Study of the mechanisms associated with bovine alphaherpesvirus 5 (BoHV5) neuropathogenesis in its natural hospedator

El alfaherpesvirus bovino 5 (BoHV5) es el agente etiológico de la meningoencefalitis no supurativa en terneros, causal de brotes fatales frecuentes en Argentina y Brasil y cuya patogenia aún no ha sido completamente esclarecida. Este virus está estrechamente relacionado con el alfaherpesvirus bovino 1 (BoHV1), el cual causa enfermedades respiratorias, abortos, trastornos genitales y, ocasionalmente, encefalitis en el ganado. Aunque ambos virus son neurotrópicos y comparten propiedades biológicas similares, se desconoce el motivo por el cual estos BoHV difieren en su capacidad para causar enfermedades neurológicas. Con el objeto de estudiar diversos aspectos de la neuropatogénesis del BoHV5 y comparar los hallazgos con BoHV1, se obtuvieron muestras de tejido neural de terneros inoculados intranasalmente con BoHV1 y BoHV5 durante la infección aguda, la latencia y la reactivación. Se determinó la distribución del genoma de ambos virus en sistema nervioso observándose que en la infección aguda, la distribución de BoHV1 es más amplia que la de BoHV5, mientras que durante la latencia y reactivación sólo el genoma de BoHV5 está presente en este tejido. También se analizó la expresión de genes virales representativos de la cinética inmediata temprana (IE), temprana (E) y tardía (L) en los distintos estadios de infección. No se detectó expresión génica viral en tejido nervioso durante la infección aguda de terneros infectados con BoHV1 o BoHV5. En terneros latentemente infectados con BoHV5 se detectó la expresión del gen TK en todos los sectores del sistema nervioso central evaluados y se detectaron genes L en la corteza cerebral y en ganglio trigémino (GT) durante la latencia de BoHV5 y BoHV1, respectivamente, lo cual permite asumir que en este estadio existe cierto nivel de expresión de genes IE que iniciarían la cascada de expresión génica. Durante la etapa de reactivación no se detectó la expresión de genes IE o E en tejido nervioso de bovinos infectados. En esta etapa se detectó la expresión de genes L, gD de BoHV1 y gB de BoHV5. Esto sugiere que la expresión de genes L es un evento clave para que se logre la infección productiva en esta etapa. Por otro lado se evaluaron las variaciones en los niveles de expresión de los receptores tipo toll (TLR) en diferentes regiones del SNC bovino. En general, los resultados de este estudio demostraron que la infección del sistema nervioso por los BoHV estimuló la expresión de los TLR3, TLR7 y TLR8 y no modificó significativamente la expresión de TLR9, y fue posible determinar que la magnitud en la variación de la expresión de los TLR se correlaciona con las manifestaciones clínicas que se pueden observar en cada etapa del ciclo infeccioso de los BoHV. Por otro lado, se analizaron los niveles de expresión de ARNm de ciclinas mediante qRT-PCR, observandose que existen diferencias notables en la modulación de la expresión de ciclinas por BoHV1 y BoHV5, particularmente en GT, el sitio principal de latencia de los alfaherpesvirus. En este trabajo se evaluó la presencia de linfocitos CD8+ citotóxicos mediante inmunohistoquímica y se determinó la expresión de perforina y granzimas en el tejido nervioso. No se detectó una presencia abundante de linfocitos T CD8+. Estos fueron más evidentes durante la infección aguda por BoHV1 y menos evidentes en el GT de los bovinos infectados con BoHV5. Del mismo modo, la ausencia de expresión de perforina y granzimas durante la infección aguda facilitaría la diseminación viral en el tejido nervioso. Durante la latencia de BoHV5, fue posible determinar la expresión de granzima B, lo cual sugiere que antígenos virales mantendrían activos a los linfocitos citotóxicos durante esta etapa. Por último, se analizó la capacidad de BoHV5 para inducir apoptosis en cultivos celulares y en tejido nervioso. Pudiendose observar que BoHV1 tendría más capacidad para inducir apoptosis in vitro e in vivo. Los cambios apoptóticos se corresponden con la capacidad de replicación de las cepas de BoHV1 y BoHV5. En este estudio se demostró que la reactivación molecular espontánea puede ser un evento frecuente en las infecciones por ambos alfaherpesvirus. Se detectó una regulación positiva significativa de todos los TLR después de la infección primaria de los tejidos neurales por ambos BoHV, a excepción de TLR9 que no demostró variaciones significativas. Las diferencias notables en los niveles de ARNm de TLR durante la infección aguda y la reactivación proporcionan evidencia de que la respuesta inmune innata puede estar involucrada en los resultados clínicos observados en cada etapa. Se observaron también, diferencias marcadas entre la inducción in vitro de apoptosis por las cepas BoHV1 Cooper y BoHV5 97/613. Se demostró una asociación entre la magnitud de la replicación de los BoHV y la inducción de apoptosis en el GT. Por otro lado se demostró por primera vez la modulación de BoHV5 sobre la expresión de ciclinas en los tejidos neurales de su hospedador natural. Estos hallazgos sugieren que la inducción de apoptosis y la respuesta inmune innata orquestan el resultado final de la infección por alfaherpesvirus del sistema nervioso bovino.Bovine alphaherpesvirus 5 (BoHV5) is the etiological agent of non-suppurative meningoencephalitis in calves, the cause of frequent fatal outbreaks in Argentina and Brazil. BoHV5 pathogenesis of which has not been fully elucidated yet. This virus is closely related to bovine alphaherpesvirus 1 (BoHV1), which causes respiratory diseases, abortions, genital disorders, and occasionally encephalitis in cattle. Although both viruses are neurotropic and share similar biological properties, the reason why these alphaherpesviruses differ in their ability to cause neurological disease is unknown. In order to study various aspects of BoHV5 neuropathogenesis and to compare the findings with BoHV1 infection, neural tissue samples were obtained from calves intranasally inoculated with BoHV1 and BoHV5 during acute infection, latency, and reactivation. The distribution of the genome of both viruses in the nervous system was determined, observing that during acute infection, the distribution of BoHV1 is broader than that of BoHV5, while during latency and reactivation only the BoHV5 genome is present in this tissue. The expression of viral genes representative of the immediate-early (IE), early (E) and late (L) kinetics in the different stages of infection was also analyzed. No viral gene expression was detected in nervous tissue during acute primary infection of calves infected with BoHV1 or BoHV5. In calves latently infected with BoHV5, the expression of the TK gene was detected in all the sectors of the central nervous system evaluated and L genes were detected in the cerebral cortex and in the trigeminal ganglion (TG) during the latency of BoHV5 and BoHV1, respectively, which allows us to assume that at this stage there is a certain level of expression of IE genes that would initiate the gene expression cascade. During the reactivation stage, the expression of IE or E genes was not detected in nervous tissue of infected cattle. At this stage, the expression of L genes, BoHV1 gD and BoHV5 gB was detected. This suggests that L gene expression is a key event for productive infection to be achieved at this stage. On the other hand, variations in the levels of expression of toll-like receptors (TLR) in different regions of the bovine CNS were evaluated. In general, the results of this study demonstrated that infection of the nervous system by BoHV stimulated the expression of TLR3, TLR7, and TLR8 and did not significantly modify the expression of TLR9. It was possible to determine that the magnitude in the variation of TLR expression is correlated with the clinical manifestations that can be observed at each stage of the infectious cycle of BoHV. The expression levels of cyclins mRNA were analyzed using qRT-PCR, observing that there are notable differences in the modulation of cyclin expression by BoHV1 and BoHV5, particularly in the TG, the main latency site of alphaherpesviruses. In this work, the presence of cytotoxic CD8+ lymphocytes was evaluated by immunohistochemistry and the expression of perforin and granzymes in nervous tissue was determined. An abundant presence of CD8+ T lymphocytes was not detected. These cells were more evident during acute BoHV1 infection and less evident in the TG of BoHV5- infected cattle. Similarly, the absence of perforin and granzyme expression during acute infection would facilitate viral spread in nervous tissue. During BoHV5 latency, it was possible to determine the expression of granzyme B, which suggests that viral antigens would keep cytotoxic lymphocytes active during this stage. Finally, the ability of BoHV5 to induce apoptosis in cell cultures and in nervous tissue was analyzed. It was evident that BoHV1 would have more capacity to induce apoptosis in vitro and in vivo. The apoptotic changes are in agreement with the level of replication of BoHV1 and BoHV5 strains.This study demonstrated that spontaneous molecular reactivation can be a frequent event in infections by both BoHV. A significant positive regulation of all TLR was also detected after primary infection of neural tissues by both viruses, except for TLR 9 who did not show significant variations. The notable differences in the TLR mRNA levels during acute infection and reactivation provide evidence that the innate immune response may be involved in the clinical outcomes observed at each stage. The remarkable differences in TLR mRNA levels during acute infection and reactivation provide evidence that the innate immune response may be involved in the clinical outcomes observed at each stage. Marked differences were also observed between in vitro induction of apoptosis by the BoHV1 Cooper and BoHV5 97/613 strains. An association between the magnitude of BoHV replication and the induction of apoptosis in the TG was demonstrated. On the other hand, the modulation of BoHV5 on the expression of cyclins in the neural tissues of its natural host was demonstrated for the first time. These findings suggest that the induction of apoptosis and the innate immune response orchestrate the final outcome of alphaherpesviruses infection of the bovine nervous system.Facultad de Ciencias Veterinaria

Informe científico de Beca de Perfeccionamiento: Rensetti, Daniel Ernesto (2013-2014)   

A continuación se detalla la labor realizada durante el segundo año de beca de perfeccionamiento para cumplir con los objetivos propuestos: • Determinación del genotipo de la región del promotor del gen Hsp70: El polimorfismo en la región del promotor del gen Hsp70 se analizó por PCR-RFLP, técnica descripta en (Rosenkrans, C. et al., 2010). Hasta el momento, hemos determinado el genotipo de 220 animales Rosenkrans, C., Banks, A., Reiter, S., & Looper, M. (2010). Calving traits of crossbred Brahman cows are associated with Heat Shock Protein 70 genetic polymorphisms. Animal reproduction science, 119(3-4), 178-82. Elsevier B.V. • Registro de parámetros productivos y reproductivos: De todos los animales seleccionados se registraron los siguientes datos: fecha de nacimiento, padre y madre, número de lactancia, eficiencia al primer servicio, fecha de parto, litros totales de leche, % de proteína y grasa en leche, número de abortos, número de ternero nacido muerto. • Amplificación y secuenciación de Tax La proteína Tax, del Virus de la Leucosis Bovina, es un activador de la transcripción de la replicación viral y un factor esencial para el potencial oncogénico del virus. Para la amplificación del gen Tax diseñamos nuevos primers, utilizando PCR Nested, se purificaron los amplicones y se enviaron a secuenciar para luego determinar la ubicación filogenética de las muestras. Las muestras pertenecen a animales de baja y alta carga proviral respectivamente, utilizadas en el análisis de la secuencia BLVgp51 publicada en Partial molecular characterization of different proviral strains of bovine leukemia virus y de corderos infectados experimentalmente. Los resultados se estan utilizando en la redacción de un nuevo trabajo cientifico. Juliarena MA, Lendez PA, Gutierrez SE, Forletti A, Rensetti DE, Ceriani MC. Arch Virol. 2013 Jan;158(1):63-70. doi: 10.1007/s00705-012-1459-8. Epub 2012 Sep 11. • Estudiar los haplotipos de los genes hsp70 y BoLa DRB*3.2 presentes en el cromosoma bovino BTA 23 en poblaciones en equilibrio HW. En este momento hemos identificados 5 toros heterocigotas para el alelo BoLADRB3.2*0902 perteneciente a la cooperativa COTANA. Tres de estos toros tienen vacas hijas en producción. Hemos identificado las medias hermanas infectadas con BLV. De cada una de ellas se estudió el haplotipo sobre el cromosoma BTA23: polimorfismo de los genes BoLA DRB3.2* y hsp70p y el perfil de infección desarrollado contabilizando un total de 96 animales tipificados geneticamente. • Realización de dos cursos de posgrado, uno de ellos de carácter obligatorio del Doctorado en Ciencia Animal de la Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires Categorizado A por Res. CONEAU Nº235/2008

Bovine herpesvirus type 5 replication and induction of apoptosis in vitro and in the trigeminal ganglion of experimentally-infected cattle

Bovine herpesvirus (BoHV) types 1 and 5 are neuroinvasive. Cases of BoHV-1-induced encephalitis are not as frequent as those caused by BoHV-5. In this study, the capability of BoHV-5 to induce apoptosis in cell cultures and in the trigeminal ganglion during acute infection of experimentally-infected cattle was analyzed. Apoptotic changes in cell cultures agree with the ability of the viral strains to replicate in each cell line. Marked differences were observed between the in vitro induction of apoptosis by BoHV-1Cooper and BoHV-5 97/613 strains. Apoptotic neurons were clearly evident in the trigeminal ganglion of BoHV-1-infected calves. For BoHV-5 a fewer number of positive neurons was observed. There is an association between the magnitude of bovine herpesviruses replication and the induction of apoptosis in trigeminal ganglion. These findings suggest that the induction of apoptosis and the innate immune response orchestrate the final outcome of alpha herpesviruses infection of the bovine nervous system.Fil: Rensetti, Daniel Ernesto. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Marin, Maia Solange. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; ArgentinaFil: Morán, Pedro Edgardo. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Verna, Andrea Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Perez, Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentin

Differential expression of cyclins mRNA in neural tissues of BoHV-1- and BoHV-5- infected cattle

Bovine alphaherpesvirus types 1 (BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are closely related alphaherpesviruses. BoHV-5 causes non-suppurative meningoencephalitis in calves. BoHV-1 is associated with several syndromes and, occasionally, can cause encephalitis. Although both viruses are neurotropic and they share similar biological properties, it is unknown why these alphaherpesviruses differ in their ability to cause neurological disease. Neural tissue samples were collected from BoHV-1- and BoHV-5-intranasally inoculated calves during acute infection, latency and reactivation and the levels of cyclins mRNA expression were analyzed by qRT-PCR. Striking differences in the levels of cyclins mRNA were particularly detected in trigeminal ganglion (TG). The expression levels of cyclins in TG during BoHV-5 latency suggest that these viruses utilize different strategies to persist in the host. It is apparent that a relationship between virus loads and cyclin mRNA levels can be established only during acute infection and other factors might be involved in the regulation of cell cycle components during BoHV latency and reactivation. Bovine alphaherpesviruses neuropathogenicity might be influenced by the differential control of cell cycle components by these herpesviruses. This is the first report on BoHV-5 modulation of cyclins expression in neural tissues from its natural host.Fil: Marin, Maia Solange. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Burucúa, Mercedes María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Rensetti, Daniel Ernesto. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Rosales Hurtado, Juan José. Ministerio de Ciencia, Tecnología e Innovación Productiva. Agencia Nacional de Promoción Científica y Tecnológica. Fondo para la Investigación Científica y Tecnológica; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Pérez, Sandra. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Apoptosis and host-defense peptide cathelicidins determine different outcomes of bovine Alpha-herpesviruses neuropathogenesis

Alpha-herpesvirusesare closely related virusesthat cause neuro¬logical disease in humans and cattle. Bovine herpesvirus (BoHV) type 5 is an important cause of encephalitis in cattle. How-ever, encephalitis by BoHV-1 occurs occasionally. It is unknown how the innate immune re-sponse contri¬butes to their differences inneuro¬patho¬genesis. BoHV-5 spe¬ci¬fically induced the ex¬pression of Toll-like receptors (TLRs) in bovine neural inflamed tissue (Marin et al., 2014). Antimicrobial cathelicidin peptides modulateTLR4 expression in epithelial cells although their function in the nervous system remains elusive. These innate factors together with specific BoHV-apoptotic potential could be determinant in the neuropathogenesis as they could promote or limit the inflammatory response. In this study, we determined apoptosis and the expression of cathelicidins in thebovine nervous system during BoHV-1 and 5acute infections. Calves were inoculated with BoHV-1 Cooper or BoHV-5 97/613 strains (106.3 TCID50) or inert culture medium (control). At 6 days post-infection (dpi), different regions of central nervous system (CNS) and trigeminal ganglion (TG)were collected for immunocytochemical detection of cleaved caspase 3 and messenger gene determination of bovine cathelicidins BMAP27 and BMAP28 (RT-qPCR). At 6 dpi, caspase 3-apoptotic neurons were detected in the TG of BoHV-1-infected calves, whereas fewer numbers of caspase 3 positive neurons were observed in BoHV-5-infected calves. Cathelicidins expression was up- and down-regulated in CNS from BoHV-1- and BoHV-5-infected calves, respectively. BMAP27 was noticeably up-regulated in TG from BoHV-1-infected calves, while BMAP28 was only detected in BoHV-5-infected calves. Our find-ings suggest that modulation of apoptosis and cathelicidin expression orchestrate the final inflammatory outcomes of alpha-herpesviruses infection of the nervous system. Inhibition of both factorsmight be responsible for neurological lesionsin BoHV-5 infection. Further research will be required to determine the role of cathelicidins during infectious diseases of the CNS.Fil: Marin, Maia Solange. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Burucúa, Mercedes María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Rensetti, Daniel Ernesto. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Área de Investigación en Producción y Sanidad Animal; ArgentinaFil: Cobo, E.. University of Calgary; CanadáFil: Quintana, Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Perez, Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentina26th Biennial Meeting of the International Society for Neurochemistry and the European Society for NeurochemistryParísFranciaInternational Society for NeurochemistryEuropean Society for Neurochemistr

Differential involvement of rat sperm choline glycerophospholipids and sphingomyelin in capacitation and the acrosomal reaction

Rat spermatozoa main lipid classes and their fatty acids were studied to assess their possible changes in capacitation and the acrosomal reaction (AR), induced in vitro . Capacitation-associated protein tyrosine phosphorylation, and the ef fl ux of 30% of the total cholesterol from gametes to the medium, took place concomitantly with the release of a similar percentage, i.e. , a larger amount, of the total phospholipid, mostly after hydrolysis of the major choline glycerophospholipids (CGP). Main medium lipid metabolites after capacitation were lyso-CGP and polyenoic fatty acids typical of CGP (22:4n-9, 22:5n-6), as free fatty acids (FFA). The AR, induced by a calcium ionophore, resulted in further phospholipid loss, but the produced metabolites remained in the gametes. CGP decrease in AR accounted for some additional FFA and lyso-CGP, but mostly for (22:5n-6-rich) diglycerides. Hydrolysis of sphingomyelins (SM) to ceramides also occurred, mostly affecting species with very long chain polyenoic fatty acids. Quantitatively, CGP and SM were the lipid classes decreasing the most after capacitation and AR, respectively. The massive cholesterol and phospholipid loss from the gametes during capacitation is thus associated with protein phosphorylation, a function that has been located to the sperm tail. The lipid metabolites produced during AR, by accumulating in the gamete heads, could be implicated in sperm e oocyte interactions.Fil: Zanetti, Samanta Romina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; ArgentinaFil: Monclus, Maria de Los Angeles. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Cienicas Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; ArgentinaFil: Rensetti, Daniel Ernesto. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Cienicas Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; ArgentinaFil: Fornes, Miguel Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mendoza. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos. Universidad Nacional de Cuyo. Facultad de Cienicas Médicas. Instituto de Histología y Embriología de Mendoza Dr. Mario H. Burgos; ArgentinaFil: Aveldaño, Marta Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca. Universidad Nacional del Sur. Instituto de Investigaciones Bioquímicas de Bahía Blanca; Argentin

Partial molecular characterization of different proviral strains of bovine leukemia virus

Bovine leukemia virus (BLV)-infected cattle were classified by their proviral load into low and high proviral load profiles (LPL and HPL, respectively). Blood from these animals was used to infect sheep to obtain multiple identical copies of integrated provirus. An env fragment of BLV was amplified from all infected sheep and sequenced. The sequences that were obtained were compared to already published BLV genome sequence, resulting in three clusters. Mutations could not be attributed to the passage of provirus from cattle to sheep and subsequent amplification and sequencing. The description of two different proviral load profiles, the association of the BoLA-DRB3.2 0902 allele with the LPL profile, the availability of complete BLV sequences, and the comparison of a variable region of the env gene from carefully characterized cattle are still not enough to explain the presence of animals in every herd that are resistant to BLV dissemination

Involvement of toll-like receptors 3 and 7/8 in the neuropathogenesis of bovine herpesvirus types 1 and 5

Bovine herpesvirus types 1 (BoHV-1) and 5 (BoHV-5) are closely related alpha-herpesviruses. BoHV-5 is the causal agent of non-suppurative meningoencephalitis in calves. BoHV-1 causes respiratory disease, abortions, genital disorders and, occasionally, encephalitis in cattle. Both viruses are neurotropic and they share similar biological properties. Nevertheless, they differ in their ability to cause neurological disease. Toll-like receptors (TLRs) are involved in the innate immune response to pathogens. In this study, the variations in the expression levels of TLRs were evaluated in different regions of the bovine central nervous system during the acute infection and reactivation of BoHV-1 and BoHV-5- infected cattle. With the exception of TLR9, significant up-regulation of all TLRs was detected following primary infection of neural tissues by both bovine alpha-herpesviruses. Furthermore, the stages of acute infection and reactivation were characterized by a distinguishable TLR expression pattern. Important differences in TLR expression upon infection of the central nervous system by BoHV-1 or BoHV-5 were not detected. The striking differences in TLR mRNA levels during acute infection and reactivation provide evidence that the innate immune response may be involved in the clinical outcomes observed at each stage. Further research is required to analyze the mechanisms that initiate TLR activation and the signaling cascade mediated by each TLR to elucidate the precise role these receptors play in bovine herpesvirus encephalitis.EEA BalcarceFil: Rensetti, Daniel Ernesto. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Marin, Maia Solange. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Quintana, Silvina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto de Análisis Fares Taie; ArgentinaFil: Morán, Pedro Edgardo. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Verna, Andrea Elizabeth. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Perez, Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; Argentin

Expresión diferencial de las ciclinas A y E en ganglio trigémino de bovinos infectados con herpesvirus bovino 1 y 5

Muchos virus interactúan con moléculas del hospedador para regular la progresión del ciclo celular y facilitar su propia replicación. Los virus de ADN, como los herpesvirus, generalmente inducen el arresto del ciclo celular en la fase G0/G1 para evitar la competencia por los recursos necesarios para la replicación del ADN celular. La ciclina E corresponde a la fase G1 y es necesaria para el ingreso a la fase S y la progresión del ciclo celular. La ciclina A también es necesaria para la progresión del ciclo aunque alcanza su concentración máxima más tardíamente y reemplaza a la ciclina E. Aunque existen algunos estudios acerca de la regulación del ciclo celular por el herpesvirus bovino (BoHV) tipo 1, se desconoce si el BoHV-5 modula la expresión de las ciclinas celulares durante su ciclo infeccioso. El objetivo de este estudio fue determinar y comparar los niveles de expresión de la ciclina A2 y E en el ganglio trigémino (GT) de terneros experimentalmente infectados con BoHV-1 o 5 durante la infección aguda (6 días post infección [dpi]), latencia (21 dpi) y luego de la administración de dexametasona (reactivación, 25 dpi). Se utilizaron 2 animales infectados con BoHV-1 o 5 durante cada etapa del ciclo infeccioso y 2 animales se utilizaron como control. Se extrajo el ARN de GT, se generó el cDNA y se efectuaron reacciones de Real Time RT-PCR para la medición de los niveles de expresión génica. Los niveles relativos de expresión y las diferencias significativas (P <0,05) fueron analizados mediante el software REST, utilizando el gen GAPDH como control. Durante la infección aguda, los niveles de ARNm de las ciclinas A2 y E en GT de bovinos infectados con BoHV-1 o 5 fueron significativamente mayores que en los animales sin infectar, determinándose para BoHV-1 el mayor cambio en la expresión. Los niveles de expresión de las ciclinas A2 y E para BoHV-1 fueron 350 y 2,6 veces mayores, respectivamente, que para BoHV-5. Durante la latencia, se observó un aumento significativo en la expresión de ciclina A2 en GT de los animales infectados con BoHV-5 (310 veces superior a los valores hallados para BoHV-1). En forma similar, un incremento significativo en los niveles de ciclina E se detectaron durante la latencia de BoHV-5 (30 veces superior a los valores detectados en GT de animales latentemente infectados con BoHV-1). Durante la reactivación, se detectó la expresión de ambas ciclinas en GT de los animales infectados con BoHV-1 o 5, mostrando un incremento con respecto al control, en el cual no se detectó y por lo tanto los valores relativos de expresión no pudieron ser cuantificados. Los resultados de este estudio demuestran que existen diferencias marcadas en los niveles de expresión de ciclina A2 y E en GT durante la infección aguda y la latencia de BoHV-1 y BoHV-5, indicando que aunque ambos virus están estrechamente relacionados tienen distintos mecanismos para manipular el ciclo celular, siendo este hecho más evidente durante el estadio de latencia.Fil: Marin, Maia Solange. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Rensetti, Daniel Ernesto. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Burucúa, Mercedes María. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Mar del Plata. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible - Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce. Instituto de Innovación para la Producción Agropecuaria y el Desarrollo Sostenible; ArgentinaFil: Morán, Pedro Edgardo. Universidad Nacional de La Plata. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Odeón, Anselmo Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Verna, Andrea Elizabeth. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Perez, Sandra. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaXII Congreso Argentino de VirologíaBuenos AiresArgentinaAsociación Argentina de MicrobiologíaSociedad Argentina de Virologí