Symposium : Preventing the risk of severe hypoglycaemia - The contribution of new technologies to the management of severe hyperglycaemic risk.

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Symposium : the bioartificial pancreas

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Islet encapsulation

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Role of PTP in beta cell apoptosis

Implication du PTP dans la mort cellulaire β pancréatique L'hyperglycémie, l'hyperfructosémie et l'ischémie-reperfusion sont délétères pour la viabilité cellulaire β pancréatique, jouant un rôle majeur dans la perte de la masse cellulaire β. Le pore de transition de perméabilité mitochondriale (PTP) est un canal mitochondrial impliqué dans le déclenchement de la mort cellulaire. Des données récentes montrent l'implication du PTP et du stress oxydant dans la toxicité induite par l'ischémie-reperfusion sur cardiomyocytes et également dans la glucotoxicité induite sur cellules endothéliales. La première partie de notre étude a visé à étudier l'implication de l'ouverture du PTP dans la mort cellulaire des cellules INS-1 et des îlots pancréatiques humains soumis à de fortes concentrations de glucose et de fructose. Nous démontrons que l'incubation des cellules INS-1 et des îlots pancréatiques humains en présence de 30 mM de glucose ou 2,5 mM de fructose déclenche une ouverture du PTP et induit la mort cellulaire. La metformine et la Cyclosporine A (CsA) préviennent l'ouverture du PTP et la mort cellulaire induite par le glucose et le fructose. La deuxième partie de notre travail montre que l'exposition des INS-1 à une heure de carence en substrat concomitante d'une hypoxie, suivie d'une restauration des conditions basales conduit à l'ouverture du PTP et à une majoration drastique de la mort cellulaire. Ces deux évènements sont totalement prévenus par l'incubation préalable par la CsA et la metformine mais aussi par la N-Acétyl-Cystéine (NAC) ou par l'exposition à une anoxie, soulignant ainsi le rôle fondamental du stress oxydant dans le déclenchement de l'ouverture du PTP et de la mort cellulaire. Nous montrons qu'au cours de l'ischémie-reperfusion simulée, la production de superoxide est bi-phasique : nous décrivons un premier pic de production au cours de la carence en substrat, lié à un flux reverse d'électrons au sein du complexe I de la chaîne respiratoire. Ce premier pic est suivi d'un deuxième pic de production après la restauration du niveau de substrats et d'O2, lié à l'ouverture du PTP. La NAC, l'anoxie ou la metformine préviennent les deux pics de production de superoxide tandis que la CsA prévient seulement le second pic. Enfin, nous montrons que l'hypoxie seule n'induit ni stress oxydant, ni ouverture du PTP ni mortalité cellulaire. L'ensemble de notre travail démontre le rôle central du PTP dans la gluco-fructotoxicité et dans la toxicité induite par l'ischémie-reperfusion sur la cellule β pancréatique. Ainsi, prévenir l'ouverture du PTP peut-être une approche intéressante pour préserver la viabilité cellulaire β.PTP involvement in β pancreatic cell death Hyperglycemia, hyperfructosemia and ischemia-reperfusion play a major role in the progression of β cell loss in diabetes mellitus. The permeability transition pore (PTP) is a mitochondrial channel involved in cell death. PTP opening and oxidative stress have been shown to be involved in ischemia-reperfusion injury on cardiomyocytes and in hyperglycemia-induced cell death in endothelial cells. In the first part of this work, we have examined the involvement of PTP opening in INS-1 cells and human pancreatic islets cell death induced by high levels of glucose or fructose. We first reported that Metformin and Cyclosporin A (CsA) prevented Ca2+-induced PTP opening in permeabilized and intact INS-1 cells. We then shown that incubation of INS-1 cells and human islets in the presence of 30 mM glucose or 2.5 mM fructose induced PTP opening and led to cell death. Because both Metformin and CsA prevented glucose and fructose induced PTP opening, and hampered glucose and fructose induced cell death, we conclude that PTP opening is involved in high glucose and high fructose induced INS-1 and human islets cell death. We therefore suggest that preventing PTP opening might be a new approach to preserve β cell viability. In the second part of the work, we demonstrate that the incubation of INS-1 cells in the absence of energy substrates in hypoxic condition for 1 hour followed by incubation in normal condition led to PTP opening and to a dramatic increase in cell death. Both events were totally prevented when PTP opening was inhibited by either Cyclosporin A (CsA) or Metformin or when the cells were incubated in the presence of the antioxidant N-acetyl-cystein (NAC), in anoxia, highlighting the implication of oxidative stress is the commitment of PTP opening. Superoxide production increased during the removal of energy substrates, due to reverse electron flux through complex I and again increased when normal energy substrate and O2 were restored, due to PTP opening. NAC, anoxia or Metformin prevented the two phases of oxidative stress, while CsA prevented only the second one. Hypoxia alone did not induce oxidative stress, PTP opening or cell death. Our work demonstrates the implication of PTP opening in ischemia-reperfusion injury and gluco- fructotoxicty in β pancreatic cells. We therefore suggest that preventing PTP opening might be a new approach to preserve β cell viability

Implication du pore de transition de perméabilité mitochondriale dans l'apoptose de la cellule β pancréatique

PTP involvement in β pancreatic cell death Hyperglycemia, hyperfructosemia and ischemia-reperfusion play a major role in the progression of β cell loss in diabetes mellitus. The permeability transition pore (PTP) is a mitochondrial channel involved in cell death. PTP opening and oxidative stress have been shown to be involved in ischemia-reperfusion injury on cardiomyocytes and in hyperglycemia-induced cell death in endothelial cells. In the first part of this work, we have examined the involvement of PTP opening in INS-1 cells and human pancreatic islets cell death induced by high levels of glucose or fructose. We first reported that Metformin and Cyclosporin A (CsA) prevented Ca2+-induced PTP opening in permeabilized and intact INS-1 cells. We then shown that incubation of INS-1 cells and human islets in the presence of 30 mM glucose or 2.5 mM fructose induced PTP opening and led to cell death. Because both Metformin and CsA prevented glucose and fructose induced PTP opening, and hampered glucose and fructose induced cell death, we conclude that PTP opening is involved in high glucose and high fructose induced INS-1 and human islets cell death. We therefore suggest that preventing PTP opening might be a new approach to preserve β cell viability. In the second part of the work, we demonstrate that the incubation of INS-1 cells in the absence of energy substrates in hypoxic condition for 1 hour followed by incubation in normal condition led to PTP opening and to a dramatic increase in cell death. Both events were totally prevented when PTP opening was inhibited by either Cyclosporin A (CsA) or Metformin or when the cells were incubated in the presence of the antioxidant N-acetyl-cystein (NAC), in anoxia, highlighting the implication of oxidative stress is the commitment of PTP opening. Superoxide production increased during the removal of energy substrates, due to reverse electron flux through complex I and again increased when normal energy substrate and O2 were restored, due to PTP opening. NAC, anoxia or Metformin prevented the two phases of oxidative stress, while CsA prevented only the second one. Hypoxia alone did not induce oxidative stress, PTP opening or cell death. Our work demonstrates the implication of PTP opening in ischemia-reperfusion injury and gluco- fructotoxicty in β pancreatic cells. We therefore suggest that preventing PTP opening might be a new approach to preserve β cell viability.Implication du PTP dans la mort cellulaire β pancréatique L'hyperglycémie, l'hyperfructosémie et l'ischémie-reperfusion sont délétères pour la viabilité cellulaire β pancréatique, jouant un rôle majeur dans la perte de la masse cellulaire β. Le pore de transition de perméabilité mitochondriale (PTP) est un canal mitochondrial impliqué dans le déclenchement de la mort cellulaire. Des données récentes montrent l'implication du PTP et du stress oxydant dans la toxicité induite par l'ischémie-reperfusion sur cardiomyocytes et également dans la glucotoxicité induite sur cellules endothéliales. La première partie de notre étude a visé à étudier l'implication de l'ouverture du PTP dans la mort cellulaire des cellules INS-1 et des îlots pancréatiques humains soumis à de fortes concentrations de glucose et de fructose. Nous démontrons que l'incubation des cellules INS-1 et des îlots pancréatiques humains en présence de 30 mM de glucose ou 2,5 mM de fructose déclenche une ouverture du PTP et induit la mort cellulaire. La metformine et la Cyclosporine A (CsA) préviennent l'ouverture du PTP et la mort cellulaire induite par le glucose et le fructose. La deuxième partie de notre travail montre que l'exposition des INS-1 à une heure de carence en substrat concomitante d'une hypoxie, suivie d'une restauration des conditions basales conduit à l'ouverture du PTP et à une majoration drastique de la mort cellulaire. Ces deux évènements sont totalement prévenus par l'incubation préalable par la CsA et la metformine mais aussi par la N-Acétyl-Cystéine (NAC) ou par l'exposition à une anoxie, soulignant ainsi le rôle fondamental du stress oxydant dans le déclenchement de l'ouverture du PTP et de la mort cellulaire. Nous montrons qu'au cours de l'ischémie-reperfusion simulée, la production de superoxide est bi-phasique : nous décrivons un premier pic de production au cours de la carence en substrat, lié à un flux reverse d'électrons au sein du complexe I de la chaîne respiratoire. Ce premier pic est suivi d'un deuxième pic de production après la restauration du niveau de substrats et d'O2, lié à l'ouverture du PTP. La NAC, l'anoxie ou la metformine préviennent les deux pics de production de superoxide tandis que la CsA prévient seulement le second pic. Enfin, nous montrons que l'hypoxie seule n'induit ni stress oxydant, ni ouverture du PTP ni mortalité cellulaire. L'ensemble de notre travail démontre le rôle central du PTP dans la gluco-fructotoxicité et dans la toxicité induite par l'ischémie-reperfusion sur la cellule β pancréatique. Ainsi, prévenir l'ouverture du PTP peut-être une approche intéressante pour préserver la viabilité cellulaire β

Diableoop closed loop system allows patients with type 1 diabetes to largely improve their glycemic control in real-life situation, without serious adverse events

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Rôle du pore de transition de perméabilité mitochondriale dans l apoptose des cellules béta pancréatiques

L apoptose des cellules b pancréatiques au cours de la greffe d îlots est un problème majeur : 50 % du greffon est perdu dans les quinze jours qui suivent la transplantation en raison de phénomènes non spécifiques (Ischémie-reperfusion, glucotoxicité...). Le pore de transition de perméabilité mitochondriale (PTP) est un complexe protéique mitochondrial impliqué dans la mort cellulaire. Sa régualtion n a, à ce jour, jamais été explorée sur des cellules pancréatiques endocrines. Nous avons étudié la régulation du PTP sur un modèle murin de cellules b (INS-1) et l implication du PTP dans la mort cellulaire induite par 30 mM de D-Glucose et par 2,5 mM de D-Fructose sur ce type cellulaire. Nous montrons que la Cyclosporine A, l inhibiteur de référence du PTP, et la Metformine inhibent l ouverture du PTP sur des cellules INS-1 perméabilisées et sur des cellules INS-1 intactes. De plus, nous décrivons qu une exposition des cellules INS-1 intactes à 30 mM de D-Glucose ou à 2,5 mM de D-Fructose induit une ouverture du PTP et une majoration de la mort cellulaire des INS-1. Enfin, nous montrons que la Cyclosporine A et la Metformine, en inhibant l ouverture du PTP, réduisent la mort cellullaire induite par le D-Glucose et le D-Fructose. Nous concluons que la cytotoxicité induite par le D-Glucose et le D-Fructose passe par une ouverture du PTP et que la mort cellulaire induite par le D-Glucose et le D-fructose peut être prévenue par la Cyclosporine A et la Metformine via une inhibition du PTP. Ainsi, cibler le PTP dans la greffe d îlots de Langerhans peut être une stratégie intéressante pour préserver la viabilité des cellules b au cours de cette procédure.Pancreatic b cells apoptosis in islet transplantation is a major problem: 50% of the graft is lost within fifteen days after transplantation due to nonspecific events (ischemia-reperfusion, glucotoxicity ...). Mitochondrial permeability transition pore (PTP) is a mitochondrial protein complex implicated in cell death. Pancreatic endocrine cells PTP regulation has so far never been explored. We studied PTP regulation in b cells mouse model (INS-1) and involvement of PTP in cell death induced by 30 mM D-glucose and 2.5 mM D-fructose on this type cell. We show that Cyclosporin A, reference inhibitor of PTP, and metformin inhibit PTP opening in permeabilized and intact INS-1 cells. In addition, we describe that INS-1 exposure to 30 mM D-glucose or 2.5 mM D-fructose induces PTP opening and increases in INS-1cell death. Finally, we show that cyclosporin A and Metformin, by inhibiting PTP opening, reduce cellular death induced by D-glucose and D-fructose. We conclude that D-glucose and D-fructose cytotoxicity passes through a PTP opening and cell death induced by D-glucose and D-fructose can be prevented by Cyclosporine A and Metformin through a PTP inhibition.Thus, targeting the PTP in transplantation of islets of Langerhans may be a useful strategy for preserving the viability of b cells during this procedure.GRENOBLE1-BU Médecine pharm. (385162101) / SudocSudocFranceF

La thérapie cellulaire du diabète de Type 1

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Diabeloop Closed-Loop System Allows Patients with Type 1 Diabetes (T1D) to Significantly Improve Their Glycemic Control in Real-life Situation , without Serious Adverse events

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Diabetes in spotlight: current knowledge and perspectives of photobiomodulation utilization

International audienceIntroduction Diabetes is a global health concern characterized by chronic hyperglycemia resulting from insulinopenia and/or insulin resistance. The rising prevalence of diabetes and its associated complications (ulcers, periodontitis, healing of bone defect, neuropathy, retinopathy, cardiopathy and nephropathy) necessitate innovative therapeutic approaches. Photobiomodulation (PBM), involves exposing tissues and cells to low-energy light radiation, leading to biological effects, largely via mitochondrial activation. Methods This review evaluates preclinical and clinical studies exploring the potential of PBM in diabetes and its complications, as well all clinical trials, both planned and completed, available on ClinicalTrials database. Results This review highlights the variability in PBM parameters across studies, hindering consensus on optimal protocols. Standardization of treatment parameters and rigorous clinical trials are needed to unlock PBM’s full therapeutic potential. 87 clinical trials were identified that investigated PBM in diabetes mellitus (with 5,837 patients planned to be treated with PBM). Clinical trials assessing PBM effects on diabetic neuropathy revealed pain reduction and potential quality of life improvement. Studies focusing on wound healing indicated encouraging results, with PBM enhancing angiogenesis, fibroblast proliferation, and collagen density. PBM’s impact on diabetic retinopathy remains inconclusive however, requiring further investigation. In glycemic control, PBM exhibits positive effects on metabolic parameters, including glucose tolerance and insulin resistance. Conclusion Clinical studies have reported PBM-induced reductions in fasting and postprandial glycemia without an increased hypoglycemic risk. This impact of PBM may be related to its effects on the beta cells and islets in the pancreas. Notwithstanding challenges, PBM emerges as a promising adjunctive therapy for managing diabetic neuropathy, wound healing, and glycemic control. Further investigation into its impact on diabetic retinopathy and muscle recovery is warranted