Functional characterization of mitochondrial suspensions by cytofluorimetric techniques towards the screening of mitochondrial target drugs

Dissertação de mestrado em Bioquímica AplicadaBesides its role in respiration, mitochondria control other key metabolic pathways, cell proliferation and regulated cell death, with a crucial role in the regulation of the intrinsic apoptotic pathway. Recent studies have focused on the screen for anti-cancer agents that induce apoptosis through permeabilization of the mitochondrial outer membrane, leading to the cytosolic release of pro-apoptotic proteins and to the activation of the caspase cascade and consequently to cell dismantling. In the present study, staining protocols were developed and optimized aiming at the structural and functional characterization of isolated mitochondrial populations from yeast cells and rat liver by flow cytometry. Mitotracker Green and Nonyl Acridine Orange were used to measure changes in mitochondrial mass, 3,3'- Dihexyloxacarbocyanine Iodide and Mitotracker Red CMXROS to monitor the electrical potential of the inner membrane (Δψm), Mitotracker Red CM-H2XROS and Dihydroethidium to evaluate the accumulation of ROS, and 2',7'-Bis-(2-Carboxyethyl)- 5-(and-6)-Carboxyfluorescein and Acetoxymethyl Ester (BCECF-AM) to measure the pH of the mitochondrial matrix. Subsequent flow cytometry studies were designed to evaluate the effect in mitochondria function of two well-known apoptosis inducers in both mammalian cell lines and yeast cells, namely bovine lactoferrin (bLf) and acetate, and to understand whether or not they act directly on mitochondria independently of upstream cellular pathways. The results showed that both bLf and acetate promoted changes in mitochondrial mass, matrix mitochondrial pH, Δψm and ROS levels of rat liver mitochondria. Moreover, the assessment of the activity of the complexes of electron transport chain (ETC) showed that bLf and acetate affect their activity and trigger mitochondrial swelling. These results are particularly interesting since the two compounds appear to induce in isolated mitochondria mainly the same alterations as those occurring in whole cells, and which have been proposed to be involved in the induction of cell death. Altogether, this study show that flow cytometry is a valuable tool to study key mitochondrial functional parameters and to screen for mitochondriatargeted drugs, including the anticancer agents, such as acetate and bLf.Para além do seu papel na respiração celular, as mitocôndrias controlam outros aspetos chaves do metabolismo, bem como a proliferação celular e a morte celular regulada, tendo um papel crucial na regulação da via apoptótica intrínseca. Estudos recentes têm-se focado na procura de agentes anticancerígenos capazes de induzir apoptose mediada pela permeabilização da membrana mitocondrial externa, conduzindo à libertação de proteínas pró-apoptóticas e à ativação da cascata de caspases e consequente desmantelamento celular. No presente estudo, foram desenvolvidos e otimizados protocolos de marcação com vista à caracterização estrutural e funcional por citometria de fluxo de populações de mitocôndrias isoladas de células de levedura e de hepatócitos de rato. As sondas Mitotracker Green e laranja de nonil-acridina foram usadas para medir variações da massa mitocondrial, o iodeto de 3,3'-Dihexiloxacarbocianina e o Mitotracker Red CMXROS para medir o potencial eléctrico da membrana mitocondrial interna (Δψm), o Mitotracker Red CM-H2XROS e dihidroetídeo para avaliar a acumulação de ROS e o acetoximetil éster de (2',7'-Bis-(2- Carboxietil)-5-(and-6)-carboxifluoresceína e(BCECF-AM) para medir o pH da matriz mitocondrial. Os estudos subsequentes de citometria de fluxo foram desenhados para avaliar o efeito de diferentes drogas na função mitocondrial, em particular da lactoferrina bovina (bLf) e do acetato, dois reconhecidos indutores de apoptose, no sentido de se compreender se atuam diretamente na mitocôndria independentemente de outras vias celulares a montante. Os resultados mostraram que tanto a bLf como o acetato promovem alterações na massa mitocondrial, pH da matriz mitocondrial, Δψm e nos níveis de ROS em mitocôndrias isoladas de fígado de rato. Além disso, a avaliação da atividade dos complexos da cadeia de transportadora de eletrões (ETC) mostrou que a bLf e o acetato afetam a sua atividade e desencadeiam a tumefação mitocondrial. Estes resultados são particularmente interessantes uma vez que os dois compostos parecem induzir, em mitocôndrias isoladas as mesmas alterações que ocorrem em células inteiras, e que têm sido propostas como estando envolvidas na indução da morte celular. No seu conjunto, este estudo mostra que a citometria de fluxo é uma ferramenta valiosa para o estudo da funcionalidade mitocondrial e para o rastreio de drogas que têm como alvo a mitocôndria, incluindo agentes anticancerígenos, tais como a bLf e o acetato

Hospital competition under patient inertia: do switching costs stimulate quality provision?

Recent empirical evidence establishes previous use as a strong predictor of patient choice of hospital and indicates that switching costs explain a significant share of inertia in the hospital industry. In a model of competition between two semi-altruistic and horizontally differentiated hospitals with inherited demand, I investigate the effect of lower switching costs on quality provision and show that it depends on the hospitals' production technology and degree of altruism. If cost substitutability (complementarity) between quality and output is sufficiently weak (strong) relative to altruism, lower switching costs reduce quality at the high-volume hospital, average quality, and patient welfare. While milder patient preferences increase the scope for an increase in quality at both hospitals, it can only occur if hospitals are semi-altruistic. Finally, I show that the distribution of patients between hospitals matters. Even if hospital-level quality and patient welfare increase, lower switching costs may lead to lower average quality.This paper is financed by National Funds of the FCT – Portuguese Foundation for Science and Technology within the project UID/ECO/03182/2019. I also thank FCT for the PhD Studentship SFRH/BD/129073/2017, financed by National Funds of the FCT and the European Social Fund (ESF)

Distribution-Based Categorization of Classifier Transfer Learning

Transfer Learning (TL) aims to transfer knowledge acquired in one problem, the source problem, onto another problem, the target problem, dispensing with the bottom-up construction of the target model. Due to its relevance, TL has gained significant interest in the Machine Learning community since it paves the way to devise intelligent learning models that can easily be tailored to many different applications. As it is natural in a fast evolving area, a wide variety of TL methods, settings and nomenclature have been proposed so far. However, a wide range of works have been reporting different names for the same concepts. This concept and terminology mixture contribute however to obscure the TL field, hindering its proper consideration. In this paper we present a review of the literature on the majority of classification TL methods, and also a distribution-based categorization of TL with a common nomenclature suitable to classification problems. Under this perspective three main TL categories are presented, discussed and illustrated with examples

A História da Música à distância de um "click"!: Paisagem sonora e património musical da cidade de Évora

Évora foi um dos mais importantes centros musicais de Portugal, com uma actividade musical dinâmica cujas primeiras referências documentais remontam ao século XIII. Esta actividade foi, sobretudo, de ordem eclesiástica tendo a elevação do bispado a arcebispado em 1540 e a acção dos cardeais-infantes D. Afonso e D. Henrique enquanto patronos das artes tornado a cidade num importante centro de produção e difusão de música. O aspecto urbano no respeitante à actividade musical, com inúmeras igrejas e mais de uma dezena de instituições religiosas, proporciona uma “paisagem sonora” particularmente rica. Este conceito – paisagem sonora – que tem vindo a ganhar cada vez mais expressão nos círculos musicológicos internacionais, permite entender a música realizada numa determinada área a partir de uma perspectiva contextual abrangente, contrariamente à leitura que ainda hoje teima em centrar-se num compositor ou grupo restrito de compositores. No seguimento de projectos deste género realizados na Andalusia (Sevilha e Granada) propõe-se na presente comunicação um projecto para Évora assente na cartografia do maior número possível de eventos históricos sonoros na cidade desde o século XV até 1910, através da criação de uma base de dados interactiva com os respectivos eventos e a compilação de documentos áudio e visuais que permitam ao visitante experienciar o máximo possível de cada evento. Estes eventos permitem criar itinerários temáticos para o visitante explorar uma série de cenários musicais históricos através de várias plataformas virtuais, como apps para smartphones, tablets entre outras que permitem enriquecer o percurso in loco ou antecipar o projecto de viagem turística pela cidade de Évora

Hospital competition when patients learn through experience

NIPE 12.2022We study competing hospitals' incentives for quality provision in a dynamic setting where healthcare is an experience good. In our model, the utility a patient derives from choosing a particular provider depends on a subjective component specifi c to the match between the patient and the provider, which can only be learned through experience. We find that the experience-good nature of healthcare can either reinforce or dampen the demand responsiveness to quality and the hospitals' incentives for quality provision, depending on two key factors: (i) the shape of the distribution of match-specific utilities, and (ii) the cost relationship between quality provision and treatment volume. Our analysis helps identify and understand the conditions required for the market-based provision of healthcare to deliver improved quality.This paper is financed by National Funds of the FCT (Portuguese Foundation for Science and Technology) within the project UIDB/03182/2020

Estimating regulatory capital: model parameters for securitized products under Basel II/III

CEM

Quality provision in hospital markets with demand inertia: the role of patient expectations

The presence of switching costs and persistent patient preferences generates demand inertia and links current and future choices of hospital. Using a model of hospital competition with demand inertia, we investigate the effect of patient expectations (whether and how patients anticipate the future) on quality provision. We consider three types of expectations. Myopic patients choose a hospital based on current variables alone, forward-looking but naïve patients take the future into account but assume that quality remains constant, and forward-looking and rational patients foresee the evolution of quality. We rank equilibrium quality provision and show that it is higher under naïve than myopic expectations, while equilibrium quality under rational expectations may be highest or lowest. This result also holds for patient welfare, suggesting that rationality does not always benefit patients. We also show that only under rational expectations may quality be lower than in a market without inertia and switching cost reductions beneficial.This paper is financed by National Funds of the FCT (Portuguese Foundation for Science and Technology) within the project UID/ECO/03182/2019. Sá acknowledges the PhD Studentship SFRH/BD/129073/2017 awarded by the FCT and financed by National Funds of the FCT and the European Social Fund

Planeamento de sistemas de informação: estudo das variáveis que condicionam a sua estratégia de execução

O papel crucial que a informação desempenha na sociedade actual, os grandes investimentos efectuados em Tecnologias da Informação e Comunicação (TIC) e o impacto crescente dos Sistemas de Informação (SI) no funcionamento e nas capacidades competitivas das organizações justificam e realçam a necessidade de realizar, convenientemente, a actividade de Planeamento de Sistemas de Informação (PSI). Com o intuito de obter auxílio para a condução desta actividade, deve recorrer-se à adopção e à utilização de métodos desenvolvidos para esse fim. Apesar da diversidade de métodos existentes e dos benefícios que podem ser obtidos pela sua aplicação, o PSI continua hoje a ser uma actividade problemática devido às dificuldades associadas à selecção, adaptação e utilização desses métodos. Embora seja notória a realização de esforços na tentativa de colmatar esses problemas, quer pela melhoria dos métodos existentes, quer pela apresentação de novos métodos, quer ainda pela reformulação do processo da sua escolha, grande parte dos métodos propostos e descritos na literatura têm vindo a revelar-se pouco flexíveis e difíceis de adaptar às características particulares de cada organização. Esta última constatação justificou a realização do presente trabalho. Neste sentido, considerou-se que seria aconselhável conhecer as circunstâncias em que decorrerá a actividade de PSI, defendendo-se que tal conhecimento pode ser obtido através da identificação de um conjunto de variáveis que permita caracterizar essas circunstâncias. Da reflexão efectuada derivou-se um conjunto de variáveis que condicionam a estratégia de execução a adoptar para a realização da actividade de PSI, que foram agrupadas e organizadas num esquema classificativo. Este esquema reúne todas as variáveis propostas e classifica-as, em função da sua proveniência, em quatro categorias distintas, designadas por contexto ambiental, contexto organizacional, contexto da função SI/TI e contexto do processo de PSI

Reflections on the concept of interoperability in information systems

Information systems interoperability is one of the main concerns and challenges of information systems managers and researchers, most of whom perceive and approach it on a pure or predominantly technological perspective. In this paper, we argue that a sociotechnical perspective of information systems interoperability should be adopted and we set out seven assertions that, if taken into consideration, may improve the understanding, management, and study of the information systems interoperability phenomenon.(undefined