Evaluación de antibióticos para el control de loque americana en colmenas de abejas melíferas

El objetivo central de este trabajo de tesis fue realizar una evaluación integral de los antibióticos oxitetraciclina, tilosina, tilmicosina y lincomicina para el control de la loque americana. Se puso a punto una técnica para evaluar la sensibilidad in vitro de los cuatro antibióticos contra cepas de Paenibacillus larvae adaptando técnicas propuestas por la NCCLS pero empleando MYPGP como medio basal. Este medio resultó altamente efectivo para determinar la sensibilidad/resistencia de P. larvae frente a los antibióticos probados porque permitió el crecimiento óptimo de esta especie y los controles de calidad se ajustaron a los parámetros propuestos. Se propusieron las siguientes cargas de discos: Tetraciclina: 5 µg; Tilosina: 15 µg; Tilmicosina: 15 µg; Lincomicina: 15 µg y, a partir de las mismas se elaboró un standard para interpretación de los discos: Tetraciclina: sensible > 19 mm de diámetro de halo de inhibición; Intermedio 15-18 mm y resistente ≤ 14 mm; Tilosina: sensible 1 > mm; Intermedio 11-13 mm y resistente ≤ 10mm; Tilmicosina: sensible 14 > mm; Intermedio 11-13 mm y resistente ≤ 10 mm; Lincomicina: sensible 21 > mm; Intermedio 15-20 mm y resistente ≤ 14 mm. Se determinaron los puntos de corte para la especie en estudio con respecto a los valores de Concentración Inhibitoria Mínima (CIM), y se propone el empleo de los siguientes puntos de corte epidemiológicos: Tetraciclina: sensible ≤ 4 µg/ml y resistente > 16 µg/ml; Tilosina: sensible ≤ 2 µg/ml y resistente > 8 µg/ml; Tilmicosina: sensible ≤ 2 µg/ml y resistente > 8 µg/ml; Lincomicina: sensible ≤ 4 µg/ml y resistente > 16 µg/ml. Teniendo en cuenta que ya existen casos de resistencia hacia la oxitetraciclina, el uso de estos puntos de corte epidemiológicos permitirá denotar rápidamente pequeños cambios en la población salvaje de Paenibacillus larvae. Ninguno de los ATB evaluados resultó tóxico para abejas adultas; tanto tilosina, como tilmicosina y lincomicina resultaron virtualmente atóxicos. En el caso de oxitetraciclina los valores de LD50 obtenidos resultaron próximos al límite de compuestos tóxicos, de modo que un mínimo error en la dosificación a campo puede resultar en toxicidad para abejas adultas. Se puso a punto una técnica para determinar la toxicidad larval de los ATB la cual resultó satisfactoria y permitió determinar claramente diferencias estadísticamente significativas. Sólo el tratamiento oxitetraciclina presentó una mortandad larval superior a la normal, lo cual demuestra que resulta tóxico. Tilmicosina, tilosina y lincomicina por el contrario no resultaron tóxicos para las larvas, aunque de los tres, la tilmicosina presentó un mayor porcentaje de toxicidad dentro de los parámetros normales y la lincomicina tuvo los niveles de mortandad más bajos. Finalmente se pudo concluir que todos los antibióticos ensayados en esta tesis resultaron efectivos para el control de la enfermedad a campo a las dosis y en las formas de aplicación probadas. Los resultados de todos los ensayos con tilmicosina para el control de P. larvae, tanto in vitro como a campo y de toxicidad para abejas y larvas, constituyen el primer registro a nivel mundial. En tanto que los resultados de todos los ensayos con lincomicina para el control de P. larvae, tanto in vitro como a campo y de toxicidad para abejas y larvas, son inéditos para la Argentina.Facultad de Ciencias Naturales y Muse

Evaluation of the Epsilometer (Etest) method for the detection of tetracycline susceptibility in Paenibacillus larvae, the causal agent of American foulbrood disease of honeybees

La bacteria esporulada gram positiva Paenibacillus larvae es el agente causal de la loque americana de las abejas. El objetivo de este trabajo fue comparar las CIM de tetraciclina obtenidas por el método Etest y las obtenidas por el método de dilución en agar frente a 22 cepas del patógeno, empleando dos medios de cultivo: Iso-Sensitest y MYPGP. Se encontró una concordancia de categoría entre dichos métodos del 100 % usando agar Iso-Sensitest, mientras que con MYPGP la concordancia de categoría fue del 86,36 % (con 3 errores menores). Los resultados de este estudio sugieren que la combinación de las tiras de Etest con agar Iso-Sensitest sería una alternativa rápida y confiable para determinar las CIM de tetraciclina en P. larvae; sin embargo, estos resultados deberán confirmarse en futuros estudios que contemplen un mayor número de aislamientos.American foulbrood (AFB) is a bacterial disease caused by the spore-forming, grampositive bacterium Paenibacillus larvae, which affects honeybee broods worldwide. The aim of this work was to compare the Epsilometer test (Etest) to the agar dilution method for testing a collection of 22 P. larvae strains to tetracycline by using MYPGP and Iso- Sensitest agars. Results showed that a categorical agreement of 100% was found when using Iso-Sensitest, while a categorical agreement of 86.36% was found (with 3 minor errors) when MYPGP was tested. In conclusion, the Etest could be a rapid and reliable method for testing MIC values of tetracycline in P. larvae only when used in combination with Iso-Sensitest agar. Nevertheless, these results should be confirmed with future studies involving a larger number of isolates.Fil: Alippi, Adriana Mónica. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. Departamento de Ciencias Biológicas. Centro en Investigación de Fitopatología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Cientifico Tecnológico La Plata; ArgentinaFil: Reynaldi, Francisco José. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. Departamento de Ciencias Biológicas. Centro en Investigación de Fitopatología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Cientifico Tecnológico La Plata; ArgentinaFil: López, Ana Claudia. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. Departamento de Ciencias Biológicas. Centro en Investigación de Fitopatología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Cientifico Tecnológico La Plata; Argentin

Control biológico de cría yesificada

La cría yesificada es una micosis invasiva ocasionada por el hongo heterotálico Ascosphaera apis que afecta exclusivamente a las larvas de las abejas. La enfermedad tiene difusión mundial y en la Argentina se halla diseminada en todas las áreas donde se realiza apicultura. Se estudió la potencialidad de 249 cepas de bacterias esporuladas aeróbicas aisladas de miel como agentes biocontroladores del hongo mediante un ensayo en disco central en condiciones de laboratorio. Se seleccionaron como mejores antagonistas 10 cepas bacterianas las que se evaluaron contra 10 aislamientos de A. apis. Un ANOVA y posterior comparación de medias por LSD mostró a las cepas B. subtilis (m329), B. megaterium (m435) y B. circulans Fr 231 y m448b como las más eficaces en controlar el desarrollo del hongo

Evaluation of kinetic behaviour of two preparations of tylosin administered in beehives for american foulbrood control

We compared the kinetic behaviour of tylosin administered to beehives by dusting or paper-pack placement through three treatment protocols (D, PP, CONTROL). D (dusting): tylosin, divided in four portions, was sprinkled over the ends of the hives' top bars weekly for four weeks (n=3); PP (paper-pack placement): tylosin in paper packs was administered at two-week intervals (n=3); CONTROL (control): the hives were left untreated (n=3). In every inspection, from each of the nine hives, fifty young (2-day-old) larvae were sampled for drug analysis. The concentration of tylosin in the young larvae was determined by a microbiological assay with Geobacillus stearothermophilus ATCC 12980 as test organism. The (mean±SD) maximum concentration (Cmax) for D was 136.0±194.0 and for PP – 144.0±187.4 μg/mL; the time to reach Cmax (tmax) was 1.5±0.9 h for D and 1.8 ± 1.8 h for PP. The area under the tylosin behaviour kinetics curve between 0–1392 h with D was 308.7±185.2 and with PP: 326.4±141.0 μg/h/mL, indicating no statistical difference between the treatments (P>0.05). The shorter duration of paper-pack-administered tylosin observed in the larvae implied a lower risk of antibiotic residues in the resulting honey.Facultad de Ciencias Agrarias y Forestale

Bee Viruses: An Emerging Problem That Need Better Diagnosis, Prevention and Control Strategies

The role of the honeybee (Apis mellifera L.) in pollination is crucial for the maintenance of biodiversity of most terrestrial ecosystems and global agricultural production. In this way, biotic pollination is required for the reproduction of 70% of flowering plants. Particularly, pollination with bees is needed for more than 35% of the world’s crops that produce basic food for man. Recently, the fraction of global crops that require animal pollination has tripled, making food production more dependant of pollinators that before .Facultad de Ciencias Veterinaria

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIÓN GENÓMICA DE CEPAS AUTÓCTONAS DEL VIRUS DE ALAS DEFORMADAS QUE AFECTAN A ABEJAS MELÍFERAS

El objetivo general es aislar cepas de DWV de nuestra región y caracterizarlas genotípica y desarrollar una técnica que permita la replicación viral in vitro y obtener alta carga viral para comenzar a estudiar los patrones de infección que tienen las variantes de DWV en larvas y abejas adultas. Consiste en recolectar 20 muestras aleatorias de nuestra región (Partido de La Plata, provincia de Buenos Aires), cada muestra consta de 50 abejas adultas. Las mismas serán conservadas a -70°C hasta su procesamiento en la Cátedra de Virología (FCV, UNLP).  Luego se procederá a realizar los siguientes pasos: 1- Aislamiento de cepas autóctonas del DWV en abejas melíferas  Para la detección de DWV se partirá de 15 abejas tomadas al azar de cada muestra, las que serán homogeneizadas en un mortero con 2ml de solución salina tamponada con fosfato (PBS) estéril. Luego se realizará la extracción de ARN utilizando 1 ml de TRIzol (Invitrogen) y cloroformo, haciendo la precipitación con isopropanol y lavados con etanol 70°. Se procederá a la síntesis de ADNc.  La reacción se llevará a cabo utilizando una RT-PCR multiplex. Los homogenatos con identificación positiva para DWV serán clarificados por centrifugación,se esterilizarán por filtración y serán almacenados a -70ºC para ser utilizados posteriormente para el aislamiento del virus.   2- Purificación viral: Los homogenatos con identificación positiva para DWV serán concentrados por centrifugación posteriormente purificados por centrifugación en gradiente de sacarosa (20-60%). Cada una de las fracciones obtenidas será analizada por absorbancia y aquella que contenga las partículas virales será nuevamente concentrada por ultracentrifugación. 3- Caracterización genómica de los virus aislados: a) Secuenciación, las cepas aisladas serán secuenciadas en su totalidad con el fin de estudiar su posible variabilidad regional. b) Análisis filogenético de las cepas aisladas, las secuencias a emplear serán editadas y alineadas utilizando los programas Bio-Edit (versión 7.05) y ClustalX (versión 1.92) respetivamente. Estandarización de un método de replicación viral in vitro:  Se trabajará en la obtención de cultivos primarios de células de abeja a partir de huevos o larvas de uno a dos días de edad. Para la propagación viral en células, se empleará, la primera vez, el sobrenadante obtenido de los homogenatos con identificación positiva para DWV y, de allí en adelante, un protocolo estándar de infección utilizando un inóculo con 108 copias virales/ml, stock con el que cuenta nuestro laboratorio.La multiplicación viral será analizada por observación directa de los sobrenadantes con MET y por RT-PCR con primers específicos para DWV. En caso de no tener éxito, la propagación viral se realizará en pupas de abeja, recolectadas de colmenares sanos

Primeira detecção molecular de co-infecção de vírus de abelhas em Bombus atratus assintomática na América do Sul

Pollination is critical for food production and has the particularity of linking natural ecosystems with agricultural production systems. Recently, losses of bumblebee species have been reported worldwide. In this study, samples from a commercial exploitation of bumblebees of Argentina with a recent history of deaths were studied using a multiplex PCR for the detection of the honey bee viruses most frequently detected in South America. All samples analyzed were positive for co-infections with Deformed Wing Virus, Black Queen Cell Virus and Sacbrood virus. This is the first report of infection of Bombus atratus with honey bee viruses. A better understanding of viral infections in bumblebees and of the epidemiology of viruses could be of great importance as bumblebees can serve as possible viral reservoirs, resulting in pathogen spillover towards honey bees and native bumblebees.A polinização é essencial para a produção de alimentos e tem como particularidade a conexão entre os ecossistemas naturais com sistemas de produção agrícola. Recentemente, as perdas de espécies de bumblebee em todo o mundo têm sido relatadas. Neste trabalho, amostras de uma exploração comercial de bumblebee da Argentina, com recente história de mortes foram estudadas utilizando uma Multiplex PCR para a detecção de vírus de abelha mais frequentemente detectados na América do Sul. Todas as amostras analisadas foram positivas para as co-infecções com Deformed wing virus, Black queen cell viruses e Sacbrood virus. Este trabalho descreve o primeiro relato de infecção de Bombus atratus com vírus de abelhas. Uma melhor compreensão das infecções virais em bumblebee e da epidemiologia dos vírus poderia ser de grande importância, uma vez que tais abelhas podem servir como reservatório viral, com possível repercussão tanto na produtividade de abelhas melíferas como afetando-as diretamente.Fil: Reynaldi, Francisco José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Cientifico Tecnológico La Plata; Argentina. Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; ArgentinaFil: Sguazza, Guillermo Hernán. Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; ArgentinaFil: Albicoro, Francisco Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico La Plata. Instituto de Biotecnología y Biología Molecular; ArgentinaFil: Pecoraro, Marcelo Ricardo. Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; ArgentinaFil: Galosi, Cecilia Monica. Universidad Nacional de la Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentina. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas; Argentin

Virus que afectan a las abejas (Apis mellifera)

Patogenicidad de los virus ARN que acetan a los apidos, su relación con la respuesta inmune.Fil: Reynaldi, Francisco José. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Larsen, Alejandra. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; ArgentinaFil: Sguazza, Hernán. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentin

Tilosina: ¿alternativa para el control de loque americana?

Se probó la sensibilidad de una colección de 67 cepas de Paenibacillus larvae subsp. larvae, agente causal de la loque americana de las abejas provenientes de Argentina y de los principales países productores de miel. Los valores de CIM obtenidos fueron muy bajos (entre 0.0078 y 0.5 µg/ml), corroborando que hasta el presente no existen cepas del patógeno resistentes a tilosina. Los tres estudios de campo realizados muestran la eficacia del antibiótico en colmenas y la ausencia de efectos negativos sobre abejas adultas y larvas a todas las dosis probadas

An Overview of Honeybee Colony Losses in Buenos Aires Province, Argentina

Honey bees (Apis mellifera) are essential for the ecosystem, so their loss threatens biodiversity and agriculture. Several factors have been proposed as possible causes of both massive losses and Colony Collapse Disorder. In August 2017 episodes of colony losses were registered in General Alvear, Buenos Aires province. The aim of the present study was to find possible causes of these events. The samples were screened for presence of several pathogens and the determination of maternal lineages was also performed. Seven out of ten colonies were positive for pathogens, but there was no high prevalence of any of them. It will be necessary to carry out a standardization of studies, and delineate boundaries that allow comparing cases in order to discriminate different types of mortality of colonies that occur worldwide.Fil: Genchi García, María Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentina. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas; ArgentinaFil: Plischuk, Santiago. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectores. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectores; ArgentinaFil: Bravi, Claudio Marcelo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comisión de Investigaciones Científicas. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular. Universidad Nacional de La Plata. Instituto Multidisciplinario de Biología Celular; ArgentinaFil: Reynaldi, Francisco José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata; Argentina. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias. Departamento de Microbiología. Cátedra de Virología; Argentin