Нокдаун клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 как супрессор вирусной активности гриппа А/WSN/33 (H1N1) в культуре клеток А549

Objectives. To evaluate the effect of cellular genes FLT4, Nup98, and Nup205 on the reproduction of the influenza A virus in A549 human lung cancer cell line.Methods. The work was carried out using the equipment of the center for collective use of the I.I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera (Russia). The virus-containing fluid was collected within three days from the moment of transfection and infection and the intensity of viral reproduction was assessed by viral titration and hemagglutination reaction. The viral RNA concentration was determined by real-time reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). To calculate statistically significant differences between groups, the nonparametric Mann–Whitney test was used.Results. In cells treated with small interfering RNAs (siRNAs) targeted at FLT4, Nup98, and Nup205 genes, a significant decrease in their expression and indicators of viral reproduction (virus titer, hemagglutinating activity, viral RNA concentration) was observed at a multiplicity of infection (MOI) = 0.1. Additionally, it was found that a decrease in the expression of target genes using siRNA does not lead to a significant decrease in cell survival. The viral titer in cells treated with siRNA FLT4.2, Nup98.1, and Nup205 on the first day was lower by an average of 1.0 lg, and on the second and third days, by 2.2–2.3 lg, compared to cells treated with nonspecific siRNA. During real-time RT-PCR, a significant decrease in the concentration of viral RNA was observed with siRNA Nup98.1 (up to 190 times) and Nup205 (up to 30 times) on the first day, 26 and 29 times on the second day, and 6 and 30 times on the third day, respectively. For FLT4.2 siRNA, the number of viral RNA copies decreased by 23, 18, and 16 times on the first, second, and third days. Similar results were obtained when determining the hemagglutinating activity of the virus. The hemagglutinating activity on the third day most strongly decreased in cells treated with siRNA Nup205 and FLT4.2 (16 times). In cells treated with siRNA FLT4.1, Nup98.1, and Nup98.2, hemagglutinating activity decreased by 8 times.Conclusions. In the present study, three cellular genes (FLT4, Nup98, and Nup205) were identified—the decrease in the expression of which effectively suppresses viral reproduction— and the original siRNA sequences were obtained. The results obtained are important for creating therapeutic and prophylactic medication, whose action is based on the RNA interference mechanism.Цели. Оценка влияния подавления экспрессии клеточных генов FLT4, Nup98 и Nup205 на динамику репродукции вируса гриппа А в культуре легочных клеток человека А549.Методы. Работа выполнена с использованием оборудования центра коллективного пользования Научно-исследовательского института вакцин и сывороток им И.И. Мечникова (Россия). Вируссодержащую жидкость отбирали в течение трех дней с момента трансфекции и заражения и оценивали интенсивность вирусной репродукции методами титрования по цитопатическому действию и в реакции гемагглютинации. Концентрацию вирусной РНК определяли методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР-РВ). Для вычисления статистически значимых различий между группами использовали непараметрический критерий Манна–Уитни.Результаты. В клетках, обработанных малыми интерферирующими РНК (миРНК) к генам FLT4, Nup98 и Nup205, отмечалось достоверное подавление экспрессии целевых генов и показателей вирусной репродукции (титр вируса, гемагглютинирующая активность, концентрация вирусной РНК) при коэффициенте множественности заражения, равном 0.1. Дополнительно было установлено, что подавление экспрессии целевых генов с помощью миРНК не приводит к значительному снижению выживаемости клеток. Вирусный титр в клетках, обработанных миРНК FLT4.2, Nup98.1 и Nup205, на первые сутки был меньше в среднем на 1.0 lg, а на вторые и третьи – на 2.2–2.3 lg, по сравнению с клетками, обработанными неспецифической миРНК. При проведении ОТ-ПЦР-РВ отмечено достоверное уменьшение концентрации вирусной РНК с миРНК Nup98.1 (до 190 раз) и Nup205 (до 30 раз) на первые сутки, в 26 и в 29 раз на вторые и в 6 и 30 раз на третьи сутки, соответственно. Для миРНК FLT4.2 количество копий вирусной РНК уменьшилось в 23, 18 и 16 раз на первые, вторые и третьи сутки. Схожие результаты были получены при определении гемагглютинирующей активности вируса. Наиболее сильно, в 16 раз, гемагглютинирующая активность на третьи сутки снизилась в клетках, обработанных миРНК Nup205 и FLT4.2. В клетках, обработанных миРНК FLT4.1, Nup98.1 и Nup98.2, гемагглютинирующая активность уменьшилась в 8 раз.Выводы. В ходе исследования были выявлены три клеточных гена (FLT4, Nup98 и Nup205), подавление экспрессии которых позволяет эффективно уменьшить вирусную репродукцию, а также получены оригинальные последовательности миРНК. Полученные результаты имеют важное значение для создания терапевтических и профилактических препаратов, чье действие основано на механизме РНК-интерференции

Менингококковая инфекция у детей в период 2012–2021 гг. Основные итоги ретроспективного многоцентрового исследования, проблемы сегодняшнего дня

The heavy burden of meningococcal infection is associated not only with life-threatening complications in the acute period and high mortality in invasive forms of the disease, but also with severe consequences in survivors, who are not recorded in our country.The aim of study: to analyze clinical manifestations, complications of the acute period and outcomes of invasive forms of meningococcal disease in children in various regions of the Russian Federation.Materials and methods: an analysis of data from 1327 inpatient medical records of children with an invasive meningococcal infection from 14 regional centers of the Russian Federation for 2012-2021 was carried out (28.3% of cases of the disease in children in the represented federal districts).Results: it was found that young children predominated among the patients – the median was 27.4 (10.7-70.4) months. Complications of the acute period, often combined, were observed in 47.6% of cases. The development of septic shock was noted in 30.4%, Waterhouse-Friderichsen syndrome in 6.6%, carditis in 2.9%, cerebral edema in 15.7%, arthritis in 1.4% of cases; the formation of hydrocephalus, subdural effusion, sensorineural hearing loss in 1.8%, 0.6%, 1% of children, respectively. The presence of soft tissue necrosis requiring surgical intervention was noted in 3.5% of cases. Mortality rate was 10.1%. At the time of discharge from the hospital, 30% of children had complications associated with meningococcal infection: organ dysfunction/ failure in 13.2% of patients (severe in 1.3%), cerebral insufficiency in 19.6%; severe psycho-neurological deficits, sensorineural hearing loss, problems associated with the need for orthopedic/surgical interventions accounted for 0.7%, 0.6% and 0.8%, respectively.Conclusion. Considering the epidemiological features of meningococcal infection – the risk of a sharp increase in morbidity in short periods of time, the life-threatening nature of the disease itself, it is necessary to remain alert to these risks and take all possible measures to prevent the disease using all available means, the most effective of which is vaccine prevention.Тяжелое бремя менингококковой инфекции связано не только с жизнеугрожающими осложнениями острого периода и высокой летальностью при генерализованных формах заболевания, но и с тяжелыми последствиями у выживших, учет которых в нашей стране не ведется.Цель: проведение анализа клинических проявлений, осложнений острого периода и исходов генерализованных форм менингококковой инфекции у детей в различных регионах Российской Федерации.Материалы и методы: проведен анализ данных 1327 медицинских карт (форма 003/у) детей с генерализованной формой менингококковой инфекции из 14 региональных центров Российской Федерации за 2012– 2021 гг. (28,3% случаев заболевания у детей в представляемых федеральных округах).Результаты: установлено, что среди больных преобладали дети раннего возраста – медиана составила 27,4 (10,7–70,4) месяцев. Осложнения, часто сочетанные, в остром периоде заболевания наблюдались в 47,6% случаев: септический шок в 30,4%, синдром Уотерхауза – Фридериксена в 6,6%, кардит в 2,9%, отек головного мозга в 15,7%, артриты в 1,4%, гидроцефалия в 1,8%, сенсоневральная тугоухость в 1%, субдуральный выпот в 0,6% случаев. Наличие некрозов мягких тканей, требовавших хирургического вмешательства, отмечено в 3,5% случаев. Летальность составила 10,1%. На момент выписки из стационара у 30% детей выявлялись осложнения, в том числе выраженная органная дисфункция в 1,3%, грубый психоневрологический дефицит, сенсоневральная тугоухость; осложнения, требующие проведения ортопедических/хирургических вмешательств, составили 0,7%, 0,6% и 0,8% соответственно.Анализ полученных данных позволил вскрыть существующие проблемы, касающиеся клинической и этиологической диагностики заболевания, возможностей выявления осложнений острого периода и учета последствий генерализованных форм менингококковой инфекции.Заключение. Учитывая эпидемиологические особенности менингококковой инфекции (риск резкого подъема заболеваемости в короткие временные промежутки, жизнеугрожающий характер самого заболевания), необходимо сохранять настороженность в отношении данных рисков и предпринимать все возможные меры для профилактики заболевания с использованием всех доступных средств, наиболее эффективным из которых является вакцинопрофилактика

Clinical Features and Management of the Disease Caused by New Coronaviral Infection (COVID-19) in Children. Version 2

The Ministry of Health of the Russian Federation jointly with professional association and experts in the field of pediatrics, infectious diseases and resuscitation has revised guidelines “Clinical Features and Management of the Disease Caused by New Coronaviral Infection (COVID-19) in Children” in order to provide the child population with effective medical care during the pandemic of the new coronaviral infection. The practical experience of specialists from various countries was considered during the development of this document. Special attention should be given to the evidence base of the presented data, as well as to the efficiency and safety issues of medications used in treatment of coronaviral infection and its complications. The authors highlight the problems of prevention, diagnostics and management of pathological conditions caused by COVID-19 in the article according to the presented guidelines. Patient’s management is presented depending on the age and severity of the disease itself. The therapy is considered with regard to etiological, pathogenetic and symptom focus

Привитость и охват иммунизацией в соответствии с национальным календарем профилактических прививок детского населения: одномоментное многоцентровое исследование

Background. Monitoring of documented vaccination is one of the indicators of the epidemiological supervision quality of preventive vaccination. It is crucial for epidemical situation prevention. Objective. The aim of the study is to estimate immunization and immunization coverage levels according to National Immunization Schedule (NIS) for children population in Russia. Methods. Immunization rates were estimated according to preventive vaccination cards (form №063/y) and children development cards (form №112/y) among children aged from 6 months to 15 years in 8 towns of Russia. Immunization was determined by the ratio of people who has fully performed all the vaccines from NIS (version of the year 2014), while immunization coverage – by the ratio people who has received at least one dose of corresponding vaccine. Results. The study has included data from 2,687 vaccinated children. The highest levels of immunization and immunization coverage were against tuberculosis (98.1% each), hepatitis B (85.9% and 96.5%), measles, mumps and rubella (84.4% and 93.9%). Immunization against diphtheria, pertussis and tetanus significantly differed from their immunization coverage (60.5% and 94.9%), as well as for poliomyelitis (65.0% and 94.9%). Relatively low immunization and immunization coverage levels were observed for pneumococcal infection (27.6% and 47.1%) and influenza (5.8% and 30.5%). The increase in the immunization level with age was observed for all vaccines, except pneumococcal vaccine. Conclusion. Immunization and immunization coverage against infections included in NIS vary significantly. The highest immunization and immunization coverage levels for all age groups were revealed for tuberculosis vaccine, and the lowest — for influenza vaccine.Обоснование. Мониторинг документированной привитости — один из показателей качества эпидемиологического надзора за проведением вакцинопрофилактики, который необходим для предупреждения развития ситуации эпидемического неблагополучия. Цель исследования — изучить показатели привитости и охвата иммунизацией согласно национальному календарю профилактических прививок (НКПП) детского населения России. Методы. Показатели иммунизации оценивали по данным карт профилактических прививок (форма 063-у) и развития ребенка (форма 112-у) детей в возрасте от 6 мес до 15 лет в 8 городах России. Привитость определяли по доле лиц, полностью завершивших график вакцинации согласно НКПП (версия 2014 г.), охват иммунизацией — по доле лиц, получивших хотя бы одну дозу соответствующей вакцины. Результаты. В исследование включены данные 2687 вакцинированных детей. Наибольшие уровни привитости и охвата иммунизацией отмечены против туберкулезной инфекции (по 98,1% для каждого показателя), гепатита В (85,9 и 96,5%), кори, краснухи и эпидемического паротита (84,4 и 93,9% соответственно). Уровень привитости против коклюша, дифтерии и столбняка значительно отличался от показателей охвата иммунизацией (60,5 и 94,9%), что было характерно и для полиомиелита (65,0 и 94,9%). Относительно низкие уровни привитости и охвата иммунизацией отмечены для пневмококковой инфекции (27,6 и 47,1%) и гриппа (5,8 и 30,5%). Для всех прививок, кроме вакцинации против пневмококка, отмечено увеличение уровня привитости с возрастом. Заключение. Привитость и охват иммунизацией против инфекций, включенных в НКПП, сильно варьируют. Наибольший уровень привитости и охвата иммунизацией по всем возрастным группам был обнаружен относительно вакцинации против туберкулеза, наименьший — против гриппа

Особенности клинических проявлений и лечения заболевания, вызванного новой коронавирусной инфекцией (COVID-19), у детей. Версия 2

The Ministry of Health of the Russian Federation jointly with professional association and experts in the field of pediatrics, infectious diseases and resuscitation has revised guidelines “Clinical Features and Management of the Disease Caused by New Coronaviral Infection (COVID-19) in Children” in order to provide the child population with effective medical care during the pandemic of the new coronaviral infection. The practical experience of specialists from various countries was considered during the development of this document. Special attention should be given to the evidence base of the presented data, as well as to the efficiency and safety issues of medications used in treatment of coronaviral infection and its complications. The authors highlight the problems of prevention, diagnostics and management of pathological conditions caused by COVID-19 in the article according to the presented guidelines. Patient’s management is presented depending on the age and severity of the disease itself. The therapy is considered with regard to etiological, pathogenetic and symptom focus.С целью обеспечения детского населения эффективной медицинской помощью в условиях пандемии новой коронавирусной инфекции Минздравом России совместно с профессиональными ассоциациями и экспертами в области педиатрии, инфекционных болезней и реанимации были переработаны методические рекомендации «Особенности клинических проявлений и лечения заболевания, вызванного новой коронавирусной инфекцией (COVID-19), у детей». При разработке документа был учтен практический опыт не только специалистов нашей страны, но и зарубежных коллег. Особое внимание уделено доказательной базе представленных данных, а также вопросам эффективности и безопасности лекарственных препаратов, применяемых при лечении данной инфекции и ее осложнений. В статье на основании указанных методических рекомендаций авторы освещают вопросы профилактики, диагностики, лечения патологических состояний, обусловленных COVID-19. Тактика ведения пациента представлена в зависимости от возраста и степени тяжести течения болезни, терапия рассмотрена с позиций этиологической, патогенетической и симптоматической направленности