Relation of antimicrobial sensitivity and presence of virulence factors Staphylococcus spp. isolated from bovine subclinical mastitis

FAPESP 2011/51483-

Virulence factors of Staphylococcus spp. and cell viability in subclinical mastitis of goats

A mastite subclínica em caprinos é causada principalmente pelo Staphylococcus spp., sendo os estafilococos coagulase negativa (SCN) os patógenos de maior ocorrência e o S. aureus, a espécie de estafilococos mais pesquisada. Dessa forma, pouco se conhece sobre a patogenicidade de SCN e outros estafilococos coagulase positiva (SCP), além do S. aureus. Também há poucos estudos sobre a variação da viabilidade celular na mastite subclínica de cabras. Assim, o objetivo do presente estudo foi determinar os fatores de virulência de adesão e produção de biofilme de estirpes de Staphylococcus spp. isoladas de amostras de leite de cabras, verificando possíveis associações com a viabilidade celular. Para realizar a colheita das amostras, primeiramente, foi efetuada um exame físico da glândula mamária, com posterior realização dos testes da caneca de fundo preto e California mastitis test (CMT). A colheita do leite foi efetuada em três alíquotas: análises microbiológicas, contagem de células somáticas (CCS) e viabilidade celular. Realizou-se a identificação, teste de antibiograma e PCR (Reação em cadeia polimerase) dos Staphylococcus spp. isolados nas amostras de leite. Os genes de virulência pesquisados no PCR foram: cna, eno, ebpS, fnbA, fnbB, fib e bap. Avaliou-se a quantidade de CCS, em equipamento de citometria de fluxo, e a viabilidade celular, após centrifugações das amostras de leite e visualização das células em microscópio, utilizando o corante azul de Trypan. Os resultados foram: 122 amostras com crescimento bacteriano e dessas, 110 (90,2%) foram identificadas como Staphylococcus spp., sendo 90 (73,8%) de SCN e 12 (16,4%) de SCP. As espécies mais isoladas de estafilococos foram: S. epidermidis (24,55%), S. lugdunensis (15,40%) e S. intermedius (13,64%). As amostras apresentaram maior resistência aos antimicrobianos: penicilina (81,8%), oxacilina (60,0%) e ampicilina (55,5%). Observou-se maior sensibilidade para: enrofloxacina (99,1%), eritromicina (98,2%), gentamicina (98,2%) e vancomicina (98,2%). Com relação aos fatores de virulência pesquisados, foram encontradas amostras positivas para todos os genes, com exceção do gene fnbB: eno (53,6%), bap (43,7%), ebpS (19,1%), fnbA (18,2%) e fib (16,4%). Mais de um gene foi detectado em algumas estirpes, sendo que as associações de maior ocorrência foram: bap/eno em SCN e ebpS/eno/fib/fnbA em SCP. Os valores da CCS das amostras de leite com isolamento de Staphylococcus spp., SCN e SCP foram maiores do que nas amostras sem isolamento bacteriano e as estirpes com presença da associação de genes ebpS/eno/fib/fnbA apresentaram maior CCS do que bap/eno. Com relação à viabilidade celular, as amostras com isolamento de Staphylococcus spp. apresentaram maior viabilidade celular do que as amostras sem isolamento bacteriano e não houve associação dos genes identificados nas estirpes com a viabilidade celular. Concluiu-se que os genes eno e bap apresentaram maior ocorrência nas estirpes de Staphylococcus spp., sendo os mais encontrados nos isolados de SCN e os genes ebpS, fib e fnbA foram os mais detectados nos SCP. A viabilidade celular foi maior nas amostras com isolamento de Staphylococcus spp. em relação as sem isolamento bacteriano e não houve associação entre os fatores de virulência das estirpes de Staphylococcus spp. e a viabilidade celular.Subclinical mastitis in goats is mainly caused by Staphylococcus spp., coagulase-negative staphylococci (CNS) is the most frequent pathogens and S. aureus, the most researched specie of staphylococci. Thus, little is known about the pathogenicity of SCN and other coagulase-positive staphylococci (CPS), beyond the S. aureus. There are few studies on the variation of cell viability in subclinical mastitis of goats. The aim of the present study was to determine the virulence factors of adhesion and biofilm production of Staphylococcus spp. strains isolated from milk samples of goats, verifying for possible associations with cell viability. To collect samples, firstly, was performed a physical examination of the mammary gland, with subsequent tests for mug of black background and California mastitis test (CMT). Three aliquots of milk were collected: microbiological analysis, somatic cell count (SCC) and cell viability. Identification, antibiotic susceptibility testing and PCR (polymerase chain reaction) were performed of Staphylococcus spp. isolated from milk samples. Virulence genes researched in PCR were: cna, eno, ebpS, fnbA, fnbB, fib and bap. Evaluation of CCS, using flow cytometry equipment, and cell viability, after centrifugation of milk samples and visualization the cells in the microscope using Trypan blue dye, were performed. The results were: from 122 samples with bacterial growth, 110 (90.2%) were identified as Staphylococcus spp., 90 (73.8%) of CNP and 12 (16.4%) of the CNP. The most isolated staphylococci species were: S. epidermidis (24.55%), S. lugdunensis (15.40%) and S. intermedius (13.64%). Samples showed higher resistance to antimicrobials: penicillin (81.8%), oxacillin (60.0%) and ampicillin (55.5%). We observed higher sensitivity to: enrofloxacin (99.1%), erythromycin (98.2%), gentamicin (98.2%) and vancomycin (98.2%). Regarding virulence factors researched, positive samples were found for all genes, except fnbB gene: eno (53.6%), bap (43.7%), ebpS (19.1%), fnbA (18.2%) and fib (16.4%). More than one gene were detected in some strains, with the most frequent associations were bap/eno in CNS and ebpS/eno/fib/fnbA in CNP. The values of SCC of milk samples with isolation of Staphylococcus spp., CNS and CNP were higher than samples without bacterial isolation and the isolation of strains with combination of ebpS/eno/fib/fnbA genes showed higher SCC than bap/eno. Regarding cell viability, samples with isolation of Staphylococcus spp. showed higher cell viability than samples without bacterial isolation and there was no association of the genes identified in strains with cell viability. In conclusion, eno and bap genes were more frequent in Staphylococcus spp. strains, eno and bap genes were mostly found in isolated CNS and ebpS, fib and fnbA genes were more detected in CNP. Cell viability was higher in samples with isolation of Staphylococcus spp. compared those without bacterial isolation and there was no association between the virulence factors of Staphylococcus spp. strains and cell viability

Epidemiology of the main ovine infections diseases from Uberlândia county, MG

The aim of this study was to verify ovine health condition from Uberlândia county (MG), searching the prevalence of the main infections diseases that can reach ovine: leptospirosis, brucelosis (Brucella abortus and Brucella ovis), maedi-visna, Chamydophila spp., neosporosis and toxoplasmosis, associating these infections with risk factors. A total of 334 blood samples were collected randomly from both sex, different ages and breeds from 12 farms in Uberlândia county. A epidemiologic questionary was applied for each farm. The blood samples were submitted to Microscopic Aglutination Test (leptospirosis) Buffered Brucella Antigen Test (brucelosis Brucella abortus), Complement Fixation (Brucella ovis and Chlamydophila spp.), Agar Gel Immunodifusion (maedi-visna) and Indirect Fluorescent Antibody (neosporosis and toxoplasmosis) tests to search serology of these infections. The prevalences were: 22.2% to leptospirosis and titers from 1/100 to 1/3200, 3.3% to Chlamydophila spp. and titers from 1/32 to 1/64, 8.1% to neosporosis and titers from 1/50 to 1/3200 and 30.8% to toxoplasmosis. There were not reactive ovine to brucelosis (Brucella abortus and Brucella ovis) and maedi-visna. There was statistical significant difference (p<0.05) to reactive ovine to leptospirosis: male, breed, beef sheep and with presence of rodents. There was not statistical significant difference to brucelosis, maedi-visna, Chlamydophila spp. and neosporosis with risk factors associated (p>0.05).Mestre em Ciências da VeterináriasO objetivo deste estudo foi verificar a sanidade dos ovinos do município de Uberlândia (MG), pesquisando a prevalência das principais doenças infecciosas que podem acometer os ovinos: leptospirose, brucelose (Brucella abortus e Brucella ovis), maedi-visna, clamidofilose, neosporose e toxoplasmose, associando essas infecções aos fatores de risco. Foram colhidas aleatoriamente amostras de sangue de 334 ovinos de ambos os sexos, idades e raças variadas procedentes de 12 propriedades do município de Uberlândia, MG. Aplicou-se um questionário epidemiológico em cada propriedade. As amostras de sangue foram submetidas aos testes de Soroaglutinação Microscópica (leptospirose), Antígeno Acidificado Tamponado (brucelose - Brucella abortus), Fixação de Complemento (brucelose ovina Brucella ovis e clamidofilose), Imunodifusão em Gel de Ágar (maedi-visna) e Imunofluorescência Indireta (neosporose e toxoplasmose). As prevalências encontradas foram: 22,2% para leptospirose e título de 1/100 a 1/3200, 3,3% para clamidofilose e títulos de 1/32 a 1/64, 8,1% para neosporose e títulos de 1/50 a 1/3200 e 30,8% para toxoplasmose. Não houve ovinos reagentes para brucelose (Brucella abortus e Brucella ovis) e maedi-visna. Houve diferença estatística significativa (p<0,05) para ovinos reagentes para leptospirose: machos, de raça pura, ovinos de corte e com presença de roedores na propriedade. Para brucelose, maedi-visna, clamidofilose e neosporose não houve diferença estatística significativa para os fatores de risco associados (p>0,05)

Sorovares de Leptospira spp. predominantes em exames sorológicos de caninos e humanos no município de Uberlândia, Estado de Minas Gerais

INTRODUÇÃO: O objetivo desta pesquisa foi verificar a ocorrência dos principais sorovares de Leptospira spp. em cães domésticos e humanos, notificados no ano de 2008, bem como os principais fatores de riscos em uma abordagem geográfica relacionados à doença no município de Uberlândia, Estado de Minas Gerais, Brasil. MÉTODOS: Foram examinadas 268 amostras de soro sanguíneo de cães de diferentes bairros pertencentes aos distritos sanitários norte, sul, leste, oeste e central deste município, colhidas durante a campanha de vacinação antirrábica animal, em agosto de 2008. Foi realizada uma abordagem geográfica do município e avaliada a localização de áreas periféricas, aterro sanitário, coleta de lixo, notificação de roedores, casos de leptospirose humana e áreas de alagamento decorrente de enchentes, durante o ano de 2008. A leptospirose foi diagnosticada pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM), padrão-ouro para diagnóstico da leptospirose animal e humana. RESULTADOS: Os cães reagiram principalmente aos sorovares Autumnalis (34,2%) e Tarassovi (23,7%), sendo este, também detectado em humanos em 2008. A ocorrência destes sorovares pode estar relacionada com uma fonte de infecção comum as duas espécies, ou a hipótese de que o cão possa ser a fonte de infecção para o ser humano. O distrito sanitário leste apresentou um maior número de cães reagentes. CONCLUSÕES: A leptospirose ocorreu nos cães e humanos no município de Uberlândia no ano de 2008. Esta doença muitas vezes negligenciada deve ser prevenida por representar risco à saúde pública e se parecer com outras doenças também endêmicas como a dengue

Sorovares de Leptospira spp. predominantes em exames sorológicos de caninos e humanos no município de Uberlândia, Estado de Minas Gerais Predominant Leptospira spp. serovars in serological diagnosis of canines and humans in the City of Uberlândia, State of Minas Gerais, Brazil

INTRODUÇÃO: O objetivo desta pesquisa foi verificar a ocorrência dos principais sorovares de Leptospira spp. em cães domésticos e humanos, notificados no ano de 2008, bem como os principais fatores de riscos em uma abordagem geográfica relacionados à doença no município de Uberlândia, Estado de Minas Gerais, Brasil. MÉTODOS: Foram examinadas 268 amostras de soro sanguíneo de cães de diferentes bairros pertencentes aos distritos sanitários norte, sul, leste, oeste e central deste município, colhidas durante a campanha de vacinação antirrábica animal, em agosto de 2008. Foi realizada uma abordagem geográfica do município e avaliada a localização de áreas periféricas, aterro sanitário, coleta de lixo, notificação de roedores, casos de leptospirose humana e áreas de alagamento decorrente de enchentes, durante o ano de 2008. A leptospirose foi diagnosticada pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM), padrão-ouro para diagnóstico da leptospirose animal e humana. RESULTADOS: Os cães reagiram principalmente aos sorovares Autumnalis (34,2%) e Tarassovi (23,7%), sendo este, também detectado em humanos em 2008. A ocorrência destes sorovares pode estar relacionada com uma fonte de infecção comum as duas espécies, ou a hipótese de que o cão possa ser a fonte de infecção para o ser humano. O distrito sanitário leste apresentou um maior número de cães reagentes. CONCLUSÕES: A leptospirose ocorreu nos cães e humanos no município de Uberlândia no ano de 2008. Esta doença muitas vezes negligenciada deve ser prevenida por representar risco à saúde pública e se parecer com outras doenças também endêmicas como a dengue.INTRODUCTION:This study aimed to verify the occurrence of the principal Leptospira spp. serovars in domestic dogs and humans, notified in 2008, and the main risk factors in a geographic approach to the disease in the City of Uberlândia, State of Minas Gerais, Brazil. METHODS: Canine blood serum samples (n=268) from different districts, belonging to the Northern, Southern, Eastern, Western and Central Sanitary Districts of Uberlandia, were collected during an animal vaccination campaign against rabies, in August 2008. A geographic approach to the city was conducted, including evaluation of locations in peripheral areas, waste landfills, garbage collection, rodent notification, human leptospirosis cases and overflow flood areas, during 2008. Leptospirosis was diagnosed using the microscopic agglutination test (MAT), the gold standard for animal and human leptospirosis diagnosis. RESULTS: Dogs mainly reacted to Autumnalis (34.2%) and Tarassovi (23.7%) serovars, while in humans, predominance of Tarassovi serovars occurred in the cases registered. The occurrence of these serovars could be related to an infection source common to both species, or dogs could be the infection source for humans. The Eastern Sanitary District showed a greater number of reactive dogs. CONCLUSIONS: Leptospirosis occurred in dogs and humans of the City of Uberlandia in 2008. This often neglected disease must be prevented because represents a public health risk and resembles other endemic illness like dengue

Prevalence of Neospora caninum antibodies in sheep flocks of Uberlândia county, MG

Neosporosis is a parasitic disease that occurs in sheep and is associated with reproductive failure. The aim of this study was to verify seroprevalence of Neospora caninum antibodies in 12 sheep flocks in Uberlândia county, Minas Gerais, Brazil, using Indirect Immunofluorescence Assay (IFA). A total of 334 sheep blood samples were analyzed and an epidemiologic questionnaire was applied for each farm in order to correlate with risk factors of neosporosis: gender, age, breed, abortion problems, contact with cattle and dogs, and presence of wild canids. The prevalence of Neospora caninum antibodies in sheep was 8.1%, with titers ranging from 50 to 3200 and 83.3% of farms detected at least one ovine reactive. There was statistically significant difference in flocks with abortion problems associated with the presence of Neospora caninum antibodies (p < 0.05)

Prevalência de anticorpos contra Toxoplasma gondii em ovinos no município de Uberlândia, MG

RESUMO O objetivo do estudo foi verificar a prevalência de anticorpos contraToxoplasma gondii em 334 amostras de sangue de ovinos oriundos de 12 propriedades localizadas no município de Uberlândia, Minas Gerais. O teste utilizado para a pesquisa foi a reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte na diluição 1:64. Identificou-se a prevalência de 30,8% anticorpos anti-T. gondii em ovinos e a frequência de soropositivos por propriedade variou de 10 a 66,7%, sendo que todas as propriedades apresentaram pelo menos uma amostra reagente. Ao associar a soropositividade com sexo, idade e raça, observou-se diferença estatística significativa para faixa etária, de modo que os animais com menor idade (6 a 11 meses) foram menos reagentes do que os ovinos com maior idade. Esses resultados sugerem a adoção de medidas preventivas na região estudada

Hematologic changes in dogs naturally infected Leptospira spp., Brucella abortus and Brucella canis

ABSTRACT. Castro J.R., Silva C.B., Souza M.A., Salaberry S.R.S., Guimarães E.C., Mundim A.V. & Lima-Ribeiro A.M.C. [Hematologic changes in dogs naturally infected Leptospira spp., Brucella abortus and Brucella canis.] Altera- ções hematológicas em cães naturalmente infectados por Leptospira spp., Brucella abortus e Brucella canis. Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 36(1):49-54, 2014. Laboratório de Doenças Infectocontagiosas, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Uberlândia, Av. Ceará s/n, Bloco 2D, Sala 33, Campus Umuarama, Uberlândia, MG 38400-902, Brasil. E-mail: [email protected] The investigations of leptospirosis and brucellosis canine act as sanitary control in public health and zoonoses because they were established by close contact between dog and human. The aim was to determine the main hematological reagents in asymptomatic dogs against Leptospira spp. Brucella abortus and Brucella canis naturally infected, living in urban areas in the city of Uberlandia, Minas Gerais. We examined 140 blood samples from clinically healthy dogs, males and females and different ages. Leptospirosis was diagnosed by microscopic agglutination test (MAT), with a collection of twelve serovars, whereas, brucellosis was identified through the tests of Agar Gel Immunodiffusion (AGID) for B. canis and buffered acidified antigen (TAA) confirmed 2-Mercaptoethanol (2-ME) for B. abortus. The results were analyzed using descriptive statistics with the calculation of simple percentages, mean and standard deviation. He applied and short sample t test for two independent samples to assess whether there were significant differences (p<0.05) between hematological parameters obtained. Dogs evaluated, 15% (21/140) and 2.85% (4/140) were reactive to Leptospira spp. and B. abortus, respectively. There was no sample reagent against B. canis. It was concluded that although no specific thrombocytopenia may be a significant finding in dogs with leptospirosis and brucellosis