mitocondrial e viabilidade celular de células HELA

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    Orientadora : Maria Eliane Merlin RochaDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 2005Inclui bibliografiaResumo: Flavonóides são compostos fenólicos de baixo peso molecular encontrados em diversas plantas e alimentos de origem natural. Diversos são os estudos que relataram as suas inúmeras propriedades biológicas, entre elas: antioxidante, seqüestradora de radicais livres, inibidora da peroxidação lipídica, etc. A eupafolina (5, 7, 3, 4’ tetrahidroxi 6-metoxiflavona), a flavona objeto de estudo desse trabalho foi extraída das folhas secas do Eupatorium litoralle e seus efeitos sobre parâmetros mitocondriais foram avaliados. Além disso, foi comparada sua atividade sobre a viabilidade celular de células Hela pelo teste do MTT com a hispidulina (5, 7, 4’ trihidroxi 6-metoxiflavona), uma flavona extraída da mesma planta. A eupafolina nas doses testadas (25 – 200 mmol.L-1) provocou uma intensa inibição na velocidade respiratória do estado III, com o glutamato e o succinato de sódio e provocou estímulo do estado IV com ambos os substratos (75 e 100 mmol.L-). Os complexos enzimáticos demonstraram que essa flavona tem como seu principal sítio de ação a região compreendida entre os complexos I e III. A eupafolina não promoveu alteração nas atividades enzimáticas da citocromo C – oxidase e ATPase em mitocôndrias rompidas Este flavonóide inibiu significativamente o inchamento mitocondrial induzido por valinomicina e nitrato de potássio sugerindo que a eupafolina provoca alterações em propriedades da membrana mitocondrial. Tanto a eupafolina quanto a hispidulina causaram uma diminuição (40%) na viabilidade de células HeLa na dose de 100 mmol.L-1 sugerindo que para este parâmetro o anel catecol presente na eupafolina parece não influenciar. Através da análise de voltametria cíclica pode-se observar que a eupafolina sofre oxidação irreversível sendo gerado um pico anódico na região de 0,28 V (Ag/AgCl). Também demonstramos que a eupafolina sofre reações de autooxidação catalisadas por EDTA-Fe+2, com alguns componentes da cadeia respiratória, como o citocromo C, de forma não enzimática, na presença de NADH, e durante essas reações são gerados radicais superóxido e peróxido de hidrogênio. Os resultados obtidos podem explicar em parte os efeitos citotóxicos da eupafolina e dá suporte a possibilidade desse flavonóide poder ser utilizado em terapias anticâncer no futuro.Abstract: Flavonoids are phenolic compounds of low molecular weight widely distributed in plants and natural foods. Several studies biological properties, namely antioxidant, scavenger of free radicals, inhibition of lipid peroxidation, etc. Eupafolin (6-methoxy 5, 7, 3, 4' tetrahydroxyflavone), a flavone used in this study has extracted from dry leaves of Eupatorium litoralle and its effects on mitochondrial metabolism were evaluated. Its action, were compared on cellular viability of the Hela cells by MTT trial to these of hispidulin (6-metoxy - 5, 7, 4' tryhydroxyflavone), a flavone extracted from same plant. Eupafolin (25 - 200 mM) promoted inhibition of the respiratory rate in state III, in the presence of sodium glutamate and succinate, stimulated state IV with both of the oxidizables substrates (75 - 100 mM). The enzymatic complexes showed that eupafolin caused a reduction of enzymatic activities between complexes I and III. With Cytochrome c oxidase, ATPase in intact or disrupted mitochondria in the presence or absence of FCCP enzymes no effect was observed. Eupafolin inhibited the swelling of mitochondria in the presence of valinomycin and KNO3,, what demonstrated indirectly that it interferes with the properties of the mitochondrial membrane. Both eupafolin and hispidulin caused a reduction (40%) in the cellular viability of Hela cells (100 mM), in culture periods (24 h), indicated that the catechol ring did not influenced this parameter. Through voltammetry cyclic analysis eupafolin demonstrated irreversible oxidation with the anodic peak potencial in 0,28 V (Ag/AgCl). Auto-oxidation of eupafolin was demonstrated, catalysed by EDTA-Fe, with some components of the respiratory chain such as cytochrome c, in the presence of NADH, resulting in the production of the superoxide radical and hydrogen peroxide. The results could explain the citotoxic effects of eupafolina and give support to the hypothesis that flavone could be useful in anticancer chemotherapy in the future

    Estudo do mecanismo de ação da eupafolina sobre o metabolismo energético mitocondrial e viabilidade celular de células HELA

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    Orientadora : Maria Eliane Merlin RochaDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica. Defesa: Curitiba, 2005Inclui bibliografiaResumo: Flavonóides são compostos fenólicos de baixo peso molecular encontrados em diversas plantas e alimentos de origem natural. Diversos são os estudos que relataram as suas inúmeras propriedades biológicas, entre elas: antioxidante, seqüestradora de radicais livres, inibidora da peroxidação lipídica, etc. A eupafolina (5, 7, 3, 4’ tetrahidroxi 6-metoxiflavona), a flavona objeto de estudo desse trabalho foi extraída das folhas secas do Eupatorium litoralle e seus efeitos sobre parâmetros mitocondriais foram avaliados. Além disso, foi comparada sua atividade sobre a viabilidade celular de células Hela pelo teste do MTT com a hispidulina (5, 7, 4’ trihidroxi 6-metoxiflavona), uma flavona extraída da mesma planta. A eupafolina nas doses testadas (25 – 200 mmol.L-1) provocou uma intensa inibição na velocidade respiratória do estado III, com o glutamato e o succinato de sódio e provocou estímulo do estado IV com ambos os substratos (75 e 100 mmol.L-). Os complexos enzimáticos demonstraram que essa flavona tem como seu principal sítio de ação a região compreendida entre os complexos I e III. A eupafolina não promoveu alteração nas atividades enzimáticas da citocromo C – oxidase e ATPase em mitocôndrias rompidas Este flavonóide inibiu significativamente o inchamento mitocondrial induzido por valinomicina e nitrato de potássio sugerindo que a eupafolina provoca alterações em propriedades da membrana mitocondrial. Tanto a eupafolina quanto a hispidulina causaram uma diminuição (40%) na viabilidade de células HeLa na dose de 100 mmol.L-1 sugerindo que para este parâmetro o anel catecol presente na eupafolina parece não influenciar. Através da análise de voltametria cíclica pode-se observar que a eupafolina sofre oxidação irreversível sendo gerado um pico anódico na região de 0,28 V (Ag/AgCl). Também demonstramos que a eupafolina sofre reações de autooxidação catalisadas por EDTA-Fe+2, com alguns componentes da cadeia respiratória, como o citocromo C, de forma não enzimática, na presença de NADH, e durante essas reações são gerados radicais superóxido e peróxido de hidrogênio. Os resultados obtidos podem explicar em parte os efeitos citotóxicos da eupafolina e dá suporte a possibilidade desse flavonóide poder ser utilizado em terapias anticâncer no futuro.Abstract: Flavonoids are phenolic compounds of low molecular weight widely distributed in plants and natural foods. Several studies biological properties, namely antioxidant, scavenger of free radicals, inhibition of lipid peroxidation, etc. Eupafolin (6-methoxy 5, 7, 3, 4' tetrahydroxyflavone), a flavone used in this study has extracted from dry leaves of Eupatorium litoralle and its effects on mitochondrial metabolism were evaluated. Its action, were compared on cellular viability of the Hela cells by MTT trial to these of hispidulin (6-metoxy - 5, 7, 4' tryhydroxyflavone), a flavone extracted from same plant. Eupafolin (25 - 200 mM) promoted inhibition of the respiratory rate in state III, in the presence of sodium glutamate and succinate, stimulated state IV with both of the oxidizables substrates (75 - 100 mM). The enzymatic complexes showed that eupafolin caused a reduction of enzymatic activities between complexes I and III. With Cytochrome c oxidase, ATPase in intact or disrupted mitochondria in the presence or absence of FCCP enzymes no effect was observed. Eupafolin inhibited the swelling of mitochondria in the presence of valinomycin and KNO3,, what demonstrated indirectly that it interferes with the properties of the mitochondrial membrane. Both eupafolin and hispidulin caused a reduction (40%) in the cellular viability of Hela cells (100 mM), in culture periods (24 h), indicated that the catechol ring did not influenced this parameter. Through voltammetry cyclic analysis eupafolin demonstrated irreversible oxidation with the anodic peak potencial in 0,28 V (Ag/AgCl). Auto-oxidation of eupafolin was demonstrated, catalysed by EDTA-Fe, with some components of the respiratory chain such as cytochrome c, in the presence of NADH, resulting in the production of the superoxide radical and hydrogen peroxide. The results could explain the citotoxic effects of eupafolina and give support to the hypothesis that flavone could be useful in anticancer chemotherapy in the future

    Cuidados farmacêuticos em instituições de ação social: A extensão como estratégia de ensino e promoção da saúde

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    O cuidado farmacêutico é uma prática profissional, centrada no usuário, que visa à promoção e recuperação da saúde por meio da abordagem farmacoterapêutica. O objetivo desse estudo foi relatar ações extensionistas realizadas em instituições de ação social, na forma de cuidados farmacêuticos prestados por estudantes e professores do curso de Farmácia da Universidade Estadual do Centro-Oeste do Paraná. Um total de 36 estudantes e cinco professores realizaram, entre abril e junho de 2019, consultas farmacêuticas com 57 pessoas assistidas por duas instituições sociais situadas na região urbana do município de Guarapuava/PR. Foi realizado rastreamento de saúde com testes de glicemia capilar e aferição da pressão arterial. A associação entre comorbidades, faixa etária e o consumo de medicamentos foi analisada pelo teste de Pearson. Os estudantes concederam depoimentos através de entrevista aberta, os quais foram interpretados por análise de discurso temática. Do total de 57 consultas farmacêuticas, 47 (82,5%) pessoas receberam aconselhamento, 45 (78,9%) passaram por intervenções, incluindo mudanças no horário de administração dos medicamentos e orientações sobre possíveis interações com alimentos, e 23 (40,3%) receberam encaminhamento médico. Os depoimentos dos estudantes foram categorizados semanticamente em relação à teoria versus prática, formação profissional e vínculo com o paciente. Assim, foi possível reconhecer a saúde como condição resultante do contexto social, suscitando o elo entre promoção da saúde e as condições de vida. O processo de aprendizagem requer do estudante observações próprias da realidade, com atitudes reflexivas que decorrem da inserção de atividades de extensão e pesquisa como metodologia de ensino. Palavras-chave: Cuidados de Saúde; Assistência Farmacêutica; Uso Racional de Medicamentos; Educação em Saúde Pharmaceutical care in social institutions: extension as a strategy for learning and health promotion Abstract: Pharmaceutical care is a professional, user-centered practice that aims to promote and recover health using the pharmacotherapeutic approach. This study aimed to report extensionist actions in social care institutions, as pharmaceutical care provided by students and professors of the Pharmacy course at the Universidade Estadual do Centro-Oeste do Paraná (Paraná State, Brazil). A total of 36 students and five professors conducted pharmaceutical consultations from April to June 2019 with 57 people assisted by two social care institutions located in the urban region of the city of Guarapuava/PR. Health screening was performed with capillary blood glucose tests and blood pressure measurements. The association between comorbidities, age groups, and drug consumption was analyzed by Pearson's test. The students gave testimonies through the open interviews, and the speeches were interpreted by thematic speech analysis. Out of a total of 57 consultations, 47 (82.5%) people received pharmaceutical counseling, 45 (78.9%) went through pharmaceutical interventions, including changes in medication administration schedule and guidance on possible food interactions, and 23 (40.3%) received a medical referral. The students' testimonies were categorized semantically concerning theory versus practice, professional training, and bond with the patient. Thus, it was possible to recognize health as a condition resulting from the social context, raising the link between health promotion and living conditions. The learning process requires students' observations of reality, with reflective attitudes that result from the insertion of extension and research activities as teaching methodologies. Keywords: Health Care; Pharmaceutical Services; Rational Drug Utilization; Health Educatio
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