Papel dos receptores histaminérgicos da medula espinhal na inflamação articular de ratos e sua possível contribuição como adjuvante para os efeitos da morfina

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em FarmacologiaA medula espinhal é conhecida por ser um centro de controle ortodrômico (nocicepção), bem como antidrômico (vasodilatação) na via nociceptiva. Os receptores de histamina participam da transmissão nociceptiva na medula espinhal, assim, é concebível que a histamina possa também desempenhar um papel no controle medular da vasodilatação periférica. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel da via histaminérgica medular na incapacitação, no edema articular e na migração celular induzida pela injeção da carragenina na articulação do joelhos de ratos. Os animais receberam todos os fármacos por via intratecal 20 min antes da injeção intraarticular de carragenina (50 mg). A incapacitação articular foi medida pela contagem do tempo de elevação da pata (TEP), durante 1 min de caminhada forçada a cada hora, num total de 6 horas. O edema foi avaliado pela mensuração do diâmetro articular (DA). Após 6 h, o líquido sinovial foi coletado para a avaliação do infiltrado de leucócitos. A histamina foi hiponociceptiva e pró-edematogenica, diminuindo dessa forma o TEP (20 nmol) e aumentando o DA (0,002 nmol). Da mesma forma, 2-PEA diminuiu o TEP (1 nmol), e aumentou o DA (0,001 nmol). Cetirizina aumentou o TEP (0,126 pmol), e diminuiu do edema (12,6 nmol). O dimaprit diminuiu incapacitação, mas aumentou edema (18 pmol). Da mesma forma, ranitidina aumentou a incapacitação e diminuiu o edema (38 pmol). Immepip diminuiu a incapacitação (8 nmol), mas aumentou o edema (32 nmol). A tioperamida foi hipernociceptiva (4 nmol), e pró-edematogenica (0,04 nmol). A morfina inibiu incapacitação e edema (5, 45 nmol). A co-administração de morfina (0,5 nmol) com cetirizina (12,6 nmol) e immepip (16 pmol) causou hiponocicepção. Cetirizina e thioperamide aumentou o conteúdo sinovial leucócitos. A histamina pode atuar na medula espinhal por receptores H1 e H3 causando hiponocicepção, mas sua ação também pode aumentar a inflamação periférica.Spinal cord is known to be a center that controls ortodromic (nociception) as well as antidromic traffic (vasodilation) in the nociceptive pathway. Histamine receptors are known to participate in the spinal cord nociceptive transmission, thus it is conceivable that histamine may also play a role in the spinal cord control on the peripheral vasodilation. The aim of this study was evaluate the role of spinal cord histamine in the articular incapacitation, edema and cell migration induced by carrageenan injection into rat knee-joints. The animals received intrathecal injection with drugs 20 min before knee-joint carrageenan injection (50 ìg). Articular incapacitation was measured by counting the paw elevation time, during 1-min periods of forced walk hourly. Edema was accessed by the metering of the articular diameter. After 6 h, synovial fluid was collected for the evaluation of leukocyte infiltration. Histamine decreased the incapacitation (20 nmol), while increased the edema (0.002 nmol). Similarly, 2-PEA decreased the incapacitation (1 nmol), and increased the edema (0.001 nmol). Cetirizine increased the incapacitation (0.126 pmol), and decreased edema (12,6 nmol). Dimaprit decreased incapacitation, but increased edema (18 pmol). Similarly, Ranitidine increased incapacitation and decreased edema (38 pmol). Immepip decreased the incapacitation (8 nmol), but increased the edema (32 nmol). Thioperamide increased the incapacitation (4 nmol), and the edema (0.04 nmol). Morphine inhibited incapacitation and edema (5; 45 nmol). The coadministration of morphine (0.5 nmol) with cetirizine (12,6 nmol) and immepip (16 pmol) decreased incapacitation. Cetirizine and thioperamide increased the synovial leukocyte content. Histamine may act in the spinal cord by H1 and H3 receptors to cause hyponociception, but this action may also increase peripheral inflammation

O núcleo tuberomamilar modula a nocicepção e a inflamação periférica via receptor H1 medular

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia, Florianópolis, 2016.A medula espinhal é conhecida por ser um centro de controle ortodrômico (nocicepção) e antidrômico (neuroinflamação) na via nociceptiva. A histamina medular endógena participa da modulação da nocicepção e da inflamação periférica. Estudos prévios relatam o envolvimento do receptor H1 (H1R) medular na nocicepção e de um componente neurogênico na modulação da inflamação periférica. Assim, o nosso objetivo foi analisar o efeito da liberação endógena de histamina através da manipulação farmacológica do núcleo tuberomamilar (TMN) e a participação do receptor H1 medular na modulação da nocicepção e da inflamação periférica em um modelo de monoartirte induzida por carragenina/LPS. Inicialmente uma injeção de carragenina foi realizada na articulação do joelho direito dos ratos e 72 depois o LPS foi administrado na mesma articulação. A avaliação da incapacitação e do edema articular iniciou-se 3 horas após o LPS e foi medida por 3 horas. Administração intratecal de histamina aumentou a incapacitação e o edema articular, enquanto os antagonistas do receptor H1 (cetirizina,) diminuiu ambos os parâmetros. O agonista do receptor H3 (immepip) diminuiu tanto a incapacitação quanto o edema, de forma contraria. O antagonista H3 (tioperamida) aumentou a incapacitação e o edema articular. A microinjeção de glutamato no TMNv, causou um aumento na incapacitação e no edema articular, enquanto que a microinjeção de cloreto de cobalto no TMNv inibiu tanto a incapacitação, quanto o edema articular. Alem disso, a administração prévia de cetirizina ou bumetanida (um bloqueador do cotransportador Na+- K+- 2Cl-, NKCC1) intratecal, previniu o aumento da incapacitação e do edema articular provocado pela microinjeção de glutamato no TMNv. A microinjeção de orexina no TMNv, potencializou a incapacitação e o edema articular. Administração intra-TMNV do antagonista dos receptores de orexina, almorexant, não apresentou efeito sobre a incapacitação e o edema periférico. A histamina pode atuar na medula espinhal através de seus receptores H1 e H3 modulando a nocicepção e a inflamação periférica. O bloqueio medular do receptor H1, inibe a potencialização da incapacitação e do edema decorrente da microinjeção intra-TMNv de glutamato. Similarmente bumetanida inibe a incapacitação e o edema decorrente da microinjeção de glutamato. Consequentemente, isso sugere que o sistema histaminérgico medular pode ser explorado para melhorar a analgesia, bem como o processo inflamatório periférico.Abstract : The spinal cord is known to be a center that controls both ortodromic (nociception) and antidromic traffic (neuroinflammation) of the sensory pathway. Histamine receptors are known to participate in spinal cord nociceptive transmission and previous studies have suggested that spinal H1 receptors play an important role in the modulation of nociception and the neurogenic component of peripheral inflammation in the modulation. We herein investigated the effect of endogenous histamine release by pharmacological manipulation of tuberomammillary nucleus (TMN) and the participation of the medullary H1 receptor, in a carrageenan/LPS-induced arthritis model. LPS was administered in the same joint 72 h after of carrageenan. The articular incapacitation and the increase of articular diameter were measured 3 h after LPS, and hourly for 3 h. Spinal and intra-TMNv treatments were administered 15 and 20 min before LPS injection in the knee-joint, respectively, and compared with the vehicle-treated group. Intrathecally injected histamine increased the incapacitation and the articular diameter, whereas the H1R antagonist, cetirizine, decreased both parameters. The H3R agonist, immepip, decreased both incapacitation and edema, and the H3R antagonist, thioperamide, increased both parameters. Intra-TMN injection of glutamate potentiated both incapacitation and edema, whereas inhibition with cobalt chloride decreased both parameters. Furthermore, previous spinal administration of a subeffective dose of cetirizine or bumetanide (a blocker of the Na+-K+-2Cl- cotransporter, NKCC1), reverted the effect of the intra-TMN glutamate injection on incapacitation and edema. Intra-TMV injection of orexin B increased incapacitation and articular edema, but the antagonist of orexin receptors, almorexant, has no effect on the incapacitation and articular edema. Moreover, combining of orexin B and almorexant inhibit effect of orexin B on incapacitation and edema. Histamine seems to act at the spinal level via H1 and H3 receptors to modulate acute arthritis in rats. An H1 receptor antagonist was found to inhibit the incapacitation and edema potentiated by glutamate administered intra-TMNv. Similarly, bumetanide inhibited the incapacitation and edema potentiated by glutamate administered intra-TMNv. Consequently, our results suggest that histaminergic spinal system has an important role in the transmission of nociception and may be explored for improving analgesia, as well as its peripheral antiinflammatory effects

Comparison of pulsed and continuous ultrasound on tendon repair in rats

No tratamento de lesões tendíneas, o uso do ultrassom surge como possibilidade terapêutica, apesar de lacunas sobre seus efeitos clínicos. O objetivo foi avaliar dois protocolos de ultrassom terapêutico sobre dor e edema após trauma tendíneo. Vinte e um ratos Wistar foram submetidos a trauma no tendão calcâneo e divididos em três grupos: sham (GS); ultrassom contínuo (GUC); e ultrassom pulsado (GUP). O trauma ocorreu sobre a face lateral do tendão calcâneo direito, com energia de 0,40 J. A dor foi avaliada pelo teste de incapacidade funcional e o edema, pelo diâmetro laterolateral. Foram realizadas avaliações previamente à lesão; após 1 hora da indução da lesão; após o 1º tratamento; 2, 8 e 24 horas após lesão; e após o 5º dia. O tratamento ocorreu em 5 dias, com transdutor de 1 MHz, durante 3 minutos, sobre o local do trauma, com dose de 0,4 W/cm² SATA. Os resultados da incapacidade funcional para GS mostraram aumento da nocicepção. Para GUC houve aumento ao comparar a avaliação 1 (AV1) com as avaliações 2 (AV2), 3 (AV3) e 4 (AV4); ao comparar AV2 com as avaliações 5 (AV5) e 6 (AV6) houve diminuição de valores. Para GUP houve aumento ao comparar AV1 com AV2 e AV3, mas ao comparar AV2 com as seguintes, houve diminuição significativa a partir de AV4. Para o edema, os grupos tratados produziram aumento inicial, com redução nas últimas avaliações. O ultrassom terapêutico produziu diminuição de dor e edema, mais precocemente para a forma pulsada.In tendon injuries treatment, the use of ultrasound appears as a therapeutic option, despite the lack of their clinical effects. The aim was to evaluate two therapeutic ultrasound protocols, continuous or pulsed, on the pain and swelling after tendinous trauma. Twenty-one Wistar rats were subjected to traumatic injury in the tendon and divided in three groups: sham (GS), continuous ultrasound (GUC), and pulsed ultrasound (GUP). The injury occurred on right Achilles tendon lateral aspect, with energy of 0.40 J. The pain was assessed by the functional disability test and edema by latero-lateral diameter. The evaluations were performed before the injury; after 1 hour of the lesion induction; after the 1st treatment; 2, 8 and 24 hours after injury; and after the 5th day. The treatment was made for 5 consecutive days, with transductor of 1 MHz, for 3 minutes on the trauma site, with a dose of 0.4 W/cm² SATA. The results of functional disability for GS showed increased nociception. For GUC, there was increased when comparing evaluation 1 (EV1) with evaluations 2 (EV2), 3 (EV3) and 4 (EV4); comparing EV2 to evaluations 5 (AV5) and 6 (AV6), there was decreased values. To GUP there was increased when comparing EV1 with EV2 and EV3, but when comparing EV2 with the following, there was a significant decrease starting from EV4. Edema, treatment groups produced an initial increase with a reduction in recent evaluations. The therapeutic ultrasound produced pain and edema reduction in rats with tendon trauma, and early in the pulsed

ATIVIDADE DE UM NOVO DERIVADO PIRAZOLÍNICO (LQFM 021) EM MODELO DE ARTRITE INDUZIDA POR ADJUVANTE COMPLETO DE FREUND (CFA)

Introdução e objetivos: Os compostos pirazolínicos são conhecidos por apresentar atividade anti-inflamatória, analgésica e antipirética. O objetivo deste trabalho foi avaliar o derivado pirazolínico LQFM 021, em testes nociceptivos crônicos de artrite induzida por CFA. Metodologia: Grupos de ratas (n=7) pré-sensibilizados foram tratados (v.o.) com veículo (10 mL/kg 1 vez/dia), LQFM 021 (15 mg/kg 2 vezes/dia) ou LQFM 021 (30 mg/kg 1 vez/dia). Uma hora após os tratamentos foi feito uma injeção intra-articular de CFA. Medidas do tempo de elevação da pata (TEP) e do diâmetro articular foram realizadas até o 6° dia. Resultados e discussões: Tratamento com LQFM 021 30 mg/kg 1 vez/dia promoveu uma redução progressiva e permanente do TEP a partir do 2° dia, em 26,3; 31,4; 31,3; 41,8 e 47,0 %. A formação do edema foi reduzida a partir do 1° dia de tratamento em 29,6; 15,6; 21,2; 29,2 e 29,5 %. Na migração celular, houve uma redução do número de leucócitos em 34,2 % e polimorfonucleares em 54,3%. Já o tratamento com 15 mg/kg 2 vezes/dia, reduziu o TEP em 29,6; 15,6; 21,2; 29,2 e 29,5 %. No entanto, não inibiu a formação do edema ou número de leucócitos totais, mas reduziu polimorfonucleares em 33,8 %. Conclusões: O derivado LQFM 021 apresentou efeito antinoceptivo e anti-inflamatório em modelo crônico

Estudo microscópio da lesão tecidual em pele de ratos Wistar, tratados com laser de baixa potência

The participation in sports has become increasingly popular, and skin lesions caused by physical activity as well. Physical therapy seeks to address these injuries and their main goal is to reduce the healing time. The aim of this study was to analyze the effects of microscopic low level laser therapy, 670 nm, in the healing process of skin lesions induced in adult rats and to compare the effects of two energy doses. A total of 15 rats were divided into three groups: GC (n = 5) control group; G2J (n = 5) group using the laser with an intensity of 2 J/cm2; G4J (n = 5) with the use of group 4 J/cm2. For the lesion procedure, surrounded by a cast in EVA, withdrew from the animal skin in the cervicodorsal region using surgical scalpel, and made two similar lesions near the scapulae (1 cm2). The treatment was performed for 10 consecutive days from the injury date; the lesion near the right scapula, the dose of energy was deposited in the lesion corners. The results on the reepithelialization tongue showed that the only significant difference G4J. Regarding the metaphase cells number was not found significant difference between treated and control groups. We concluded that treatment with laser in the established dosimetry in this study was not effective in increasing the metaphase cells number. However, was verified positive effect with the dose of 4J/cm2 by measuring the reepithelialization tongue.A participação em esportes tem se tornado cada vez mais popular e lesões cutâneas causadas pela prática de atividade física também. A fisioterapia busca tratar essas lesões e seu principal objetivo é reduzir o tempo de cicatrização. O objetivo deste trabalho foi analisar os efeitos microscópicos do laser de baixa potência, 670 nm, na evolução do processo cicatricial de lesões cutâneas induzidas em ratos adultos e comparar os efeitos entre duas doses de energia. Foram utilizados 15 ratos Wistar, divididos em três grupos: GC (n=5), grupo controle; G2J (n=5), grupo com uso da laserterapia com intensidade de 2 J/cm2; G4J (n=5), grupo com uso de 4 J/cm2. Para a realização da lesão, circundou-se um molde em EVA, retirou-se a pele da região cervicodorsal do animal com uso de bisturi cirúrgico, sendo feitas duas lesões semelhantes próximas às escápulas (1 cm2). O tratamento foi realizado durante 10 dias consecutivos, a partir do dia da lesão, na lesão próxima à escápula direita. A dose de energia foi depositada de forma pontual nos vértices da lesão. Os resultados em relação à língua de reepitelização mostraram que somente o G4J apresentou diferença significativa. No que diz respeito ao número de células em metáfase, não foi encontrado diferença significativa entre os grupos tratados e controle. Pode-se concluir que o tratamento com laser, na dosimetria instituída neste estudo, não foi eficaz em aumentar o número de células em metáfase. Contudo, na dose de 4J/cm2, houve efeito positivo verificado pela medida da língua de reepitelização

Avaliação do músculo tibial anterior de ratos submetidos à um modelo de artrite reumatoide e tratados com laser de baixa potência

Objetivo: avaliar os efeitos do laser de baixa potência (LBP) sobre os parâmetros histomorfométricos do músculo tibial anterior de ratos submetidos a um modelo de artrite reumatoide (AR). Métodos: foram utilizados 20 ratos machos, separados em quatro grupos (n=5): Grupo Controle (GC); Grupo Controle Laser (GCL); Grupo Lesão (GL); Grupo Lesão Laser (GLL). Para indução do modelo de AR foram realizadas duas injeções de Adjuvante Completo de Freund. Após 24 horas da aplicação do CFA no joelho dos animais, iniciou-se o tratamento com LBP, 660 nm, 5 J/cm², em quatro pontos do joelho direito, em dias intercalados durante uma semana, totalizando quatro sessões. Sete dias após a aplicação do CFA os animais foram eutanasiados e o músculo tibial anterior direito foi coletado, pesado, cortado transversalmente e processado para lâminas histológicas, coradas em hematoxilina e eosina. Foram avaliadas características morfológicas e morfométricas. Resultados: na análise morfológica GL apresentou leves alterações morfológicas, com pequena desorganização fascicular, além de algumas fibras com perda do formato poligonal característico, também se observou aumento no número de núcleos e presença de infiltrado inflamatório. Nos animais de GLL as fibras musculares assemelharam-se às de GC, com diminuição de infiltrado inflamatório. Quanto aos dados morfométricos, observou-se, diferença significativa (p=0,004) na massa dos músculos pertencentes à GL, sendo menores que GC. Na análise da área de secção transversa (p=0,015) e menor diâmetro das fibras (p=0,019), os animais lesionados apresentaram menor valor. Quanto ao número de fibras (p<0,001) GC apresentou menor número. Quanto ao número de núcleos, também houve diferença significativa, com GCL tendo menor número comparado a GL (p=0,038) e GLL (p=0,011). Ainda, GC apresentou maior relação núcleo/fibra comparado a GCL (p<0,001), GL (p<0,001) e GLL (p<0,001). Conclusão: o tratamento com LBP promoveu melhora morfológica, porém não foi eficaz na total recuperação morfométrica das variáveis investigadas