Direct transport across the plasma membrane of mammalian cells of Leishmania HASPB as revealed by a CHO export mutant

Leishmania HASPB is a lipoprotein that is exported to the extracellular space from both Leishmania parasites and mammalian cells via an unconventional secretory pathway. Exported HASPB remains anchored in the outer leaflet of the plasma membrane mediated by myristate and palmitate residues covalently attached to the N-terminal SH4 domain of HASPB. HASPB targeting to the plasma membrane depends on SH4 acylation that occurs at intracellular membranes. How acylated HASPB is targeted to the plasma membrane and, in particular, the subcellular site of HASPB membrane translocation is unknown. In order to address this issue, we screened for clonal CHO mutants that are incapable of exporting HASPB. A detailed characterization of such a CHO mutant cell line revealed that the expression level of the HASPB reporter molecule is unchanged compared to CHO wild-type cells; that it is both myristoylated and palmitoylated; and that it is mainly localized to the plasma membrane as judged by confocal microscopy and subcellular fractionation. However, based on a quantitative flow cytometry assay and a biochemical biotinylation assay of surface proteins, HASPB transport to the outer leaflet of the plasma membrane is largely reduced in this mutant. From these data, we conclude that the subcellular site of HASPB membrane translocation is the plasma membrane as the reporter molecule accumulates in this location when export is blocked. Thus, these results allow us to define a two-step process of HASPB cell surface biogenesis in which SH4 acylation of HASPB firstly mediates intracellular targeting to the plasma membrane. In a second step, the plasma membrane-resident machinery, which is apparently disrupted in the CHO mutant cell line, mediates membrane translocation of HASPB. Intriguingly, the angiogenic growth factor FGF-2, another protein secreted by unconventional means, is shown to be secreted normally from the HASPB export mutant cell line. These observations demonstrate that the export machinery component defective in the export mutant cell line functions specifically in the HASPB export pathway

Incidencia de Fusarium verticilloides y Fusarium graminearum en granos de híbridos comerciales de maíz, cosechados en la campaña 2011/2012 en seis localidades de las provincias de Tucumán y Salta

El cultivo de maíz (Zea mays L.) es afectado por patógenos fúngicos que causan podredumbres de grano y espiga. Entre los más frecuentes, se destacan por su importancia Fusarium verticillioides, F. graminearum y Aspergillus flavus ,ya que además contaminan el grano con micotoxinas. Diversas especies de Fusarium pueden dañar las mazorcas antes de la cosecha o los granos de maíz que se almacenan en condiciones inadecuadas, además de producir tizón de plántulas y pudrición de raíces y tallos. Los agentes de Fusarium asociados a la pudrición de mazorca más importantes en el mundo son Fusarium verticillioides, Fusarium graminearum, F. proliferatum y F. subglutinans. De todos ellos, F. verticillioides y F. graminearum son los más frecuentes. El objetivo del trabajo fue evaluar en laboratorio la incidencia de F. verticillioides y F. graminearum en granos de híbridos comerciales de maíz, cosechados en la campaña 2011/2012 de los ensayos de fechas de siembra y macroparcelas realizados por la Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres (EEAOC) en diferentes localidades de Tucumán y Salta. La incidencia de Fusarium verticillioides, tanto para los híbridos templados como para los tropicales, osciló de 40 a 45% (valor promedio de los diferentes híbridos evaluados) en las tres fechas de siembra. En los híbridos de mezclas, la incidencia promedio para la primera y segunda fecha fue de 30% y menos del 20% para la tercera fecha. La incidencia de F. graminearum fue menor del 10% para las tres fecha de siembra y para los tres grupos de híbridos en ensayo. En los ensayos de macroparcelas, los valores promedios de incidencia de los patógenos variaron según las diferentes localidades. La incidencia de Fusarium verticillioides en la semilla fue mayor en Rosario de la Frontera (50-75%). En el Azul, Trancas y Monte Redondo se detectaron valores promedios entre 20 y 49% y los menores valores se observaron en Las Lajitas (menos de 20%). La incidencia de F. graminearum fue mayor en Las Lajitas (15-25%), mientras que en el resto de las localidades no superó el 10%.Fil: Aguaysol, N. Catalina. Gobierno de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres; ArgentinaFil: Gonzalez, Victoria. Gobierno de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres; ArgentinaFil: de Lisi, Vicente. Gobierno de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres; ArgentinaFil: Reznikov, Sebastian. Gobierno de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres; ArgentinaFil: Stegmayer, C. Adolfo. Gobierno de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres; ArgentinaFil: Henriquez, Diego. Gobierno de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres; ArgentinaFil: Ploper, Leonardo Daniel. Gobierno de Tucumán. Ministerio de Desarrollo Productivo. Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; Argentin

Importancia de la podredumbre carbonosa de la soja en el noroeste argentino durante las campañas 2010/2011, 2011/2012 y 2012/2013.

Numerosas enfermedades afectan a la soja [Glycine max (L.) Merr.] en el noroeste argentino (NOA). Entre estas enfermedades se encuentra la podredumbre carbonosa, producida por Macrophomina phaseolina, un patógeno débil de soja y de otras especies vegetales, que solamente afecta los cultivos cuando el crecimiento de las plantas se ve retardado por tiempo cálido y seco durante períodos prolongados. En el presente trabajo se detallan las principales características de la enfermedad y de su agente causal, y se resumen los resultados de las prospecciones de esta patología en los cultivos de soja en la región, realizadas por el personal de la Sección Fitopatología de la Estación Experimental Agroindustrial Obispo Colombres (EEAOC) durante las campañas 2010/2011, 2011/2012/ y 2012/2013. Se determinó que los valores de incidencia de la enfermedad fueron aumentando con los años, alcanzando valores entre 1 y 5% en la campaña 2010/2011, entre 5 y 30% en 2011/2012 y llegando a valores entre 5 y 90% en 2012/2013. A su vez los valores de prevalencia en los lotes monitoreados en estadio fenológico R7 fueron del 100%. Para cuantificar el desarrollo de la enfermedad en 2012/2013, se graficaron las curvas epidémicas, resultados de la interacción del hospedante (soja), patógeno (M. phaseolina), el ambiente y el hombre a través del manejo del sistema productivo, en una relación en el transcurso del tiempo. Se calculó el área bajo la curva de progreso de la enfermedad (ABCPE) para los diferentes lotes monitoreados. Dentro de los lotes que presentaron mayores valores de ABCPE se encuentran los ubicados en Las Lajitas con 725, Pichanal con 650 seguido por el Lote 1 ubicado en Gral. Mosconi con 470 y el lote de Rapelli con 255. Las pérdidas ocasionadas por M. phaseolina fueron mayores en aquellos lotes en donde el incremento significativo de la incidencia de la enfermedad ocurrió en estadios fenológicos reproductivos tempranos, lo cual se tradujo en los mayores valores de ABCPE. Las pérdidas y los valores de ABCPE fueron mayores en los lotes de Las Lajitas y Pichanal en la provincia de Salta, en los cuales las plantas alcanzaron la madurez temprana y muerte debido a M. phaseolina en estadios fenológicos reproductivos R5.1 que impidieron a las plantas enfermas llegar a formar granos. El lote ubicado en General Mosconi, Salta fue el que presentó los mayores valores de incidencia en R7 (90%); pero el aumento significativo de la enfermedad recién ocurrió en el estadio fenológico R5.5 y consecuentemente las pérdidas ocasionadas fueron menores ya que posibilitó la formación de semillas, aunque de menor peso y tamaño al reducir la duración del llenado.Fil: Reznikov, Sebastian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: de Lisi, Vicente. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Stegmayer, C. Adolfo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Jalil, Ana C.. Universidad Nacional de Tucumán. Facultad de Agronomía y Zootecnia; ArgentinaFil: Alarcón, Pedro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Martinez, María J. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Gonzalez, Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Vellicce, Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Castagnaro, Atilio Pedro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; ArgentinaFil: Ploper, Leonardo Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Tucumán. Instituto de Tecnología Agroindustrial del Noroeste Argentino; Argentin

The Real-World Experiences of Persons With Multiple Sclerosis During the First COVID-19 Lockdown: Application of Natural Language Processing.

The increasing availability of "real-world" data in the form of written text holds promise for deepening our understanding of societal and health-related challenges. Textual data constitute a rich source of information, allowing the capture of lived experiences through a broad range of different sources of information (eg, content and emotional tone). Interviews are the "gold standard" for gaining qualitative insights into individual experiences and perspectives. However, conducting interviews on a large scale is not always feasible, and standardized quantitative assessment suitable for large-scale application may miss important information. Surveys that include open-text assessments can combine the advantages of both methods and are well suited for the application of natural language processing (NLP) methods. While innovations in NLP have made large-scale text analysis more accessible, the analysis of real-world textual data is still complex and requires several consecutive steps. We developed and subsequently examined the utility and scientific value of an NLP pipeline for extracting real-world experiences from textual data to provide guidance for applied researchers. We applied the NLP pipeline to large-scale textual data collected by the Swiss Multiple Sclerosis (MS) registry. Such textual data constitute an ideal use case for the study of real-world text data. Specifically, we examined 639 text reports on the experienced impact of the first COVID-19 lockdown from the perspectives of persons with MS. The pipeline has been implemented in Python and complemented by analyses of the "Linguistic Inquiry and Word Count" software. It consists of the following 5 interconnected analysis steps: (1) text preprocessing; (2) sentiment analysis; (3) descriptive text analysis; (4) unsupervised learning-topic modeling; and (5) results interpretation and validation. A topic modeling analysis identified the following 4 distinct groups based on the topics participants were mainly concerned with: "contacts/communication;" "social environment;" "work;" and "errands/daily routines." Notably, the sentiment analysis revealed that the "contacts/communication" group was characterized by a pronounced negative emotional tone underlying the text reports. This observed heterogeneity in emotional tonality underlying the reported experiences of the first COVID-19-related lockdown is likely to reflect differences in emotional burden, individual circumstances, and ways of coping with the pandemic, which is in line with previous research on this matter. This study illustrates the timely and efficient applicability of an NLP pipeline and thereby serves as a precedent for applied researchers. Our study thereby contributes to both the dissemination of NLP techniques in applied health sciences and the identification of previously unknown experiences and burdens of persons with MS during the pandemic, which may be relevant for future treatment

Hypogammaglobulinemia: A contributing factor to multiple sclerosis fatigue?

OBJECTIVE Fatigue is one of the most disabling and difficult to treat symptoms of autoimmune diseases and frequently presents in people with multiple sclerosis (PwMS). Hypogammaglobulinemia for immunoglobulin G (IgG) affects approximately 8-25% of PwMS. We performed a retrospective analysis to investigate the association of MS-fatigue and IgG hypogammaglobulinemia. METHODS PwMS, treated at Eginition University Hospital Athens or at the University Hospital Bern, were included (n = 134 patients (Bern n = 99; Athens n = 35)). Mann Whitney U-test (MWT), ANOVA test, Chi2 test and multivariable linear regression models were run. RESULTS 97/134 (72.4%) PwMS reported fatigue. In the multivariable linear regression analysis, IgG serum concentration (-1.6, 95%CI -2.7 - -0.5, p = 0.006), daytime sleepiness (0.8, 95%CI 0.2-1.4, p = 0.009), and a depressive mood (1.1, 95%CI 0.8-1.4, p < 0.001) were significantly associated with fatigue. The impact of IgG serum concentration (-2.9 95%CI -4.7 - -1.1, p = 0.002) remained significant also in the subcohort of PwMS without depressive symptoms or daytime sleepiness. CONCLUSIONS We found an association between IgG hypogammaglobulinemia and fatigue in PwMS (Level of Evidence IV), which might be translated to other autoimmune diseases. It bears a potential therapeutic consequence considering IgG supplementation strategies, if our finding can be validated prospectively

The Glycosylphosphatidylinositol-PLC in Trypanosoma brucei Forms a Linear Array on the Exterior of the Flagellar Membrane Before and After Activation

Bloodstream forms of Trypanosoma brucei contain a glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase C (GPI-PLC) that cleaves the GPI-anchor of the variable surface glycoprotein (VSG). Its location in trypanosomes has been controversial. Here, using confocal microscopy and surface labelling techniques, we show that the GPI-PLC is located exclusively in a linear array on the outside of the flagellar membrane, close to the flagellar attachment zone, but does not co-localize with the flagellar attachment zone protein, FAZ1. Consequently, the GPI-PLC and the VSG occupy the same plasma membrane leaflet, which resolves the topological problem associated with the cleavage reaction if the VSG and the GPI-PLC were on opposite sides of the membrane. The exterior location requires the enzyme to be tightly regulated to prevent VSG release under basal conditions. During stimulated VSG release in intact cells, the GPI-PLC did not change location, suggesting that the release mechanism involves lateral diffusion of the VSG in the plane of the membrane to the fixed position of the GPI-PLC

Alternative use of miRNA-biogenesis co-factors in plants at low temperatures

Plants use molecular mechanisms to sense temperatures, trigger quick adaptive responses and thereby cope with environmental changes. MicroRNAs (miRNAs) are key regulators of plant development under such conditions. The catalytic action of DICER LIKE 1 (DCL1), in conjunction with HYPONASTIC LEAVES 1 (HYL1) and SERRATE (SE), produces miRNAs from double-stranded RNAs. As plants lack a stable internal temperature to which enzymatic reactions could be optimized during evolution, reactions such as miRNA processing have to be adjusted to fluctuating environmental temperatures. Here, we report that with decreasing ambient temperature, the plant miRNA biogenesis machinery becomes more robust, producing miRNAs even in the absence of the key DCL1 co-factors HYL1 and SE. This reduces the morphological and reproductive defects of se and hyl1 mutants, restoring seed production. Using small RNA-sequencing and bioinformatics analyses, we have identified specific miRNAs that become HYL1/SE independent for their production in response to temperature decrease. We found that the secondary structure of primary miRNAs is key for this temperature recovery. This finding may have evolutionary implications as a potential adaptation-driving mechanism to a changing climate