O efeito das nanopartículas de ZnO nas células germinativas masculinas

Nowadays, a new concept of nanotechnology, “the nanomedicine” has been developed. Certain nanoparticles offer an exceptional set of characteristics that improve the diagnosis and treatment quality and efficacy on medicine. Zinc Oxide Nanoparticles (ZnO NPs) are a type of metal oxide nanoparticles with an extensive use, for example, in drug delivery systems, bioimaging and cancer therapy. Several authors have focused on biosafety studies of ZnO NPs, as their size and surface area favour the entrance and accumulation in organism, which can induce toxic effects. ZnO NPs have been identified, as a dose and time dependent cytotoxic inducer in testis and in some male germ cells, like spermatozoa and spermatocyte. In this way, it is important to understand the consequences of ZnO NPs exposure on the first cell stage of spermatogenesis, the spermatogonia. Thus, the aim of this work was to evaluate the effects of ZnO NPs on spermatogonia. GC-1 spg cell line derived from spermatogonia of mouse testes was treated with different concentrations of ZnO NPs, namely 0, 1, 5, 8, 10 and 20 μg/ml for 6 hours and 12 hours. The study was divided into two stages. Firstly, cytotoxicity resulting from exposure to ZnO NPs was evaluated through cell viability assays, intracellular ROS detection, progression of apoptosis/necrosis analysis and levels of DNA damage. At the end, cytoskeleton protein levels (acetylated α-tubulin, β-tubulin, β-actin and F-actin) and the nuclear intern protein Sun1 were assessed. According with results, higher concentrations of ZnO NPs have a toxic effect in GC-1: viability decreased, ROS intracellular levels production, DNA damage and cell death ratio increase. Further, at cytoskeleton and nucleoskeleton level, significant changes were verified. In conclusion, ZnO NPs induce cytotoxic effects on GC-1 cells in a time and dose-dependent manner. Short time exposure and low concentration of zinc oxide nanoparticles do not induce cytotoxicity on spermatogonia.Atualmente, um novo conceito de nanotecnologia, “a nanomedicina” foi desenvolvido. Certas nanopartículas oferecem um conjunto excecional de características que melhoram a qualidade e a eficácia do diagnóstico e dos tratamentos na medicina. Nanopartículas de óxido de zinco (NPs de ZnO) são um tipo de nanopartículas de óxido de metal muito usadas, por exemplo, em sistemas de administração de fármacos, em bioimagem e no tratamento do cancro. Alguns autores têm-se concentrado no estudo da biossegurança das NPs de ZnO, uma vez que o seu tamanho e área de superfície permitema entrada e acumulação no organismo, o que pode induzir efeitos tóxicos. As NPs de ZnO foram identificadas, como indutoras de citotoxicidade dependente da dose e do tempo de exposição no testículo e em algumas células germinativas masculinas como os espermatozóides e os espermatócitos. Desta forma é importante conhecer as consequências da exposição a NPs de ZnO no primeiro estadio celular da espermatogénese, a espermatogónia. Assim, o objetivo deste trabalho é avaliar os efeitos das NPs de ZnO na espermatogónia. A linha celular GC-1 spg derivada das espermatogónias de testículos de ratinho foi tratada com diferentes concentrações de ZnO NPs, nomeadamente 0, 1, 5, 8, 10 e 20 μg/ml durante 6 horas e 12 horas. O estudo foi dividido em duas etapas. Inicialmente, a citotoxicidade resultante da exposição a NPs de ZnO foi avaliada através de ensaios de viabilidade, deteção intracelular de ROS, análise da progressão da apoptose/necrose e os níveis de dano no DNA. No final, foram avaliados os níveis de proteínas do citoesqueleto (α-tubulina acetilada, β-tubulina, β-actina e F-actina) e da proteína nuclear interna Sun1. De acordo com os resultados, concentrações elevadas de NPs de ZnO têm um efeito tóxico em GC-1: a viabilidade decresce, a produção intracelular de ROS, o dano no DNA e os níveis de apoptose e necrose aumentam. Também ao nível do citoesqueleto e do nucleoesqueleto foram verificadas alterações significativas. Em suma, as NPs de ZnO induzem efeitos citotóxicos em células GC-1 de modo dependente da dose e do tempo. Curtos períodos de exposição e baixas concentrações de NPs de ZnO não induzem citotoxicidade em espermatogónias.Mestrado em Biomedicina Molecula

Perceived retail crowding and anxiety: impact on shopping satisfaction and impulse buying

M10, D23, M31I would like first to thank my thesis supervisor, Professor Nelson Ramalho of the Business School at ISCTE a role model as a professional and person. He was more than a Professor during this past year, but rather a friend who was always ready to assist; a person who always fulfils his commitments and even with a super busy personal agenda, seeks to reach everyone; is undoubtedly endowed with many qualities and I cannot thank enough for the consistency and the outstanding orientation. I want to express my never-ending gratitude to my mother who always placed my education as a priority and supported all my choices. She is the one I should thank for giving me this opportunity and always being there for me. Also, a special thanks to my closest friends and family who always gave me unconditional support in the most critical times and for being a source of motivation. Finally, I would also like to thank all those who were involved in completing the questionnaire for this research project. Without their participation and input the research could not have been successfully conducted.A literatura tem mostrado a existência de um papel mediador das emoções na relação entre perceção de "crowding" no retalho e a satisfação de compra. Os estudos precedentes não têm, porém, investigado o papel que a ansiedade pode desempenhar nesta mediação, pese embora estar amplamente associada a situação de "crowding". Este estudo propõe-se compreender essa relação associando, para além da satisfação com a compra, a decisão de compra por impulso. Com uma amostra de 441 clientes de supermercado testámos um modelo por via de equações estruturais com a perceção de "crowding" (humano e espacial) como preditora, a ansiedade-estado como mediadora e a satisfação e compra de impulso como variáveis critério. Controlámos a potencial influência da ansiedade-traço. Os resultados mostram um papel mediador da ansiedade-estado na relação entre o "crowding" espacial percebido com a satisfação de compra, sem, porém, tal se verificar para a decisão de compra por impulso. Do mesmo modo, a ansiedade-traço está apenas associada (positivamente) à compra por impulso. O estudo conclui pela existência de processos paralelos associados à ansiedade que deverão ser considerados aquando da gestão dos espaços de retalho tendo por vista a maximização da experiência de compra e porventura a de compra por impulso

Corneal Tissue Engineering: New Applications for Corneal Stromal Stem Cells

The WHO estimates 10 million people in the World are blinded by corneal disease. For many conditions, transplantation of a donor cornea may restore vision. However, there is a global shortage of suitable tissue and a high risk of rejection. The potential of stem cell therapies and tissue engineering approaches to address this significant unmet clinical need was investigated. Limbal epithelial stem cells (LESC) maintain the epithelium, the outermost layer of the cornea, and can be successfully transplanted to restore vision. However, when scarring occurs, transplantation of corneal stroma is required. Human corneal stromal stem cells (CSSC) are involved in stroma maintenance and have previously been shown to restore transparency in cloudy mouse corneas without rejection. This study investigated the development of a surgeon friendly tissue equivalent (TE) for the therapeutic delivery of CSSC and LESCs. For the first time, human corneal rims were rendered transparent for imaging under the iDISCO protocol. CSSC were successfully isolated and characterised with mesenchymal stem cell (MSC) properties confirmed. RAFT-TE, a potential artificial ocular surface, has been extensively investigated by our group using research grade collagen (First Link; not suitable for clinical use). In this thesis, a comparative study was performed to show that Koken collagen (Good Manufacturing Practice compliant) is a suitable replacement for research grade collagen as it did not compromise RAFT-TE properties. Next, co-culture conditions for LESC and CSSC in RAFT-TE were optimised. First, the idea of co-delivering CSSC together with LESCS to the surface of RAFT-TE as a mixed population was trialled. This resulted in unexpected epithelial cell peeling. To overcome this challenge, CSSC were successfully cultured for the first time inside Koken RAFT-TE. CSSC formed cell clusters, remodelled the matrix, and migrated to the surface of the TE. It was also shown that they can be induced to differentiate towards the keratocyte lineage inside the TE. This work highlights the importance of considering clinical manufacturing standards early in the process of development. Overall, it provides valuable insights to develop personalised autologous therapies and off the shelf allogeneic strategies for restoring vision in patients with corneal blindness

Caracterização Ambiental de uma Planície Aluvionar e Proposta para a sua Remediação

A ocorrência antrópica de metais em meio natural relaciona-se maioritariamente com a existência e funcionamento industrial. A actividade industrial da unidade metalúrgica de Três Marias da Votorantim Metais S.A., localizada no estado Brasileiro de Minas Gerais, tem provocado diversos impactos ambientais na sua envolvente, nomeadamente nos solos, sedimentos e na qualidade da água. A caracterização geoquímica baseada na avaliação da mobilidade dos elementos químicos através da análise da água intersticial dos sedimentos e dos ensaios de lixiviação realizados na zona revelou elevados níveis de contaminação em metaloides e metais pesados, muito acima dos níveis críticos e com elevada biodisponibilidade. O estudo teve como ponto de partida a caracterização geoquímica da zona de forma a fundamentar a escolha das técnicas de remediação ambiental mais adequada(s) para a proposta de requalificação ambiental da área em estudo

Evaluation of the Environmental Risk of Contaminated Materials in the Alluvial Plain of a Metallurgical Unit

Anthropogenic occurrence of metals in a natural environment is mainly related to the existence and functioning of industrial activities. The Três Marias metallurgical unit of Votorantim Metais S.A., located in the Brazilian state of Minas Gerais, has been producing zinc alloys since the late 1960's. Its operation has caused several environmental impacts in its surroundings, namely soils, sediments and water quality. The geochemical characterization of this area revealed a high contamination in heavy metals (cadmium, chromium, copper, manganese, nickel, lead and zinc) and arsenic, above the critical levels, most of which having high bioavailability. This study aims to evaluate and discuss the extent of contamination in the alluvial plain of Consciência waterway, a tributary of the São Francisco river, through geochemical analysis of the sediments and water column, in order to evaluate the most appropriate environmental remediation technique(s) to Implement in the are

Identificação mineralógica e caracterização geoquímica de metais pesados em diferentes fracções granulométricas de sedimentos aluvionares contaminados

The occurrence of heavy metals in natural environment is mainly related to anthropic activities. One of the first steps to determine and identify contaminants in soils and sediments is the determination of textural caracteristics and sedimentary provenance of the geological materials, either anthropogenic or natural. Thus, considering the geochemical characterization carried out in an alluvial plain having high levels of potencially toxic metal, the granulometric characterization and the mineralogical identification by XRD in distinct granulometric fractions were performed with the aim of understanding the evolution of the contamination in this area. After the textural characterization and the determination of the granulometric fractions having higher concentration of contaminated minerals, these fractions were subjected of partial digestion in order to determine the contents of heavy metals present and evaluate the efectiy danger to the environment

Avaliação geoquímica e remediação de sedimentos contaminados num estreito afluente do Rio São Francisco (MG, Brasil)

Apesar de um elevado caudal, o Rio São Francisco (Brasil) tem sido progressivamente afectado por fontes poluentes com origem na indústria mineira. Uma dessas indústrias, localizada na sua margem no Estado de Minas Gerais, na consequência da produção de ligas de zinco através do tratamento de minério sulfuretado e silicatado e da ausência de regulamentação ambiental apropriada durante os primeiros anos de actividade, provocou graves problemas ambientais que ainda hoje persistem, em toda a área circundante, particularmente num pequeno curso de água afluente (Consciência). Embora muitos dos resíduos tenham sido removidos e depositados em estruturas de contenção apropriadas, elevados teores de sulfatos, arsénio e metais (Zn, Cd, Pb, Co, Cu) estão concentrados nos sedimentos que facilmente os libertam para a coluna de água, transferindo-os para o todo o meio e atingindo frequentemente a margem oposta do rio. Face ao problema de extensão desta contaminação e à legislação ambiental recente, a empresa pretendeu monitorizar os níveis críticos destes metais em solos, planícies aluvionares e linhas de água envolventes e eliminar os principais focos de poluição, para aplicação posterior de medidas de remediaçã

Impact of extreme climatic events on the spatial and temporal distribution of major and trace elements in bed sediments of reservoirs in the Dominican Republic

The Dominican Republic has a tropical climate intensified by periods of extreme hydrometeorological events that occur almost every year. This climate, in a volcanic region with pronounced slopes and fine-grained soils, enhance the transport and deposition of the finer particles in lakes, causing high sedimentation rates and decreasing water quality. Studies carried out in two reservoirs located near the higher mountainous zone (Cordillera Central), with identical lithology in the drainage basins and distinct climatic conditions (Tavera at North with greater precipitation, Sabana Yegua (SY) at South, under drier weather), tried to evaluate the influence of the climate and ECE in their sedimentation

AVALIAÇÃO GEOQUÍMICA DE AMBIENTES CONTAMINADOS PELA EXTRACÇÃO MINEIRA EM DUAS DISTINTAS REGIÕES GEOLÓGICAS E CLIMÁTICAS

A nível mundial a indústria mineira é responsável pela adição de 1,16 milhões de toneladas de metais por ano, em ecossistemas terrestres e aquáticos. A poluição do solo e de sistemas aquáticos por metais pesados é um dos factores que mais contribui para a degradação da qualidade do meio, constituindo um risco eminente de intoxicação para o Homem. Foram selecionadas, no Brasil e em Portugal, duas regiões com forte impacto mineiro, para avaliar a influência da geologia e do clima, na geoquímica de ambientes sujeitos à contaminação pela exploração mineira. Bacia do Paraopeba: situada na região do Quadrilátero Ferrífero, Minas Gerais, sob clima tropical seco, foi selecionada pela sua geodiversidade, importância socioeconómica, associada a graves problemas ambientais devido à intensa actividade mineira que se exerce há mais de 300 anos. Geologicamente é constituída por gnaisses, granitoides, rochas metavulcânicas e vulcânicas intercaladas por rochas sedimentares, quartzitos, metaconglomerados-metarenitos, metapelitos, itabiritos e mármores. Mina de S. Domingos: explorada desde o período calcolítico foi encerrada em 1966 após esgotamento do minério. Situa-se no Sul de Portugal, sob clima Mediterrânico e integra-se na Faixa Piritosa Ibérica, que constitui uma das mais importantes Províncias Metalogénicas de sulfuretos maciços polimetálicos à escala mundial. Possui resíduos mineiros muito heterogéneos, encontrando-se escórias romanas e modernas, cinzas de fundição, resíduos ricos em pirite e outros resíduos provenientes da extracção de minério, como resíduos de gossan e de rochas-mãe (quartzitos e filitos, rochas vulcânicas ácidas com intercalações sedimentares, depósitos do tipo “flisch”). Realizou-se um estudo geoquímico de várias componentes geológicas (solos, sedimentos de lagoas de decantação e de linhas de água, água intersticial e coluna de água) em áreas sujeitas a diversas influências dos processos de extracção mineira. Devido à ocorrência sob distintas formas minerais, óxidos de ferro na Bacia do Paraopeba e sulfuretos maciços em S. Domingos, as características geoquímicas do meio e a solubilidade e biodisponibilidade dos elementos metálicos apresentam diferenças acentuadas, tendo como consequência distintos impactos ambientais. Os valores das fracções potencialmente mais poluentes, extraíveis com aqua regia, são significativamente superiores para As, Pb, Zn e Cu em S. Domingos, possuindo a Bacia do Paraopeba valores mais elevados de Mn e Cr. O Fe tem valores idênticos nas duas regiões. Em S. Domingos, os baixos valores de pH (2,47-4,10), aumentam a solubilidade dos metais, representando uma situação de maior risco ambiental. Apenas o Mn, nas fracções biodisponíveis, (fases dissolvidas na água intersticial, fracções de troca e ligadas a carbonatos) tem teores mais elevados na Bacia do Paraopeba, onde as concentrações sob a forma de óxidos são muito elevadas (>2000 ppm). A especiação dos elementos metálicos constitui importante ferramenta para a monitorização da poluição ambiental em regiões mineiras. A sua mobilidade, biodisponibilidade e ecotoxicidade depende da sua proporção nas diferentes fases minerais ou orgânicas às quais está associado, variando em função das condições químicas do meio, clima e natureza das rochas parentais. A análise das formas químicas dos metais, distintas nas duas regiões mineiras, forneceu uma ferramenta imprescindível para o conhecimento das medidas de recuperação e reabilitação a adoptar