Transfusão de plaquetas: do empirismo ao embasamento científico

Despite major advances in Brazilian blood transfusion therapy with a growing number of scientific publications, an increased number of repeat donors and a decline in serological ineligibility, a lack of conformity in the application of pre-transfusion tests that may compromise transfusion safety is still observed at transfusion agencies in the fringes of the blood transfusion therapy system. Additionally, although high rates of platelet transfusion refractoriness and significant rates of alloimmunization have been demonstrated in the international literature, few Brazilian centers have been concerned with the study of platelet alloimmunization and even fewer centers have evaluated the efficacy of platelet concentrate transfusion. As more than one million Brazilians, including many repeat blood donors, are listed in the National Bone Marrow Donor Registry (Redome), why not grant transfusion therapy services access to the HLA typing of these blood and marrow donors after obtaining their consent? And why not make use of the Redome data to evaluate the HLA compatibility of donors for alloimmunized patients who are candidates for bone marrow transfusion and who have already been typed? These measures, together with the identification of ABO and HPA antigens, will permit a complete assessment of platelet immunology, will guarantee the transfusion safety of this blood component, and will put Brazil at the same level as the so-called developed countries in terms of transfusion medicine

Identification of platelet refractoriness in oncohematologic patients

OBJECTIVES: To identify the occurrence and the causes of platelet refractoriness in oncohematologic patients. INTRODUCTION: Platelet refractoriness (unsatisfactory post-transfusion platelet increment) is a severe problem that impairs the treatment of oncohematologic patients and is not routinely investigated in most Brazilian services. METHODS: Forty-four episodes of platelet concentrate transfusion were evaluated in 16 patients according to the following parameters: corrected count increment, clinical conditions and detection of anti-platelet antibodies by the platelet immunofluorescence test (PIFT) and panel reactive antibodies against human leukocyte antigen class I (PRA-HLA). RESULTS: Of the 16 patients evaluated (median age: 53 years), nine (56%) were women, seven of them with a history of pregnancy. An unsatisfactory increment was observed in 43% of the transfusion events, being more frequent in transfusions of random platelet concentrates (54%). Platelet refractoriness was confirmed in three patients (19%), who presented immunologic and non-immunologic causes. Alloantibodies were identified in eight patients (50%) by the PIFT and in three (19%) by the PRA-HLA. Among alloimmunized patients, nine (64%) had a history of transfusion, and three as a result of pregnancy (43%). Of the former, two were refractory (29%). No significant differences were observed, probably as a result of the small sample size. CONCLUSION: The high rate of unsatisfactory platelet increment, refractoriness and alloimmunization observed support the need to set up protocols for the investigation of this complication in all chronically transfused patients, a fundamental requirement for the guarantee of adequate management

Linfocitopenia T CD4+ associada à sideropenia: relato de caso

Importance of the issue: Idiopathic CD4 T lymphocytopenia is an unusual immune defect in which there is an unexplained deficit of CD4 T cells. This case presents a 39-year-old female patient, with CD4+ T lymphocytopenia, who was not infected with immunosuppressive viruses neither was she subjected to immunosuppressive therapies. Comments: While monitoring the patient, she was found to have very low serum ferritin and, after parenteral iron therapy, there were changes in CD4+ cell levels, indicating that, in this case, lymphocytopenia was secondary to sideropenia. The patient is being kept under strict control of serum iron and periodic immunological evaluation, and she has not showed any clinical and/or laboratory adverse events so far. It is known that iron deficiency is an important factor in the genesis of immunological changes that occur in patients with iron deficiency anemia. It is important to understand the effects of iron deficiency on the immune system due to its high prevalence worldwide. Moreover, it could also help to clarify several cases of idiopathic CD4 lymphocytopenia.Importância da questão: Linfocitopenia T CD4+ idiopática é um defeito imune incomum em que há um déficit inexplicável de células T CD4. Este caso clínico apresenta uma paciente do sexo feminino de 39 anos de idade, com linfocitopenia T CD4+, que não estava infectada por vírus imunossupressores nem foi submetida a terapias imunossupressoras. Comentários: Durante o acompanhamento da paciente, ela apresentou níveis muito baixos de ferritina sérica e, após a terapia parenteral de ferro, houve aumento da quantidade de células CD4+, indicando que, neste caso, linfocitopenia era secundária à sideropenia. A paciente estava sendo mantida sob rigoroso controle de ferro sérico e avaliação imunológica periódica, e não mostrou quaisquer eventos adversos clínicos e/ou laboratoriais até o momento. Com base em mudanças na reatividade imunológica dos pacientes observadas por outros pesquisadores após a suplementação com ferro, é evidente que a deficiência de ferro seria um fator importante na gênese das alterações imunológicas que ocorrem em pacientes com anemia ferropriva. É importante compreender os efeitos da deficiência de ferro no sistema imune, devido à sua elevada prevalência mundial. Essas informações também auxiliariam a esclarecer vários casos de linfocitopenia T CD4+ idiopática

A General Latent Class Model for Performance Evaluation of Diagnostic Tests in the Absence of a Gold Standard: An Application to Chagas Disease

We propose a new general Bayesian latent class model for evaluation of the performance of multiple diagnostic tests in situations in which no gold standard test exists based on a computationally intensive approach. The modeling represents an interesting and suitable alternative to models with complex structures that involve the general case of several conditionally independent diagnostic tests, covariates, and strata with different disease prevalences. The technique of stratifying the population according to different disease prevalence rates does not add further marked complexity to the modeling, but it makes the model more flexible and interpretable. To illustrate the general model proposed, we evaluate the performance of six diagnostic screening tests for Chagas disease considering some epidemiological variables. Serology at the time of donation (negative, positive, inconclusive) was considered as a factor of stratification in the model. The general model with stratification of the population performed better in comparison with its concurrents without stratification. The group formed by the testing laboratory Biomanguinhos FIOCRUZ-kit (c-ELISA and rec-ELISA) is the best option in the confirmation process by presenting false-negative rate of 0.0002% from the serial scheme. We are 100% sure that the donor is healthy when these two tests have negative results and he is chagasic when they have positive results

Performance of six diagnostic tests to screen for Chagas disease in blood banks and prevalence of Trypanosoma cruzi infection among donors with inconclusive serology screening based on the analysis of epidemiological variables

OBJECTIVE: The frequent occurrence of inconclusive serology in blood banks and the absence of a gold standard test for Chagas'disease led us to examine the efficacy of the blood culture test and five commercial tests (ELISA, IIF, HAI, c-ELISA, rec-ELISA) used in screening blood donors for Chagas disease, as well as to investigate the prevalence of Trypanosoma cruzi infection among donors with inconclusive serology screening in respect to some epidemiological variables. METHODS: To obtain estimates of interest we considered a Bayesian latent class model with inclusion of covariates from the logit link. RESULTS: A better performance was observed with some categories of epidemiological variables. In addition, all pairs of tests (excluding the blood culture test) presented as good alternatives for both screening (sensitivity > 99.96% in parallel testing) and for confirmation (specificity > 99.93% in serial testing) of Chagas disease. The prevalence of 13.30% observed in the stratum of donors with inconclusive serology, means that probably most of these are non-reactive serology. In addition, depending on the level of specific epidemiological variables, the absence of infection can be predicted with a probability of 100% in this group from the pairs of tests using parallel testing. CONCLUSION: The epidemiological variables can lead to improved test results and thus assist in the clarification of inconclusive serology screening results. Moreover, all combinations of pairs using the five commercial tests are good alternatives to confirm results

Physical and operational infrastructure of transfusion services of the public blood bank network in the State of Minas Gerais, Brazil, 2007/2008

INTRODUCTION: Within the context of transfusion safety, the immunohematological study of donors and recipients of blood products is currently the most fragile link in the transfusion chain of the public blood bank network of Minas Gerais. OBJECTIVE: The objective of this work was to provide a critical and situational overview of the physical and operational infrastructure of the transfusion services in the state. Method: This was an observational cross-sectional, evidence-based study covering 226 transfusion services; only 19 belong to the Hemominas Foundation and 207 are non-Hemominas transfusion services. The investigation involved the application of questionnaires and red cell panel tests. RESULTS: The results revealed considerable non-compliance with the national law and with the norms of Hemominas. These findings were obtained for the two groups studied; however the frequencies were higher among non-Hemominas transfusion services. CONCLUSION: The study provides information about the situation of the physical and operational infrastructure of transfusion services that may be used to help plan effective measures for improvement and serve as the basis for an evaluation of the impact of future interventions regarding the quality, reliability and safety of transfusions. As primordial factors, we propose compliance with the law, qualified personnel and investment in further qualifications, a review of training methods, and more rigorous inspection of transfusion services. As a suggestion, we propose the establishment of an External Quality Control Program in Immunohematology for the entire network of blood banks in the state and the adoption of the methods presented in this study as a tool to monitor transfusion service performance.INTRODUÇÃO: No contexto da segurança transfusional, o estudo imuno-hematológico do doador e do receptor de hemocomponentes é hoje o elo mais frágil da cadeia transfusional na hemorrede pública de Minas Gerais. OBJETIVO: O objetivo deste trabalho foi traçar panorama crítico e situacional da infraestrutura física e operacional das Agências Transfusionais (ATs) do estado. Método: Estudo observacional transversal, baseado em evidências, abrangeu 226 ATs, sendo 19 próprias da Fundação Hemominas (PH) e 207 não próprias da Hemominas (NPH), com aplicação de questionários e testes de painel de hemácias. RESULTADOS: Os achados do presente estudo mostraram percentuais expressivos de não conformidades com a legislação vigente no país e com as normas estabelecidas pela Hemominas. Estas foram encontradas nos dois grupos estudados, com algumas exceções, apresentando maiores frequências entre as ATs NPH. CONCLUSÃO: O estudo possibilitou o conhecimento da situação da infraestrutura física e operacional das ATs, podendo subsidiar o planejamento de ações efetivas de melhorias, bem como servir de base para avaliar o impacto de futuras intervenções, com vistas à qualidade, confiabilidade e segurança transfusional. Para isto, propôs como fatores primordiais, o cumprimento da legislação vigente, recursos humanos qualificados e investimentos na sua capacitação, revisão das metodologias de treinamento e maior rigor nas verificações e inspeções das ATs. Como sugestão, propõe ainda a criação, pela Hemominas, de Programa de Controle de Qualidade Externo em Imunohematologia para toda hemorrede do estado e adoção da metodologia deste estudo como instrumento de monitoramento da performance das ATs

INFECÇÃO POR Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Leishmania major E Trypanosoma cruzi EM CÃES DO ESTADO DO PARÁ

Realizou-se inquérito sorológico para Toxoplasma gondii, Neospora caninum, Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi em cães dos municípios de Castanhal e Belém, no Estado do Pará, e estudou-se a associação entre os animais sororeagentes e fatores como sexo, idade, acesso a rua e procedência dos animais. Foram utilizados 269 cães de diferentes idades, sadios, provenientes de abrigos de animais, canil comercial, Centro de Controle de Zoonoses e domiciliados. Utilizou-se a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com lâminas sensibilizadas de acordo com os seus respectivos antígenos. Das 263 amostras, 100 foram reagentes, com 38,0% de positividade para Toxoplasma gondii, sendo os títulos prevalentes 16UI e 64UI, 15,97% de sororreagentes para anticorpos anti-N. caninum com maior soroprevalência para os títulos 25UI e 50UI. Na pesquisa de anticorpos anti-L. major, 3,42% foram sororreagentes com o título 40UI, sendo o mais prevalente. A pesquisa de anticorpos anti-T. cruzi revelou negatividade em todas as amostras. As variáveis procedência e faixa etária mostraram ser um fator de risco para os animais. Os animais de Belém apresentaram 2,6 vezes mais chances de infecção do que os animais de Castanhal. Os animais na faixa etária de três a sete anos apresentaram 2,27 vezes mais chances de serem sororreagentes do que os cães com até três anos de idade. Não houve associação estatística para as demais variáveis e protozoários pesquisados. Palavras-chave: Toxoplasmose, Leishmaniose, Neosporose, Doença de Chagas, animais domésticos

O papel do extrato EPs 7630 de Pelargonium sidoides na proliferação de linfócitos citotóxicos: The role of Pelargonium sidoides EPs 7630 extract in the proliferation of cytotoxic lymphocytes

Pelargonium sidoides é uma importante planta com propriedades medicinais nativa da África do Sul utilizada principalmente no tratamento de infecções respiratórias e comercializada sob a forma do extrato padronizado EPs 7630. Sua atividade farmacológica inclui efeitos antimicrobianos, antibacterianos, imunomoduladores e antivirais. Entretanto, falta compreender possíveis lacunas sobre as vias de atuação imunoduladoras, entre elas, se possui efeito na proliferação dos linfócitos citotóxicos. Portanto, o objetivo do trabalho foi analisar o efeito do extrato de P. sidoides na proliferação de linfócitos T CD8 e células natural killer (NK) e comparar estas taxas. Para isso, foram avaliadas células mononucleares de sangue periférico (PBMC) de 12 indivíduos saudáveis, sendo 6 do sexo feminino e 6 do masculino, entre 20 e 35 anos. A separação das PBMC foi realizada por centrifugação em gradiente de concentração com Ficoll-Paque™ PLUS e posteriormente incubadas com CFSE. Foram divididas nos seguintes grupos: células não tratadas, tratadas com 10μg/mL de extrato EPs 7630 de P. sidoides (TAKEDA) e controle veículo, contendo em cada um dos grupos células com e sem estímulo de CD3 e CD28. Por fim, as amostras foram adquiridas no citômetro de fluxo FACSCanto II (BD Biosciences). Quanto aos resultados obtidos, tanto nas células NK como nos linfócitos T CD8 o tratamento com EPs 7630 sem estímulo não proporcionou diferença nos parâmetros analisados. Entretanto, quando as células foram estimuladas com CD3 e CD28, obtivemos resultados mais distintos. As células NK apresentaram uma maior taxa de expansão quando tratadas com EPs 7630, assim como no percentual de células não divididas e de segunda geração em relação às células não tratadas. Mesmo com estímulo, os linfócitos T CD8 não apresentaram variações significativas nos parâmetros avaliados quanto ao tratamento com EPs 7630. Comparando as taxas de proliferação de células NK e linfócitos T CD8 tratadas com e sem estímulo, os linfócitos T CD8 tiveram médias mais altas no percentual de células não divididas e as células NK no percentual de células de segunda geração. Concluímos então que o extrato comercial à base de P. sidoides é capaz de modular o sistema imune inato por meio da proliferação de células NK. Logo, espera-se que este trabalho contribua para a divulgação e conhecimento desta alternativa terapêutica

O papel do extrato EPs 7630 de Pelargonium sidoides na proliferação de Linfócitos citotóxicos: The role of Pelargonium sidoides EPs 7630 extract in the proliferation of cytotoxic Lymphocytes

Pelargonium sidoides é uma importante planta com propriedades medicinais nativa da África do Sul utilizada principalmente no tratamento de infecções respiratórias e comercializada sob a forma do extrato padronizado EPs 7630. Sua atividade farmacológica inclui efeitos antimicrobianos, antibacterianos, imunomoduladores e antivirais. Entretanto, falta compreender possíveis lacunas sobre as vias de atuação imunoduladoras, entre elas, se possui efeito na proliferação dos linfócitos citotóxicos. Portanto, o objetivo do trabalho foi analisar o efeito do extrato de P. sidoides na proliferação de linfócitos T CD8 e células natural killer (NK) e comparar estas taxas. Para isso, foram avaliadas células mononucleares de sangue periférico (PBMC) de 12 indivíduos saudáveis, sendo 6 do sexo feminino e 6 do masculino, entre 20 e 35 anos. A separação das PBMC foi realizada por centrifugação em gradiente de concentração com Ficoll-Paque™ PLUS e posteriormente incubadas com CFSE. Foram divididas nos seguintes grupos: células não tratadas, tratadas com 10μg/mL de extrato EPs 7630 de P. sidoides (TAKEDA) e controle veículo, contendo em cada um dos grupos células com e sem estímulo de CD3 e CD28. Por fim, as amostras foram adquiridas no citômetro de fluxo FACSCanto II (BD Biosciences). Quanto aos resultados obtidos, tanto nas células NK como nos linfócitos T CD8 o tratamento com EPs 7630 sem estímulo não proporcionou diferença nos parâmetros analisados. Entretanto, quando as células foram estimuladas com CD3 e CD28, obtivemos resultados mais distintos. As células NK apresentaram uma maior taxa de expansão quando tratadas com EPs 7630, assim como no percentual de células não divididas e de segunda geração em relação às células não tratadas. Mesmo com estímulo, os linfócitos T CD8 não apresentaram variações significativas nos parâmetros avaliados quanto ao tratamento com EPs 7630. Comparando as taxas de proliferação de células NK e linfócitos T CD8 tratadas com e sem estímulo, os linfócitos T CD8 tiveram médias mais altas no percentual de células não divididas e as células NK no percentual de células de segunda geração. Concluímos então que o extrato comercial à base de P. sidoides é capaz de modular o sistema imune inato por meio da proliferação de células NK. Logo, espera-se que este trabalho contribua para a divulgação e conhecimento desta alternativa terapêutica

Distribution of QPY and RAH haplotypes of granzyme B gene in distinct Brazilian populations

Introduction: The cytolysis mediated by granules is one of the most important effector functions of cytotoxic T lymphocytes and natural killer cells. Recently, three single nucleotide polymorphisms (SNPs) were identified at exons 2, 3, and 5 of the granzyme B gene, resulting in a haplotype in which three amino acids of mature protein Q48P88Y245 are changed to R48A88H245, which leads to loss of cytotoxic activity of the protein. In this study, we evaluated the frequency of these polymorphisms in Brazilian populations. Methods: We evaluated the frequency of these polymorphisms in Brazilian ethnic groups (white, Afro-Brazilian, and Asian) by sequencing these regions. Results: The allelic and genotypic frequencies of SNP 2364A/G at exon 2 in Afro-Brazilian individuals (42.3% and 17.3%) were significantly higher when compared with those in whites and Asians (p < 0.0001 and p = 0.0007, respectively). The polymorphisms 2933C/G and 4243C/T also were more frequent in Afro-Brazilians but without any significant difference regarding the other groups. The Afro-Brazilian group presented greater diversity of haplotypes, and the RAH haplotype seemed to be more frequent in this group (25%), followed by the whites (20.7%) and by the Asians (11.9%), similar to the frequency presented in the literature. Conclusions: There is a higher frequency of polymorphisms in Afro-Brazilians, and the RAH haplotype was more frequent in these individuals. We believe that further studies should aim to investigate the correlation of this haplotype with diseases related to immunity mediated by cytotoxic lymphocytes, and if this correlation is confirmed, novel treatment strategies might be elaborated.Center for CellTherapy (CTC)Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Sao Paulo (FAPESP)Fundacao de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG)Fundacao Hemocentro de Ribeirao Preto (FUNDHERP