Engineering NK-CAR.19 cells with the IL-15/IL-15Rα complex improved proliferation and anti-tumor effect in vivo

IntroductionNatural killer 92 (NK-92) cells are an attractive therapeutic approach as alternative chimeric antigen receptor (CAR) carriers, different from T cells, once they can be used in the allogeneic setting. The modest in vivo outcomes observed with NK-92 cells continue to present hurdles in successfully translating NK-92 cell therapies into clinical applications. Adoptive transfer of CAR-NK-92 cells holds out the promise of therapeutic benefit at a lower rate of adverse events due to the absence of GvHD and cytokine release syndrome. However, it has not achieved breakthrough clinical results yet, and further improvement of CAR-NK-92 cells is necessary.MethodsIn this study, we conducted a comparative analysis between CD19-targeted CAR (CAR.19) co-expressing IL-15 (CAR.19-IL15) with IL-15/IL-15Rα (CAR.19-IL15/IL15Rα) to promote NK cell proliferation, activation, and cytotoxic activity against B-cell leukemia. CAR constructs were cloned into lentiviral vector and transduced into NK-92 cell line. Potency of CAR-NK cells were assessed against CD19-expressing cell lines NALM-6 or Raji in vitro and in vivo in a murine model. Tumor burden was measured by bioluminescence.ResultsWe demonstrated that a fourth- generation CD19-targeted CAR (CAR.19) co-expressing IL-15 linked to its receptor IL-15/IL-15Rα (CAR.19-IL-15/IL-15Rα) significantly enhanced NK-92 cell proliferation, proinflammatory cytokine secretion, and cytotoxic activity against B-cell cancer cell lines in vitro and in a xenograft mouse model.ConclusionTogether with the results of the systematic analysis of the transcriptome of activated NK-92 CAR variants, this supports the notion that IL-15/IL-15Rα comprising fourth-generation CARs may overcome the limitations of NK-92 cell-based targeted tumor therapies in vivo by providing the necessary growth and activation signals

Generation of anti-CD19 CAR-NK cells as an allogeneic alternative for B-cell neoplasia treatment

Recentemente, a terapia de neoplasias hematológicas foi revolucionada pelo uso de células T autólogas que expressam receptores quiméricos de antígenos (CAR). Apesar desse sucesso, existem inúmeras vantagens para explorar também células CAR alogênicas, como as CAR-Natural Killer (NK-CAR). A capacidade de direcionar a citotoxicidade contra tumores refratários por meio da expressão de CAR em NK provavelmente contribuirá para uma mudança de paradigma no tratamento do câncer. Nossa hipótese é que novos construtos CAR que modulam as vias de IL-15 ou IL-27 podem promover aumentos significativos na proliferação, ativação e atividade citotóxica de células NK. Células NK de diferentes fontes (linhagem NK-92, sangue periférico e de cordão) foram modificadas geneticamente e analisadas por citometria de fluxo, por meio da marcação da região fab´ de CAR. As células NK-92 transduzidas foram selecionadas positivamente por coluna magnética. Células NK-CAR tiveram sua citotoxicidade avaliada por três metodologias: citometria de fluxo, Delfia Europium e Incucyte System. A eficiência in vivo das células NK-CAR foi avaliada em modelos murinos de neoplasia de células B, pela medição da carga tumoral por bioluminescência e curva de sobrevida. Inicialmente, exploramos o potencial dos promotores EF1&alpha; e SFFV para conduzir a expressão de CAR. O promotor SFFV produziu altos títulos lentivirais e alcançou a melhor eficácia de transdução em células NK. No vetor SEW-SFFV-CAR.19, clonamos as citocinas IL-15, IL-15/IL-15R&alpha; e IL-27. Células NK de diferentes fontes foram então modificadas com estes vetores e a porcentagem de NK-CAR foi mensurada por citometria de fluxo. Nossos resultados demonstraram uma baixa porcentagem de células expressando SEW-SFFV-CAR.19 (10,7%±1,93), SEW-SFFV-CAR.19-IL-15 (5,8%±3), SEW-SFFV-CAR.19-IL-15/IL-15R&alpha; (3,7%±1,1) e SEW-SFFV-CAR.19-IL-27 (3,2%±0,6) em células NK-92. As células NK-92-CAR foram selecionadas com anticorpo anti-CAR, o que proporcionou um aumento na pureza de células NK-CAR (>98% CAR+). Posteriormente, células NK-CAR foram co-cultivadas com células tumorais que expressavam CD19 ou não. O ensaio de citotoxicidade mostrou que células NK-92-CAR.19 (todos os constructos) foram mais citotóxicas contra células CD19+ quando comparadas com NK-92 wt (p98% CAR+). Subsequently, CAR-NK cells were co-cultured with tumor cells expressing CD19 or not. Cytotoxicity assay showed that CAR-NK-92 (all constructs) were more cytotoxic against CD19+ cells when compared with NK-92 wt (p<0.05). Peripheral blood NK cells (NK-PB) and cord blood NK cells (NK-CB) showed transduction efficiency rates of 26,72% and 54,5%, respectively, however this expression was not stable. Nevertheless, cytotoxic assays showed that NK-PB-SFFV-CAR.19 and NK-CB-SFFV-CAR.19 cells were more cytotoxic against tumor cells expressing CD19 than non-transduced NK cells (p<0.05). In the evaluation of CAR.19-NK-92 cells antitumoral efficacy in vivo, there was no significant decrease in tumor burden between the control and treatment groups until day 14, but on day 21 there was a decrease in tumor burden in the group treated with NK-92-SFFV-CAR.19-IL-15/IL-15R&alpha; (p<0.05), which also showed a longer survival rate (p<0.05). In conclusion, our data showed that it is possible to generate CAR modified NK cells with a potent and selective antitumoral activity, but some readjustments in the animal model are required. In summary, this research project took the initial step towards the generation and production of CAR-NK in Brazil. The results of this project represent the beginning of the development of a CAR-NK cells off-theshelf platform, which might soon be used in allogeneic cancer immunotherapy

Evaluation of the microRNAs 184, -190a-5p and -493-3p expression and its correlation with epileptic crises control in Mesial Temporal Lobe Epilepsy operated patients

Introdução: A epilepsia pode ser considerada uma desordem neurológica causada pela anormalidade da transmissão de impulsos nervosos, devido ao aumento da excitação nervosa e/ou diminuição da sua inibição. Dentre as síndromes epilépticas, destaca-se a Epilepsia do Lobo Temporal Mesial (ELTM) devido a sua alta prevalência e refratariedade ao tratamento medicamentoso. Com intuito de implementar novas possibilidades de tratamento torna-se necessário uma maior compreensão das bases moleculares da ELTM. Dentro desta perspectiva, destacam-se os microRNAs, que possuem papel regulatório nas células, inclusive as do Sistema Nervoso Central. Com base em dados da literatura e num experimento de microarray, realizado no laboratório de Biologia Molecular do Departamento de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, foram escolhidos 3 dos 10 microRNAs, cujos alvos preditos estão relacionados à epileptogênese e que se apresentam diferencialmente expressos em hipocampos de pacientes com ELTM. Objetivos: avaliar a expressão diferencial de três microRNAs de interesse em hipocampos de pacientes operados por ELTM refratária ao tratamento clínico a fim de correlacionar os resultados em relação aos controles das crises epilépticas após a cirurgia. Metodologia: Foram utilizadas 15 amostras de hipocampo de pacientes com ELTM classificados como Engel I (boa evolução - nenhuma ou poucas crises convulsivas após lobectomia temporal parcial) e 15 amostras de hipocampos de pacientes classificados como Engel III/IV (má evolução - sem melhora evidente após tratamento cirúrgico). Como controles, foram utilizadas 10 amostras de hipocampo de pacientes sem doenças neurológicas, obtidas de necropsias do Serviço de Patologia do Hospital das Clínicas de Ribeirão Preto (HCFMRP). Por meio de técnica de PCR quantitativo em tempo real (RT-qPCR) foram realizadas as avaliações das expressões diferenciais dos seguintes microRNAs: miR-184, miR-190a-5p e miR-493-3p. Resultados: Em relação aos controles, o miR-184 e o miR190a-5p apresentaram-se, respectivamente, com redução significativa (p = 0,001) e com tendência a baixa expressão (p = 0,24) nos hipocampos de pacientes com ELTM. No que se refere ao controle das crises, o miR-184 apresentou-se significativamente mais expresso nos hipocampos de pacientes com pior evolução (Engel III/IV vs Engel I, p = 0,003). A expressão do miR-493-3p não se correlacionou com o controle de crises com significância estatística. Conclusão: Dentro os microRNAs avaliados, a expressão do miR-184, que possui importante papel na regulação de componentes celulares relacionados a apoptose e morte celular, correlacionou-se inversamente com o controle das crises após cirurgia (mais expresso em pacientes com má evolução) tornando-se potencial biomarcador e com valor preditivoIntroduction: Epilepsy is a neurological disorder caused by nerve impulse transmission abnormalities, by increasing nerve excitation and/or decreasing nerve inhibition. Among the epileptic syndromes, one of the most important ones is Mesial Temporal Lobe Epilepsy (MTLE) due to its high prevalence and resistance to drug treatment. A greater understanding of the epilepsy molecular basis is necessary aiming to implement new treatments possibilities. Within this field of study, it is possible to highlight the microRNA molecules, which have a regulatory role in cell regulation including in the Central Nervous System (CNS). Based on literature data and in an microarray experiment, performed in the Anatomy and Surgery Departament Molecular Biology laboratory of the Ribeirao Preto Medical School, we have chosen three out of ten microRNAs, with predicted targets related to epileptogenesis and that presented themselves differencially expressed in patients hippocampus with MTLE. Objective: To evaluate three microRNAs of interest which were differentially expressed in the hippocampus of MTLE drug-resistant operated patients in order to correlate the results with the clinical evolution based on the seizures control after surgery. Methodology: Fifteen hippocampus samples from patients with MTLE classified as Engel I (good evolution - without seizures or few seizures after surgical resection) and 15 samples from patients classified as Engel III/IV (bad evolution - no evident improvement after surgery) were used in this study. In the control group, we used ten samples of hippocampus fragments from patients without neurological diseases, that were obtained from the Ribeirao Preto Clinical Hospital Pathology and Legal Medicine Service. The differential expression validation from microRNAs-184, -190a-5p and -493-3p were performed by quantitative real time PCR (RT-qPCR) technique. Results: Regarding the controls, miR-184 and miR- 190a-5p showed, respectively, a significant expression reduction (p=0,001) and a decreased expression tendency (p=0,24) in MTLE patients. If we consider seizure control, miR-184 presented itself significantly upregulated in bad evolution hippocampus patients (Engel III/IV vs Engel I, p=0,003). miR-493-3p did not show expression differences with statistical significance. Conclusions: After evaluating the expression of these microRNAs, it was possible to conclude that microRNA-184, which regulates cellular death and apoptosis related components, was the best molecule that could differentiate the patients regarding seizure control after surgery, and that fact makes this microRNA a potential biomarker with predictive valu

Biology and oncogenicity of the Kaposi sarcoma herpesvirus K1 protein

The Kaposi sarcoma-associated herpesvirus (KSHV), or human herpesvirus 8, is a gammaherpesvirus etiologically linked to the development of Kaposi sarcoma, primary effusion lymphomas, and multicentric Castleman disease in humans. KSHV is unique among other human herpesviruses because of the elevated number of viral products that mimic human cellular proteins, such as a viral cyclin, a viral G protein-coupled receptor, anti-apoptotic proteins (e.g. v-bcl2 and v-FLIP), viral interferon regulatory factors, and CC chemokine viral homologues. Several KSHV products have oncogenic properties, including the transmembrane K1 glycoprotein. KSHV K1 is encoded in the viral ORFK1, which is the most variable portion of the viral genome, commonly used to discriminate among viral genotypes. The extracellular region of K1 has homology with the light chain of lambda immunoglobulin, and its cytoplasmic region contains an immunoreceptor tyrosine-based activation motif (ITAM). KSHV K1 ITAM activates several intracellular signaling pathways, notably PI3K/AKT. Consequently, K1 expression inhibits proapoptotic proteins and increases the life-span of KSHV-infected cells. Another remarkable effect of K1 activity is the production of inflammatory cytokines and proangiogenic factors, such as vascular endothelial growth factor. KSHV K1 immortalizes primary human endothelial cells and transforms rodent fibroblasts in vitro; moreover, K1 induces tumors in vivo in transgenic mice expressing this viral protein. This review aims to consolidate and discuss the current knowledge on this intriguing KSHV protein, focusing on activities of K1 that can contribute to the pathogenesis of KSHV-associated human cancers. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd

Extracellular Vesicles and Matrix Remodeling Enzymes: The Emerging Roles in Extracellular Matrix Remodeling, Progression of Diseases and Tissue Repair

Extracellular vesicles (EVs) are membrane enclosed micro- and nano-sized vesicles that are secreted from almost every species, ranging from prokaryotes to eukaryotes, and from almost every cell type studied so far. EVs contain repertoire of bioactive molecules such as proteins (including enzymes and transcriptional factors), lipids, carbohydrates and nucleic acids including DNA, coding and non-coding RNAs. The secreted EVs are taken up by neighboring cells where they release their content in recipient cells, or can sail through body fluids to reach distant organs. Since EVs transport bioactive cargo between cells, they have emerged as novel mediators of extra- and intercellular activities in local microenvironment and inter-organ communications distantly. Herein, we review the activities of EV-associated matrix-remodeling enzymes such as matrix metalloproteinases, heparanases, hyaluronidases, aggrecanases, and their regulators such as extracellular matrix metalloproteinase inducers and tissue inhibitors of metalloproteinases as novel means of matrix remodeling in physiological and pathological conditions. We discuss how such EVs act as novel mediators of extracellular matrix degradation to prepare a permissive environment for various pathological conditions such as cancer, cardiovascular diseases, arthritis and metabolic diseases. Additionally, the roles of EV-mediated matrix remodeling in tissue repair and their potential applications as organ therapies have been reviewed. Collectively, this knowledge could benefit the development of new approaches for tissue engineering

DOCTORES DE LA RISA: LA RESPONSABILIDAD SOCIAL EN LA PROMOCIÓN DE LA SALUD PÚBLICA

A complexidade da demanda de assistência à saúde populacional tem aumentado à medida que a competência tecno-científica deixou de ser suficiente para suprir as necessidades plurais dentro de uma comunidade estratificada sócio-economicamente. As características particularizadas de cada paciente e a relação destas com outros seres individuais geram uma unidade social heterogênea cujos valores éticos e culturais exigem a elaboração de estratégias específicas para um atendimento eficaz a cada personalidade. Dessa forma, à consideração dos fatores psicossociais somados ao biológico denominou-se Humanização da Assistência à Saúde. O projeto de extensão Médicos da Alegria visa promover a aplicação, pesquisa e conscientização a respeito da Humanização da Assistência à Saúde – mais especificamente na área psicossocial da saúde em complemento ao tratamento biológico oferecido no Hospital das Clínicas de Botucatu, UNESP4 1 Discente do curso de Medicina pela Faculdade de Medicina de Botucatu – Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” – considerando a influência e subsequente responsabilidade do agir de uma pessoa sobre o bem-estar de seus próximos. Promovido por mais de 120 acadêmicos de áreas biológicas do campus – entre bacharelandos e pós-graduandos –, o projeto atinge diretamente um número significativo de mais de 2100 pacientes anualmente: 1200 crianças da Ala Pediátrica somados a 300 crianças e 600 adultos na Quimioterapia. Além disso, familiares, cuidadores e equipe de saúde também são atendidos direta e indiretamente pelos “médicos-palhaços”, o que pode estender o processo de benefício a mais outras 1000 pessoas. Atualmente, também conta com dois projetos científicos para estudar a eficácia e efeitos do projeto sobre seus executores e pacientes: o primeiro descreve qualitativamente o perfil dos integrantes do projeto e a influência do projeto sobre suas escolhas profissionais; o segundo visa analisar as alterações nos níveis de estresse das crianças atendidas pelo projeto através da quantificação de cortisol salivar antes e após a atuação dos “médicos-palhaços”. Assim, este relato de experiência traz à questão possíveis benefícios da aplicação deste conceito através da atuação lúdica com clowns de graduandos de Medicina, Enfermagem, Biomedicina, Nutrição, Física Médica, Medicina Veterinária, Zootecnia, Engenharia Florestal e Agronomia – alguns não relacionados à área de saúde, mas todos primordialmente promotores de bem-estar social – sobre ambientes ambulatoriais humanos.Complexity over population health care demands has been rising since techno-scientific skills are not enough anymore to supply plural needs into a socio-economically stratified community. Singular characteristics from each patient and their relation with other individuals create a single heterogenic society whose ethic and cultural values call for creation of specific strategies in order to achieve an efficient treatment for each personality. Hence, psychosocial consideration added to the biological concern is called Health Care Humanization. Happiness’ Doctors extension project aims at promoting practice, research and consciousness about Health Care Humanization – more specifically into psychosocial area as a complement to biological treatment offered at Botucatu’s Clinic Hospital, UNESP – considering the influence and subsequent responsibility of one person’s acts over their neighbor’s welfare. Implemented by over 120 scholars from biological areas on the campus - among undergraduates and graduate students – the project directly affects a significant number of over 2100 patients annually: 1200 children in the Pediatric Ward added to 300 children and 600 adults in Chemotherapy. In addition, family members, caregivers and health professionals are also served directly and indirectly by the "clown-doctors", which can extend the process of benefit to 1000 more people. Currently, there are also two scientific projects to study the effectiveness and effects of the project on his executioners and patients: the first describes the qualitative profile of the members of the project and the project's influence on their career choices, the second analyzes the changes in the levels of stress of children served by the project through the quantification of salivary cortisol before and after the "clown-doctors" action. Thus, this experience essay brings to the question possible benefits of using this concept through playful clowning of Medicine, Nursing, Biomedicine, Nutrition, Medical Physics, Veterinarian Medicine, Zootechny, Forest Engineering and Agronomy undergraduates – some are not related to health care, but all of them are more than anything social wellbeing driving forces – on human ambulatory environment.La complejidad de la demanda de asistencia a la salud de la población ha aumentado a medida que la competencia técnico-científica ha dejado de ser suficiente para atender las necesidades plurales dentro de una comunidad socioeconómicamente estratificada. Las características particularizadas de cada paciente y la relación de estas con otros seres individuales generan una unidad social heterogénea cuyos valores éticos y culturales exigen la elaboración de estrategias específicas para una atención eficaz a cada personalidad. De esa forma, a la consideración de los factores psicosociales sumados a los biológicos se la ha denominado Humanización de la Asistencia a la Salud. El proyecto de extensión Doctores de la Risa procura promover la aplicación, investigación y concientización a respecto de la Humanización de la Asistencia a la Salud – específicamente en el área psicosocial de la salud en complemento al tratamiento biológico ofrecido en el Hospital de Clínicas de Botucatu, UNESP5 – considerando la influencia y la subsecuente responsabilidad del actuar de una persona sobre el bien estar de sus prójimos. Implementado por más de 120 estudiosos de las áreas biológicas en el campus - entre los estudiantes de grado y estudiantes de posgrado - el proyecto afecta directamente a un número significativo de más de 2100 pacientes al año: 1200 niños en la sala de pediatría agregó a 300 niños y 600 adultos en la quimioterapia. Además, miembros de la familia, cuidadores y profesionales de la salud también se sirven directamente e indirectamente por el "payaso-médicos", que puede extender el proceso de beneficio a otras 1000 personas más. En la actualidad, también existen dos proyectos científicos para estudiar la eficacia y los efectos del proyecto en sus ejecutores y los pacientes: la primera se describe el perfil cualitativo de los miembros del proyecto y la influencia del proyecto en sus opciones de carrera, el segundo consiste en analizar las modificaciones en los niveles de estrés de los niños atendidos por el proyecto através de la cuantificación de cortisol salival antes y después de la acción de "payaso-médicos". Así, este relato de experiencia hace que se cuestionen los beneficios de la aplicación de este concepto a través de la actuación lúdica con payasos de graduandos de Medicina, Enfermería, Biomedicina, Nutrición, Física Médica, Medicina Veterinaria, Zootecnia, Ingeniería Forestal y Agronomía – algunos no relacionados al área de salud, pero todos primordialmente promotores de bien estar social – sobre ambientes ambulatorios humanos

Médicos da Alegria: a responsabilidade social na promoção da saúde pública

Complexity over population health care demands has been rising since techno-scientific skills are not enough anymore to supply plural needs into a socio-economically stratified community. Singular characteristics from each patient and their relation with other individuals create a single heterogenic society whose ethic and cultural values call for creation of specific strategies in order to achieve an efficient treatment for each personality. Hence, psychosocial consideration added to the biological concern is called Health Care Humanization. Happiness’ Doctors extension project aims at promoting practice, research and consciousness about Health Care Humanization – more specifically into psychosocial area as a complement to biological treatment offered at Botucatu’s Clinic Hospital, UNESP – considering the influence and subsequent responsibility of one person’s acts over their neighbor’s welfare. Implemented by over 120 scholars from biological areas on the campus - among undergraduates and graduate students – the project directly affects a significant number of over 2100 patients annually: 1200 children in the Pediatric Ward added to 300 children and 600 adults in Chemotherapy. In addition, family members, caregivers and health professionals are also served directly and indirectly by the "clown-doctors", which can extend the process of benefit to 1000 more people. Currently, there are also two scientific projects to study the effectiveness and effects of the project on his executioners and patients: the first describes the qualitative profile of the members of the project and the project's influence on their career choices, the second analyzes the changes in the levels of stress of children served by the project through the quantification of salivary cortisol before and after the "clown-doctors" action. Thus, this experience essay brings to the question possible benefits of using this concept through playful clowning of Medicine, Nursing, Biomedicine, Nutrition, Medical Physics, Veterinarian Medicine, Zootechny, Forest Engineering and Agronomy undergraduates – some are not related to health care, but all of them are more than anything social wellbeing driving forces – on human ambulatory environment.La complejidad de la demanda de asistencia a la salud de la población ha aumentado a medida que la competencia técnico-científica ha dejado de ser suficiente para atender las necesidades plurales dentro de una comunidad socioeconómicamente estratificada. Las características particularizadas de cada paciente y la relación de estas con otros seres individuales generan una unidad social heterogénea cuyos valores éticos y culturales exigen la elaboración de estrategias específicas para una atención eficaz a cada personalidad. De esa forma, a la consideración de los factores psicosociales sumados a los biológicos se la ha denominado Humanización de la Asistencia a la Salud. El proyecto de extensión Doctores de la Risa procura promover la aplicación, investigación y concientización a respecto de la Humanización de la Asistencia a la Salud – específicamente en el área psicosocial de la salud en complemento al tratamiento biológico ofrecido en el Hospital de Clínicas de Botucatu, UNESP5 – considerando la influencia y la subsecuente responsabilidad del actuar de una persona sobre el bien estar de sus prójimos. Implementado por más de 120 estudiosos de las áreas biológicas en el campus - entre los estudiantes de grado y estudiantes de posgrado - el proyecto afecta directamente a un número significativo de más de 2100 pacientes al año: 1200 niños en la sala de pediatría agregó a 300 niños y 600 adultos en la quimioterapia. Además, miembros de la familia, cuidadores y profesionales de la salud también se sirven directamente e indirectamente por el "payaso-médicos", que puede extender el proceso de beneficio a otras 1000 personas más. En la actualidad, también existen dos proyectos científicos para estudiar la eficacia y los efectos del proyecto en sus ejecutores y los pacientes: la primera se describe el perfil cualitativo de los miembros del proyecto y la influencia del proyecto en sus opciones de carrera, el segundo consiste en analizar las modificaciones en los niveles de estrés de los niños atendidos por el proyecto através de la cuantificación de cortisol salival antes y después de la acción de "payaso-médicos". Así, este relato de experiencia hace que se cuestionen los beneficios de la aplicación de este concepto a través de la actuación lúdica con payasos de graduandos de Medicina, Enfermería, Biomedicina, Nutrición, Física Médica, Medicina Veterinaria, Zootecnia, Ingeniería Forestal y Agronomía – algunos no relacionados al área de salud, pero todos primordialmente promotores de bien estar social – sobre ambientes ambulatorios humanos.A complexidade da demanda de assistência à saúde populacional tem aumentado à medida que a competência tecno-científica deixou de ser suficiente para suprir as necessidades plurais dentro de uma comunidade estratificada sócio-economicamente. As características particularizadas de cada paciente e a relação destas com outros seres individuais geram uma unidade social heterogênea cujos valores éticos e culturais exigem a elaboração de estratégias específicas para um atendimento eficaz a cada personalidade. Dessa forma, à consideração dos fatores psicossociais somados ao biológico denominou-se Humanização da Assistência à Saúde. O projeto de extensão Médicos da Alegria visa promover a aplicação, pesquisa e conscientização a respeito da Humanização da Assistência à Saúde – mais especificamente na área psicossocial da saúde em complemento ao tratamento biológico oferecido no Hospital das Clínicas de Botucatu, UNESP - considerando a influência e subsequente responsabilidade do agir de uma pessoa sobre o bem-estar de seus próximos. Promovido por mais de 120 acadêmicos de áreas biológicas do campus – entre bacharelandos e pós-graduandos –, o projeto atinge diretamente um número significativo de mais de 2100 pacientes anualmente: 1200 crianças da Ala Pediátrica somados a 300 crianças e 600 adultos na Quimioterapia. Além disso, familiares, cuidadores e equipe de saúde também são atendidos direta e indiretamente pelos “médicos-palhaços”, o que pode estender o processo de benefício a mais outras 1000 pessoas. Atualmente, também conta com dois projetos científicos para estudar a eficácia e efeitos do projeto sobre seus executores e pacientes: o primeiro descreve qualitativamente o perfil dos integrantes do projeto e a influência do projeto sobre suas escolhas profissionais; o segundo visa analisar as alterações nos níveis de estresse das crianças atendidas pelo projeto através da quantificação de cortisol salivar antes e após a atuação dos “médicos-palhaços”. Assim, este relato de experiência traz à questão possíveis benefícios da aplicação deste conceito através da atuação lúdica com clowns de graduandos de Medicina, Enfermagem, Biomedicina, Nutrição, Física Médica, Medicina Veterinária, Zootecnia, Engenhari

DOCTORES DE LA RISA: LA RESPONSABILIDAD SOCIAL EN LA PROMOCIÓN DE LA SALUD PÚBLICA

A complexidade da demanda de assistência à saúde populacional tem aumentado à medida que a competência tecno-científica deixou de ser suficiente para suprir as necessidades plurais dentro de uma comunidade estratificada sócio-economicamente. As características particularizadas de cada paciente e a relação destas com outros seres individuais geram uma unidade social heterogênea cujos valores éticos e culturais exigem a elaboração de estratégias específicas para um atendimento eficaz a cada personalidade. Dessa forma, à consideração dos fatores psicossociais somados ao biológico denominou-se Humanização da Assistência à Saúde. O projeto de extensão Médicos da Alegria visa promover a aplicação, pesquisa e conscientização a respeito da Humanização da Assistência à Saúde – mais especificamente na área psicossocial da saúde em complemento ao tratamento biológico oferecido no Hospital das Clínicas de Botucatu, UNESP4 1 Discente do curso de Medicina pela Faculdade de Medicina de Botucatu – Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” – considerando a influência e subsequente responsabilidade do agir de uma pessoa sobre o bem-estar de seus próximos. Promovido por mais de 120 acadêmicos de áreas biológicas do campus – entre bacharelandos e pós-graduandos –, o projeto atinge diretamente um número significativo de mais de 2100 pacientes anualmente: 1200 crianças da Ala Pediátrica somados a 300 crianças e 600 adultos na Quimioterapia. Além disso, familiares, cuidadores e equipe de saúde também são atendidos direta e indiretamente pelos “médicos-palhaços”, o que pode estender o processo de benefício a mais outras 1000 pessoas. Atualmente, também conta com dois projetos científicos para estudar a eficácia e efeitos do projeto sobre seus executores e pacientes: o primeiro descreve qualitativamente o perfil dos integrantes do projeto e a influência do projeto sobre suas escolhas profissionais; o segundo visa analisar as alterações nos níveis de estresse das crianças atendidas pelo projeto através da quantificação de cortisol salivar antes e após a atuação dos “médicos-palhaços”. Assim, este relato de experiência traz à questão possíveis benefícios da aplicação deste conceito através da atuação lúdica com clowns de graduandos de Medicina, Enfermagem, Biomedicina, Nutrição, Física Médica, Medicina Veterinária, Zootecnia, Engenharia Florestal e Agronomia – alguns não relacionados à área de saúde, mas todos primordialmente promotores de bem-estar social – sobre ambientes ambulatoriais humanos.Complexity over population health care demands has been rising since techno-scientific skills are not enough anymore to supply plural needs into a socio-economically stratified community. Singular characteristics from each patient and their relation with other individuals create a single heterogenic society whose ethic and cultural values call for creation of specific strategies in order to achieve an efficient treatment for each personality. Hence, psychosocial consideration added to the biological concern is called Health Care Humanization. Happiness’ Doctors extension project aims at promoting practice, research and consciousness about Health Care Humanization – more specifically into psychosocial area as a complement to biological treatment offered at Botucatu’s Clinic Hospital, UNESP – considering the influence and subsequent responsibility of one person’s acts over their neighbor’s welfare. Implemented by over 120 scholars from biological areas on the campus - among undergraduates and graduate students – the project directly affects a significant number of over 2100 patients annually: 1200 children in the Pediatric Ward added to 300 children and 600 adults in Chemotherapy. In addition, family members, caregivers and health professionals are also served directly and indirectly by the "clown-doctors", which can extend the process of benefit to 1000 more people. Currently, there are also two scientific projects to study the effectiveness and effects of the project on his executioners and patients: the first describes the qualitative profile of the members of the project and the project's influence on their career choices, the second analyzes the changes in the levels of stress of children served by the project through the quantification of salivary cortisol before and after the "clown-doctors" action. Thus, this experience essay brings to the question possible benefits of using this concept through playful clowning of Medicine, Nursing, Biomedicine, Nutrition, Medical Physics, Veterinarian Medicine, Zootechny, Forest Engineering and Agronomy undergraduates – some are not related to health care, but all of them are more than anything social wellbeing driving forces – on human ambulatory environment.La complejidad de la demanda de asistencia a la salud de la población ha aumentado a medida que la competencia técnico-científica ha dejado de ser suficiente para atender las necesidades plurales dentro de una comunidad socioeconómicamente estratificada. Las características particularizadas de cada paciente y la relación de estas con otros seres individuales generan una unidad social heterogénea cuyos valores éticos y culturales exigen la elaboración de estrategias específicas para una atención eficaz a cada personalidad. De esa forma, a la consideración de los factores psicosociales sumados a los biológicos se la ha denominado Humanización de la Asistencia a la Salud. El proyecto de extensión Doctores de la Risa procura promover la aplicación, investigación y concientización a respecto de la Humanización de la Asistencia a la Salud – específicamente en el área psicosocial de la salud en complemento al tratamiento biológico ofrecido en el Hospital de Clínicas de Botucatu, UNESP5 – considerando la influencia y la subsecuente responsabilidad del actuar de una persona sobre el bien estar de sus prójimos. Implementado por más de 120 estudiosos de las áreas biológicas en el campus - entre los estudiantes de grado y estudiantes de posgrado - el proyecto afecta directamente a un número significativo de más de 2100 pacientes al año: 1200 niños en la sala de pediatría agregó a 300 niños y 600 adultos en la quimioterapia. Además, miembros de la familia, cuidadores y profesionales de la salud también se sirven directamente e indirectamente por el "payaso-médicos", que puede extender el proceso de beneficio a otras 1000 personas más. En la actualidad, también existen dos proyectos científicos para estudiar la eficacia y los efectos del proyecto en sus ejecutores y los pacientes: la primera se describe el perfil cualitativo de los miembros del proyecto y la influencia del proyecto en sus opciones de carrera, el segundo consiste en analizar las modificaciones en los niveles de estrés de los niños atendidos por el proyecto através de la cuantificación de cortisol salival antes y después de la acción de "payaso-médicos". Así, este relato de experiencia hace que se cuestionen los beneficios de la aplicación de este concepto a través de la actuación lúdica con payasos de graduandos de Medicina, Enfermería, Biomedicina, Nutrición, Física Médica, Medicina Veterinaria, Zootecnia, Ingeniería Forestal y Agronomía – algunos no relacionados al área de salud, pero todos primordialmente promotores de bien estar social – sobre ambientes ambulatorios humanos

DataSheet_1_Engineering NK-CAR.19 cells with the IL-15/IL-15Rα complex improved proliferation and anti-tumor effect in vivo.docx

IntroductionNatural killer 92 (NK-92) cells are an attractive therapeutic approach as alternative chimeric antigen receptor (CAR) carriers, different from T cells, once they can be used in the allogeneic setting. The modest in vivo outcomes observed with NK-92 cells continue to present hurdles in successfully translating NK-92 cell therapies into clinical applications. Adoptive transfer of CAR-NK-92 cells holds out the promise of therapeutic benefit at a lower rate of adverse events due to the absence of GvHD and cytokine release syndrome. However, it has not achieved breakthrough clinical results yet, and further improvement of CAR-NK-92 cells is necessary.MethodsIn this study, we conducted a comparative analysis between CD19-targeted CAR (CAR.19) co-expressing IL-15 (CAR.19-IL15) with IL-15/IL-15Rα (CAR.19-IL15/IL15Rα) to promote NK cell proliferation, activation, and cytotoxic activity against B-cell leukemia. CAR constructs were cloned into lentiviral vector and transduced into NK-92 cell line. Potency of CAR-NK cells were assessed against CD19-expressing cell lines NALM-6 or Raji in vitro and in vivo in a murine model. Tumor burden was measured by bioluminescence.ResultsWe demonstrated that a fourth- generation CD19-targeted CAR (CAR.19) co-expressing IL-15 linked to its receptor IL-15/IL-15Rα (CAR.19-IL-15/IL-15Rα) significantly enhanced NK-92 cell proliferation, proinflammatory cytokine secretion, and cytotoxic activity against B-cell cancer cell lines in vitro and in a xenograft mouse model.ConclusionTogether with the results of the systematic analysis of the transcriptome of activated NK-92 CAR variants, this supports the notion that IL-15/IL-15Rα comprising fourth-generation CARs may overcome the limitations of NK-92 cell-based targeted tumor therapies in vivo by providing the necessary growth and activation signals.</p