Infecção por citomegalovírus em pacientes HIV positivos internados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná

Orientadora : Profª. Drª. Sonia Mara RaboniDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 19/06/2015Inclui referências : f. 84-90Resumo: Apesar da diminuição da prevalência de doença por citomegalovírus humano (HCMV) em indivíduos portadores do HIV após a introdução da terapia antirretroviral (TARV), casos graves de HCMV continuam sendo relatados em pacientes com AIDS, principalmente em indivíduos com contagem de linfócitos T CD4+ abaixo de 100 células/mm3. A doença por HCMV nestes indivíduos pode acelerar a progressão da AIDS e a morte. Apesar da terapia preemptiva não ser indicada para estes indivíduos, a mesma, pode melhorar seu estado imunológico, no entanto é necessária a evidência laboratorial e caracterização da infecção e/ou doença por HCMV. Apesar do impacto na qualidade de vida destes indivíduos não foi realizada a avaliação dos testes diagnósticos para detecção do HCMV em pacientes com HIV/AIDS no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná. Para isso objetivou-se a comparação e definição de um valor de corte dos testes para a detecção do antígeno pp65 e do DNA do HCMV em pacientes com HIV/AIDS, para definição de doença por HCMV. Realizou-se um estudo de Coorte, em que foram incluídos pacientes internados no serviço de infectologia, com solicitação de pesquisa de HCMV, no período de um ano. A detecção do DNA do HCMV foi realizada com a amplificação do gene MIEA por meio de qPCR e a pesquisa da pp65 pelo ensaio de antigenemia. Sessenta e oito pacientes foram monitorados quanto à infecção pelo HCMV com total de 97 amostras coletadas, que foram divididas em dois grupos, amostras de pacientes classificados com doença e sem doença por HCMV. Observou-se diferença significativa entre os grupos, na contagem de linfócitos T CD4+, carga viral, tempo de diagnóstico do HIV e utilização de TARV. A análise dos ensaios de antigenemia e qPCR, baseada na divisão dos grupos, apresentou diferenças estatísticas, tanto no resultado qualitativo como quantitativo. A avaliação do desempenho da pesquisa da pp65 e da qPCR apresentaram valores, respectivamente, de sensibilidade de 77% (IC95% 45 a 93%) e 100% (IC95% 71 a 100%) e especificidade de 80% (IC95% 70 a 88%) e 61,9% (IC95% 50 a 72%) com alto valor preditivo negativo em ambos os ensaios. O valor de corte encontrado da antigenemia foi de 1,5 células positivas/200.000 leucócitos e do qPCR 3,715 log/mL. Não foi encontrada diferença de sobrevida entre os pacientes com e sem doença por HCMV. Os resultados indicam que a antigenemia e o qPCR são adequados para o monitoramento da doença por HCMV nestes indivíduos. No entanto, apesar de não ser constatado o aumento de sobrevida dos pacientes com tratamento específico, mais estudos devem ser realizados, com maior número de amostras e validação do ponto de corte para confirmar os resultados. Palavras-chave: AIDS, HCMV, qPCR, antigenemia para HCMV.Abstract: Despite the decrease in prevalence of disease by human cytomegalovirus (HCMV) in individuals with HIV, after the introduction of antiretroviral therapy (ART), severe cases of HCMV continue to be reported in AIDS patients, especially in individuals with CD4+ T lymphocyte count below 100 cells/mm3. The HCMV disease in these patients can accelerate the progression of AIDS and death. Although preemptive therapy is not indicated for these individuals, it can improve its immune status, however laboratory evidence and HCMV infection and/or disease characterization is necessary. Despite the impact on life quality of these individuals, the evaluation of diagnostic tests for HCMV detection in patients with HIV / AIDS at the Clinical Hospital of the Federal University of Parana was not carried out. To do this we aimed the comparison and the definition a cutoff value of the tests for the detection of the antigen pp65 and HCMV DNA in patients with HIV/AIDS, to define HCMV disease. We conducted a cohort study, in which were included patients admitted to the infectious diseases, with request to HCMV research, within one year. Detection of HCMV DNA was performed by amplification of the MIEA gene using qPCR and screening of the pp65 antigenemia assay. Sixty-eight patients were monitored for infection with HCMV with a total of 97 collected samples, which were divided in two groups, samples from patients classified with and without the HCMV disease. A significant difference in CD4+ T cell count, viral load, diagnosis time of HIV and use of HAART was observed between the groups. Analysis of antigenemia assays and qPCR, based on the division of the groups, presented statistical differences in both, qualitative and quantitative results. The evaluation of pp65 and qPCR performances gave values, respectively, a sensitivity of 77% (95% 45 to 93%) and 100% (95% CI 71-100%) and specificity of 80% (70 to 95% 88%) and 61.9% (95% CI 50 to 72%) with high negative predictive value in both assays. The cutoff value found for antigenemia was 1.5 positive cells/200,000 leukocytes and qPCR 3.715 log/ml. There was no difference in survival between patients with and without disease by HCMV. The results indicate that antigenemia and qPCR are suitable for monitoring HCMV disease in these individuals. However, despite not being observed increased survival of patients with specific treatment, more studies should be conducted, with more samples and cut-off validation to confirm the results. Keywords: AIDS, HCMV, qPCR, antigenemia for HCMV

Infecção por citomegalovírus em pacientes HIV positivos internados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná

Orientadora : Profª. Drª. Sonia Mara RaboniDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 19/06/2015Inclui referências : f. 84-90Resumo: Apesar da diminuição da prevalência de doença por citomegalovírus humano (HCMV) em indivíduos portadores do HIV após a introdução da terapia antirretroviral (TARV), casos graves de HCMV continuam sendo relatados em pacientes com AIDS, principalmente em indivíduos com contagem de linfócitos T CD4+ abaixo de 100 células/mm3. A doença por HCMV nestes indivíduos pode acelerar a progressão da AIDS e a morte. Apesar da terapia preemptiva não ser indicada para estes indivíduos, a mesma, pode melhorar seu estado imunológico, no entanto é necessária a evidência laboratorial e caracterização da infecção e/ou doença por HCMV. Apesar do impacto na qualidade de vida destes indivíduos não foi realizada a avaliação dos testes diagnósticos para detecção do HCMV em pacientes com HIV/AIDS no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná. Para isso objetivou-se a comparação e definição de um valor de corte dos testes para a detecção do antígeno pp65 e do DNA do HCMV em pacientes com HIV/AIDS, para definição de doença por HCMV. Realizou-se um estudo de Coorte, em que foram incluídos pacientes internados no serviço de infectologia, com solicitação de pesquisa de HCMV, no período de um ano. A detecção do DNA do HCMV foi realizada com a amplificação do gene MIEA por meio de qPCR e a pesquisa da pp65 pelo ensaio de antigenemia. Sessenta e oito pacientes foram monitorados quanto à infecção pelo HCMV com total de 97 amostras coletadas, que foram divididas em dois grupos, amostras de pacientes classificados com doença e sem doença por HCMV. Observou-se diferença significativa entre os grupos, na contagem de linfócitos T CD4+, carga viral, tempo de diagnóstico do HIV e utilização de TARV. A análise dos ensaios de antigenemia e qPCR, baseada na divisão dos grupos, apresentou diferenças estatísticas, tanto no resultado qualitativo como quantitativo. A avaliação do desempenho da pesquisa da pp65 e da qPCR apresentaram valores, respectivamente, de sensibilidade de 77% (IC95% 45 a 93%) e 100% (IC95% 71 a 100%) e especificidade de 80% (IC95% 70 a 88%) e 61,9% (IC95% 50 a 72%) com alto valor preditivo negativo em ambos os ensaios. O valor de corte encontrado da antigenemia foi de 1,5 células positivas/200.000 leucócitos e do qPCR 3,715 log/mL. Não foi encontrada diferença de sobrevida entre os pacientes com e sem doença por HCMV. Os resultados indicam que a antigenemia e o qPCR são adequados para o monitoramento da doença por HCMV nestes indivíduos. No entanto, apesar de não ser constatado o aumento de sobrevida dos pacientes com tratamento específico, mais estudos devem ser realizados, com maior número de amostras e validação do ponto de corte para confirmar os resultados. Palavras-chave: AIDS, HCMV, qPCR, antigenemia para HCMV.Abstract: Despite the decrease in prevalence of disease by human cytomegalovirus (HCMV) in individuals with HIV, after the introduction of antiretroviral therapy (ART), severe cases of HCMV continue to be reported in AIDS patients, especially in individuals with CD4+ T lymphocyte count below 100 cells/mm3. The HCMV disease in these patients can accelerate the progression of AIDS and death. Although preemptive therapy is not indicated for these individuals, it can improve its immune status, however laboratory evidence and HCMV infection and/or disease characterization is necessary. Despite the impact on life quality of these individuals, the evaluation of diagnostic tests for HCMV detection in patients with HIV / AIDS at the Clinical Hospital of the Federal University of Parana was not carried out. To do this we aimed the comparison and the definition a cutoff value of the tests for the detection of the antigen pp65 and HCMV DNA in patients with HIV/AIDS, to define HCMV disease. We conducted a cohort study, in which were included patients admitted to the infectious diseases, with request to HCMV research, within one year. Detection of HCMV DNA was performed by amplification of the MIEA gene using qPCR and screening of the pp65 antigenemia assay. Sixty-eight patients were monitored for infection with HCMV with a total of 97 collected samples, which were divided in two groups, samples from patients classified with and without the HCMV disease. A significant difference in CD4+ T cell count, viral load, diagnosis time of HIV and use of HAART was observed between the groups. Analysis of antigenemia assays and qPCR, based on the division of the groups, presented statistical differences in both, qualitative and quantitative results. The evaluation of pp65 and qPCR performances gave values, respectively, a sensitivity of 77% (95% 45 to 93%) and 100% (95% CI 71-100%) and specificity of 80% (70 to 95% 88%) and 61.9% (95% CI 50 to 72%) with high negative predictive value in both assays. The cutoff value found for antigenemia was 1.5 positive cells/200,000 leukocytes and qPCR 3.715 log/ml. There was no difference in survival between patients with and without disease by HCMV. The results indicate that antigenemia and qPCR are suitable for monitoring HCMV disease in these individuals. However, despite not being observed increased survival of patients with specific treatment, more studies should be conducted, with more samples and cut-off validation to confirm the results. Keywords: AIDS, HCMV, qPCR, antigenemia for HCMV

In situ cell retention of a CHO culture by a reverse‐flow diafiltration membrane bioreactor

Heterogeneities occur in various bioreactor designs including cell retention devices. Whereas in external devices changing environmental conditions cannot be prevented, cells are retained in their optimal environment in internal devices. Conventional reverse-flow diafiltration utilizes an internal membrane device, but pulsed feeding causes temporal heterogeneities. In this study, the influence of conventional reverse-flow diafiltration on the yeast Hansenula polymorpha is investigated. Alternating 180 s of feeding with 360 s of non-feeding at a dilution rate of 0.2 h(-1) results in an oscillating DOT signal with an amplitude of 60%. Thereby, induced short-term oxygen limitations result in the formation of ethanol and a reduced product concentration of 25%. This effect is enforced at increased dilution rate. To overcome this cyclic problem, sequential operation of three membranes is introduced. Thus, quasi-continuous feeding is achieved reducing the oscillation of the DOT signal to an amplitude of 20% and 40% for a dilution rate of 0.2 h(-1) and 0.5 h(-1), respectively. Fermentation conditions characterized by complete absence of oxygen limitation and without formation of overflow metabolites could be obtained for dilution rates from 0.1 h(-1) - 0.5 h(-1). Thus, sequential operation of three membranes minimizes oscillations in the DOT signal providing a nearly homogenous culture over time

Hantavirus infection prevalence in wild rodents and human anti-hantavirus serological profiles from different geographic areas of South Brazil

Submitted by Sandra Infurna ([email protected]) on 2016-10-04T10:54:29Z No. of bitstreams: 1 elba_lemos_etal_IOC_2012.pdf: 857790 bytes, checksum: 2d0d6f98823d22028c3e4c0b52bff296 (MD5)Approved for entry into archive by Sandra Infurna ([email protected]) on 2016-10-04T11:19:16Z (GMT) No. of bitstreams: 1 elba_lemos_etal_IOC_2012.pdf: 857790 bytes, checksum: 2d0d6f98823d22028c3e4c0b52bff296 (MD5)Made available in DSpace on 2016-10-04T11:19:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 elba_lemos_etal_IOC_2012.pdf: 857790 bytes, checksum: 2d0d6f98823d22028c3e4c0b52bff296 (MD5) Previous issue date: 2012Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil / Universidade Federal do Paraná. Departamento de Doenças Infecciosas. Curitiba, PR, Brasil.Universidad de La Republica. Facultad de Ciencias. Montevideo, Uruguay.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Programa de Pós-Graduação em Biologia Parasitária. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Secretaria de Estado de Saúde do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.Secretaria de Estado de Saúde do Paraná. Curitiba, PR, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil.Paraná state presents the fourth highest number of accumulated cases of hantavirus pulmonary syndrome in Brazil. To map the risk areas for hantavirus transmission we carried out a study based on rodent trapping and determined the anti-hantavirus seroprevalence in these animals and in the inhabitants of these localities. Overall seroprevalence in rodents and humans were 2.5% and 2.4%, respectively. Eighty-two percent of the seropositive rodents were genetically analyzed. Phylogenetic analyses revealed that hantaviruses from rodent samples cluster with Araucária (Juquitiba-like) or Jaborá hantavirus genotypes. The Jaborá strain was identified in Akodon serrensis and Akodon montensis, whereas the Araucária strain was detected in Oligoryzomys nigripes, Oxymycterus judex, A. montensis, and Akodon paranaensis, with the latter species being identified for the first time as a natural host. These findings expose the complex relationships between virus and reservoirs in Brazil, which could have an impact on hantavirus transmission dynamics in nature and human epidemiology