Crystal Structure of the Human Natural Killer Cell Activating Receptor KIR2DS2 (CD158j)

Killer cell Ig-like receptors (KIRs) regulate the function of human natural killer and T cell subsets. A feature of the KIR locus is the clustering of homologous genes encoding for inhibitory and activating KIR. Inhibitory and activating KIR differ for ligand specificities and/or affinities. In particular, we show here with KIR tetramers that activating KIR2DS2 does not bind HLA-Cw3 molecules recognized by inhibitory KIR2DL2, despite 99% extracellular amino acid identity. We also report the 2.3-Å structure of KIR2DS2, which reveals subtle displacements of two residues (Tyr45 and Gln71) involved in the interaction of KIR2DL2 with HLA-Cw3. These results show that KIR molecules cannot tolerate any variability in their three-dimensional structure without altering their MHC class I recognition capacities. Therefore, the mode of recognition used by KIR largely differs from the conformational changes that characterize T cell receptor or NKG2D interaction with their respective ligands

+1 Frameshifting as a Novel Mechanism to Generate a Cryptic Cytotoxic T Lymphocyte Epitope Derived from Human Interleukin 10

Recent data indicate that some cytotoxic T cells (CTLs) recognize so-called cryptic epitopes, encoded by nonprimary open reading frame (ORF) sequences or other nonclassical expression pathways. We describe here a novel mechanism leading to generation of a cryptic CTL epitope. We isolated from the synovial fluid of a patient suffering from a Reiter's syndrome an autoreactive T cell clone that recognized cellular IL-10 in the HLA-B*2705 context. The minimal IL-10 sequence corresponding to nucleotides 379–408 was shown to activate this clone, upon cotransfection into COS cells with the DNA encoding HLA-B*2705, but the synthetic peptide deduced from this sequence did not stimulate the clone. Using a site-directed mutagenesis approach, we found that this clone recognized a transframe epitope generated by an internal +1 frameshifting in the IL-10 sequence and so derived partly from ORF1, partly from ORF2. We defined that +1 frameshifting was induced by a specific heptamer sequence. These observations illustrate the variety of mechanisms leading to generation of cryptic epitopes and suggest that frameshifting in normal cellular genes may be more common than expected

Információs társadalom, mint felügyelt társadalom?

Analysis of anti-human CD22 human mAbs affinity and specificity on human PBMCs. a) Affinity determination of anti-human CD22 mAbs using SPR by flowing various concentration of CD22 antibody over CD22 chip-bound. b) Flow cytometry analysis of CD22 mAbs on human PBMC. Human PBMC were labeled with anti human CD19 (APC) and purified CD22 mAbs (clone γ1λ1, γ3λ3-5, γ23κ5-2 or γ27λ26) coupled with Alexa Fluor 568 fluorochrome or with a commercial mouse mAb anti-human CD22 (Ms anti-human CD22). (PPT 666 kb

ETUDE DES CARACTERISTIQUES ET DE LA SIGNIFICATION PHYSIOPATHOGENIQUE DES REPONSES LYMPHOCYTAIRES T DIRIGEES CONTRE DES HERPESVIRUS COMMUNS CHEZ DES PATIENTS ATTEINTS D'ARTHRITE CHRONIQUE

NANTES-BU Sciences (441092104) / SudocSudocFranceF

Antigénicité des complexes peptide/CMH

L'une des nombreuses conditions préalables au déclenchement d'une réponse lymphocytaire T est la capacité du complexe peptide / Complexe Majeur d'Histocompatibilité (pCMH) à interagir avec le répertoire de récepteurs T. Cette propriété de l'antigène, appelée antigénicité, reste difficile à étudier du fait de la rareté des cellules T antigène-spécifiques dans le répertoire préimmun. Dans ce travail de thèse, nous exploitons une stratégie d'enrichissement magnétique des cellules spécifiques de différents épitopes viraux ou tumoraux présentés par le HLA-A*0201, pour déterminer ex vivo leur degré d'antigénicité dans le répertoire T avant et après les sélections thymiques chez des individus sains et naïfs pour les antigènes étudiés. L'antigénicité de ces complexes pCMH recombinants a également été évaluée au sein du répertoire B, qui diffère du répertoire T par son mode de reconnaissance CMH-indépendant de l'antigène. Nos résultats indiquent que le répertoire de TCR est intrinsèquement biaisé vers la reconnaissance des complexes pCMH, en accord avec une coévolution du TCR et du CMH. Cependant, la taille des populations T naïves Ag-spécifiques varie selon la topologie du complexe pCMH considéré, et ces variations sont amplifiées par les processus de sélections thymiques. Nous proposons que les chaînes latérales du peptide modulent les interactions TCR-CMH conservées, une forte antigénicité étant associée à une exploitation optimale des motifs d'interactions germinaux du TCR. Nos données suggèrent toutefois que chez l'homme, l'antigénicité des complexes pCMH est corrélée négativement à leur immunogénicité.The ability of peptide / Major Histocompatibility Complex (pMHC) complexes to interact with the TCR repertoire is called antigenicity. This property of antigens remains difficult to study because of the scarcity of antigen-specific T lymphocytes in preimmun individuals. In this thesis, we used an immunomagnetic enrichment strategy allowing the ex vivo detection of naïve T cells specific for several tumor and viral antigens presented by the HLA-A*0201, to assess their antigenicity within the T cell repertoire before or after thymic selections in healthy individuals. pMHC antigenicity was also determined within the B cell repertoire, which antigen binding mode is MHC-independent. Our results indicate that the TCR repertoire is inherently biased toward MHC recognition, consistent with co-evolution of both interaction partners. However, the size of naïve antigen-specific T cell populations varies according to pMHC topology, and thymic selection processes strengthen these variations. We propose that peptide side chains modulate the conserved TCR-MHC interactions, a high degree of antigenicity being associated with an optimal use of germline encoded TCR interaction motifs. Nevertheless, our data suggest that pMHC antigenicity is negatively correlated to immunogenicity in human.NANTES-BU Médecine pharmacie (441092101) / SudocSudocFranceF

Analyse de réponses lymphocytaires T CD8+ dirigées contre le virus de l'hépatite C (corrélation avec le statut clinique)

La majorité des individus infectés par le virus de l'hépatite C (VHC) restent chroniquement infectés et sont prédisposés à une cirrhose ou à un hépatocarcinome. Pour mieux comprendre les mécanismes qui influencent la progression vers l'infection chronique, nous avons fait une analyse fonctionnelle et moléculaire de lymphocytes T (LT) VHC-spécifiques chez des individus séropositifs, ayant ou non résolu leur infection, ainsi que chez des individus séronégatifs. Nous avons isolé par tri immunomagnétique, des LT CD8+ dirigés contre trois épitopes VHC immunodominants restreints par HLA-A*0201. Des LT spécifiques de ces complexes antigéniques ont pu être isolés pour tous les individus. Les patients chroniquement infectés ont montré des réponses T VHC-spécifiques plus faibles que les patients qui avaient résolu leur infection, en termes de production d'IFN-gamma, de cytotoxicité et de tests de dégranulation. Ces différences fonctionnelles seraient liées à une moindre fréquence de LT spécifiques exprimant un TCR de forte affinité chez les patients chroniquement infectés, plutôt qu à des défauts fonctionnels intrinsèques ou à une down-modulation par des récepteurs inhibiteurs. Les individus sains ont montré majoritairement des réponses de faible avidité, analogues à celles observées chez des patients en infection chronique, bien que des populations de forte avidité aient été observées chez certains individus. Nos résultats indiquent qu'un enrichissement en LT de forte avidité est associé à une clairance virale efficace et suggèrent un lien entre la qualité du répertoire lymphocytaire T VHC-spécifique initial et la susceptibilité à l'infection chroniqueUp to 170 million people are infected by hepatitis C virus (HCV), among whom 4/5 remain chronically infected and are predisposed to cirrhosis and/or hepatocarcinoma. To better understand the mechanisms that influence progression to HCV chronic infection versus viral control, we performed an in-depth functional and molecular analysis of highly purified HCV-specific T cells in seropositive donors, having resolved their infection or not, and in HCV-seronegative healthy donors. We managed to isolate from blood samples HCV-specific CD8+ T cells directed against three immunodominant HCV epitopes restricted by HLA-A*0201, using magnetic beads coated with HLA class I/peptide complexes. T cell populations specific to those antigens were isolated from almost all donors, irrespective of their serological status. Chronically infected patients yielded weaker HCV-specific CD8+ responses than those having cleared their infection, as assessed by IFN- production, cytotoxicity and degranulation assays. These functional differences were primarily accounted for by decreased frequency of specific T cells expressing high-affinity TCR in chronically infected patients rather than by intrinsic T cell functional defects or by active downmodulation by inhibitory receptors. Healthy donors yielded mainly low avidity HCV-specific T cell responses, very similar to chronic patients, although high avidity subsets were detected in some individuals. Our results indicate that enrichment for high avidity T cells is associated with successful viral clearance and suggest a link between the quality of the initial HCV-specific T cell repertoire and susceptibility to chronic infectionNANTES-BU Sciences (441092104) / SudocSudocFranceF