Recombinant amyloid beta-peptide production by coexpression with an affibody ligand.

BACKGROUND: Oligomeric and fibrillar aggregates of the amyloid beta-peptide (Abeta) have been implicated in the pathogenesis of Alzheimer's disease (AD). The characterization of Abeta assemblies is essential for the elucidation of the mechanisms of Abeta neurotoxicity, but requires large quantities of pure peptide. Here we describe a novel approach to the recombinant production of Abeta. The method is based on the coexpression of the affibody protein ZAbeta3, a selected affinity ligand derived from the Z domain three-helix bundle scaffold. ZAbeta3 binds to the amyloidogenic central and C-terminal part of Abeta with nanomolar affinity and consequently inhibits aggregation. RESULTS: Coexpression of ZAbeta3 affords the overexpression of both major Abeta isoforms, Abeta(1-40) and Abeta(1-42), yielding 4 or 3 mg, respectively, of pure 15N-labeled peptide per liter of culture. The method does not rely on a protein-fusion or -tag and thus does not require a cleavage reaction. The purified peptides were characterized by NMR, circular dichroism, SDS-PAGE and size exclusion chromatography, and their aggregation propensities were assessed by thioflavin T fluorescence and electron microscopy. The data coincide with those reported previously for monomeric, largely unstructured Abeta. ZAbeta3 coexpression moreover permits the recombinant production of Abeta(1-42) carrying the Arctic (E22G) mutation, which causes early onset familial AD. Abeta(1-42)E22G is obtained in predominantly monomeric form and suitable, e.g., for NMR studies. CONCLUSION: The coexpression of an engineered aggregation-inhibiting binding protein offers a novel route to the recombinant production of amyloidogenic Abeta peptides that can be advantageously employed to study the molecular basis of AD. The presented expression system is the first for which expression and purification of the aggregation-prone Arctic variant (E22G) of Abeta(1-42) is reported.RIGHTS : This article is licensed under the BioMed Central licence at http://www.biomedcentral.com/about/license which is similar to the 'Creative Commons Attribution Licence'. In brief you may : copy, distribute, and display the work; make derivative works; or make commercial use of the work - under the following conditions: the original author must be given credit; for any reuse or distribution, it must be made clear to others what the license terms of this work are

Korrosion av stålkonstruktioner med lång förväntad livslängd – förslag på krav och metoder för verifiering

Dimensionering av pålar och spont i vatten och jord, med hänsyn taget till rostmån, kan idag ske på basis av Eurokod 3 (SS-EN 1993-5:2007). Tidigare har man i Sverige tillämpat de re-kommendationer som ges i Pålkommissionens rapport 98, kapitel 7. Kraven i de båda doku-menten skiljer sig i många fall kraftigt åt. I de flesta fall anges lägre rostmån i Eurokoden. Ett behov föreligger således att fastställa orsaken till dessa skillnader d.v.s. är kraven i Pålkom-missionens rapport för stränga eller de i Eurokoden för milda alternativt skiljer sig korrosions-förhållandena i Sverige från de på kontinenten. Ett behov av en nationell bilaga till Eurokoden kan då föreligga. Trafikverket har gett Swerea KIMAB i uppdrag att utarbeta förslag på krav som är anpassade efter de korrosionsförhållanden som bedöms gälla för svenska vatten och jordar. I arbetet ska också ingå att ta fram metoder för verifiering av kraven.Korrosion av stålkonstruktioner med lång förväntad livsläng

Korrosion av stålkonstruktioner med lång förväntad livslängd – nulägessammanställning

Dimensionering av pålar och spont i vatten och jord, med hänsyn taget till rostmån, kan idag ske på basis av Eurokod 3 (SS-EN 1993-5:2007). Tidigare har man i Sverige tillämpat de rekommendationer som ges i Pålkommissionens rapport 98, kapitel 7. Kraven i de båda dokumenten skiljer sig i många fall kraftigt åt. I de flesta fall anges lägre rostmån i Eurokoden. Ett behov föreligger således att fastställa orsaken till dessa skillnader d.v.s. är kraven i Pålkommissionens rapport för stränga eller de i Eurokoden för milda alternativt skiljer sig korrosionsförhållandena i Sverige från de på kontinenten. Ett behov av en nationell bilaga till Eurokoden kan då föreligga.Korrosion av stålkonstruktioner med lång förväntad livsläng

Invändig korrosion i stålrörspålar

I samband med slagning av stålrörspålar kan vatten tränga in i pålarna via bergsko/tätplatta eller skarvhylsor. Risken minskar efter stoppslagning eftersom tätheten då ökar. Pålens överyta tätas med en topplåt och oftast gjuts även den övre delen in i betong. Trots detta kan det inte uteslutas att vatten och luft tränger in i pålen även i ett senare skede. En rörpåle som delvis fylls med vatten men som därefter blir helt tät kommer att utsättas för en viss invändig korrosion. Det djupaste angreppet uppstår i ett smalt band strax under den invändiga vattenlinjen. Den totala korrosionen blir begränsad men det lokala angreppsdjupet kan bli av betydelse eftersom vattenlinjen endast marginellt varierar i tiden. Om däremot pålen inte blir helt tät kommer ett utbyte av vatten och luft att ske med omgivande jord och en fortlöpande korrosion kommer att ske. I detta fall kommer den totala korrosionen att bli större men eftersom den inre vattenlinjens läge kommer att variera i tiden, främst pga variationer i grundvattenytans läge, yttre lufttryck och temperatur, blir det kritiskaangreppet i vattenlinjen mer utspritt i höjdled. VTT (Technical Research Centre of Finland) har i två separata studier försökt att uppskatta vilka korrosionshastigheter som kan uppstå på stålrörspålars insidor (1,2). I denna rapport granskas dessa arbeten och egna beräkningar görs.Korrosion av stålkonstruktioner med lång förväntad livsläng

Strömningshastighetens inverkan på erforderlig rostmån

Korrosionshastigheten ökar med ökande strömningshastighet. Statistik från SMHI över vattenföringen vid Bergeforsens kraftstation i Indalsälven används som exempel. Vi finner att flödeshastigheten ökar svagare än vattenföringen eftersom också den vattenförande tvärsnittsytan ökar med ökad vattenföring. På platser där årsmedelvärdet på flödeshastigheten ligger på någon eller några få meter per sekund kan årsmedelvärdet på korrosionshastigheten direkt uppskattas från årsmedelvärdet på flödeshastigheten. Stora lokala variationer i flödeshastighet torde förekomma längs ett och samma vattendrag och också inom ett tvärsnitt på en och samma plats.Korrosion av stålkonstruktioner med lång förväntad livsläng

Paracrine stimulation of capillary endothelial cell migration by endometrial tissue involves epidermal growth factor and is mediated via up-regulation of the urokinase plasminogen activator receptor

Endometrial angiogenesis is not well studied, but has potential as a model for studies of physiological angiogenesis. Migration as well as proliferation of vascular endothelial cells are modulated by other endometrial cells. This study analyzes the chemotactic signal released from endometrial tissue in a wound assay using human microvascular endothelial cells. Endometrial tissue explants stimulate migration, and this effect is significantly weaker with explants taken at midcycle than those obtained earlier or later in the cycle. Migration is inhibited more than 50% by either blocking antibodies to the urokinase plasminogen activator receptor (uPAR) or enzymatic removal of uPAR from the cell surface. Also, migration is inhibited more than 50% by antibodies to epidermal growth factor (EGF), but not by antibodies to vascular endothelial growth factor or basic fibroblast growth factor. The combination, of anti-EGF and anti-uPAR antibodies does not further reduce the response, suggesting that these antibodies target a common pathway. Conditioned medium from endometrial explants contains EGF, and EGF stimulates the migration of endothelial cells in a dose-dependent way. This effect is completely blocked by antibodies to uPAR. These data suggest up-regulation of the uPA system by EGF. Conditioned medium from EGF-treated cells contains less uPA than medium from control cells. In contrast, binding of radiolabeled uPA reveals an increased number of uPA-binding sites in EGF-treated cells. Increased expression of uPAR potentially increases the activation and assembly of focal adhesion sites, a prerequisite for cell migration. We conclude that the endometrial migratory signal has two components. The major part of the signal is blocked by antibodies to EGF, and the response is mediated via upregulation of uPAR in the endothelial cells. The other part of the signal is unknown, and the response does not involve uPAR. Decreased endometrial chemotactic signal at midcycle is probably related to decreased release of EGF, which is secondary to increased binding to endometrial cell membranes

Lokalt förhöjd jämn korrosion på pålar – mätningar i fält och modellering

Långtidsexponering av pålar i ostörd jord visar att den jämna korrosionen ligger mellan 6 och 8 μm/år i jordar med hög korrosivitet (gyttjig lera) och mellan 2 och 4 μm/år i jordar med låg korrosivitet (sand, lera utan organiskt innehåll). För att kompensera för denna korrosion är en rostmån med 1 mm tillräcklig för 100 år. Det har dock även noterats en tendens till lokalt högre korrosion i ett område kring grundvattennivån och ner till en meter under densamma. Orsaken till detta är att det uppstår en luftningscell kring grundvattennivån, där den övre, väl luftade delen av pålen blir katod och den undre, dåligt luftade blir anod. Korrosionen blir således högre på delen strax under grundvattenytan. Om angreppet koncentreras till en kortare del av pålen uppstår midjebildning. Tendens till midjebildning har endast observerats, vid våra exponeringar, i jordar med låg resistivitet. Syftet med denna undersökning har varit att, genom kontrollerade fältförsök, mäta upp korrosionsströmmar mellan olika nivåer på en påle. Utgående från dessa resultat görs därefter teoretiska beräkningar för att fastställa om det existerar ett samband mellan jordens resistivitet och risken för lokal midjebildning. Eftersom den jämna korrosionen är mycket låg så kommer erforderlig rostmån att bestämmas av risken för midjebildning. Syftet med undersökningen kan därför sägas vara att studera om det finns ett samband mellan resistiviteten och jordens aggressivitet.Korrosion av stålkonstruktioner med lång förväntad livsläng

P-märkt grundmålad fasadpanel

Revised 20120627</p