Contribution au mécanisme d'induction de la castration médicale avec les agonistes de la LHRH chez l'homme et au mécanisme d'action de l'EGF chez le rat

La première partie de cette thèse est consacrée à la caractérisation des récepteurs ovariens et prostatiques pour l''epidermal growth factor (EGF) et à l'étude des événements moléculaires suivant la liaison de l'EGF à son récepteur dans l'ovaire chez le rat. En utilisant l'EGF purifié marqué à l'iode⁻¹²⁵, nous avons étudié le site récepteur pour l'EGF dans le lobe ventral de la prostate de rat. Ce récepteur montre une haute affinité pour son ligand (KD = 0.93 ± 0.09 nM). La concentration des récepteurs EGF prostatiques est sous contrôle androgénique: la castration chirurgicale ou chimique (avec un agoniste de la LHRH combiné è un antiandrogène) stimule le niveau des récepteurs alors que la dihydrotestostêrone produit l'effet inverse. Par la suite, nous avons mis en évidence un site récepteur spécifique de haute affinité (KD = 1.1 ± 0.2 nM) pour l'EGF dans l'homogénat total d'ovaire. Le niveau de ces récepteurs EGF ovariens varie en fonction du cycle estrien du rat, les niveaux les plus bas étant observés aux jours diestrus-1 et diestrus-2 et la capacité de liaison de l’EGF dans l'ovaire augmentant en après-midi du jour proestrus pour se maintenir élevée en estrus. Ces variations du niveau des récepteurs EGF ovariens au cours du cycle estrien pourraient être causées par les gonadotrophines puisque nous avons démontré que l'administration chronique de gonadotrophines exogènes (hCG et FSH) stimule le niveau des récepteurs EGF dans l'ovaire. Les androgènes inhibent légèrement les concentrations de récepteurs pour l'EGF dans l'ovaire. En utilisant les techniques de radioautographie, nous avons localisé le récepteur EGF sur les cellules de la granulosa, les cellules de la thèque interne et les cellules lutéales dans l'ovaire de rat. Lorsque l'EGF se lie à son récepteur sur les membranes des cellules ovariennes, il stimule la phosphorylation d'une composante membranaire de Mr = 37K. Cette stimulation est rapide et spécifique à l'EGF. Dans des membranes isolées de foie de rat, l'EGF stimule la phosphorylation d'une protéine de Mr = 160K. Nos travaux démontrent l'existence de sites récepteurs spécifiques pour l'EGF dans la prostate et l'ovaire de rat et suggèrent que la stimulation de la phosphorylation d'une protéine de Mr = 37K pourrait être une étape importante dans le mécanisme d'action spécifique du peptide dans l'ovaire.Dans la deuxième partie, nous avons déterminé l'effet d'un traitement chronique avec un agoniste de la LHRH sur l’activité biologique de la LH chez l'homme. Nous avons utilisé comme modèle les patients atteints de cancer de la prostate et traités par la nouvelle thérapie combinée utilisant un agoniste de la LHRH, et un antiandrogène, mise au point dans notre laboratoire. Un système in vitro très sensible utilisant la sécrétion de testostérone par une suspension de cellules de Leydig de souris a été utilisé pour évaluer l'activité biologique de la LH dans le sérum des patients. Nos résultats démontrent que l'activité biologique de la LH est sélectivement inhibée après 1 mois de thérapie combinée alors que les niveaux de LH mesurés par radioimmunoétalonnage (RIA) ne sont que peu affectés. L'administration chronique d'un agoniste de la LHRH en combinaison avec un antiandrogène provoque aussi une désensibilisation hypophysaire, c'est-à-dire une inhibition progressive de la réponse en LH stimulée par la LHRH. Chez des patients castrés recevant seulement l'antiandrogène, l'activité biologique de la LH n'est pas affectée, suggérant que la LHRH, et non l'antiandrogène, provoque la perte de bioactivité de l'hormone lors du traitement combiné. Après avoir caractérisé deux radioimmunoétalonnages pour les sous-unités α et β de la LH, nous avons démontré que la thérapie combinée stimule les concentrations sériques de la sous-unité a chez les patients atteints de cancer de la prostate, sans affecter les niveaux de la sous-unité β. La réaction croisée des niveaux stimulés de sous-unité a dans le RIA de la LH n'est pas suffisante pour expliquer les niveaux de LH immunoréactive mesurés lors du traitement combiné démontrant que la perte de bioactivité de la LH induite par la thérapie combinée n'est pas due à la dissociation complète de l'hormone en ses sous-unités constituantes.Chez le chien, l'administration chronique d'un agoniste de la LHRH provoque une stimulation transitoire des niveaux de LH bioactive et de testostérone suivie d'une inhibition quasi-totale des concentrations de ces deux hormones. L'administration concomitante d'inhibiteurs de la stéroïdogénèse empêche l'élévation initiale des concentrations de testostérone sans modifier de façon appréciable le profil de sécrétion de la LH bioactive. Ces résultats démontrent que l'administration chronique d'un agoniste de la LHRH en combinaison avec un antiandrogène pur chez des patients atteints de cancer de la prostate stimule les niveaux sériques de la sous-unité a de la LH et inhibe de façon importante l'activité biologique de la LH circulante. Le parallélisme étroit existant entre l’inhibition des concentrations circulantes de testostérone et la perte de bioactivité de la gonadotrophine suggère que cette inhibition de l'activité biologique de l'hormone est responsable de la castration médicale provoquée par la thérapie combinée. Le chien pourrait être utilisé comme modèle afin de déterminer les modifications de la molécule de LH provoquée par l'agoniste de la LHRH et conduisant à la réduction de l'activité biologique de la gonadotrophine.Montréal Trigonix inc. 201

Abnormal Calcium Handling and Exaggerated Cardiac Dysfunction in Mice with Defective Vitamin D Signaling

Aim Altered vitamin D signaling is associated with cardiac dysfunction, but the pathogenic mechanism is not clearly understood. We examine the mechanism and the role of vitamin D signaling in the development of cardiac dysfunction. Methods and Results: We analyzed 1α-hydroxylase (1α-OHase) knockout (1α-OHase−/−) mice, which lack 1α-OH enzymes that convert the inactive form to hormonally active form of vitamin D. 1α-OHase−/− mice showed modest cardiac hypertrophy at baseline. Induction of pressure overload by transverse aortic constriction (TAC) demonstrated exaggerated cardiac dysfunction in 1α-OHase−/− mice compared to their WT littermates with a significant increase in fibrosis and expression of inflammatory cytokines. Analysis of calcium (Ca2+) transient demonstrated profound Ca2+ handling abnormalities in 1α-OHase−/− mouse cardiomyocytes (CMs), and treatment with paricalcitol (PC), an activated vitamin D3 analog, significantly attenuated defective Ca2+ handling in 1α-OHase−/− CMs. We further delineated the effect of vitamin D deficiency condition to TAC by first correcting the vitamin D deficiency in 1α-OHase−/− mice, followed then by either a daily maintenance dose of vitamin D or vehicle (to achieve vitamin D deficiency) at the time of sham or TAC. In mice treated with vitamin D, there was a significant attenuation of TAC-induced cardiac hypertrophy, interstitial fibrosis, inflammatory markers, Ca2+ handling abnormalities and cardiac function compared to the vehicle treated animals. Conclusions: Our results provide insight into the mechanism of cardiac dysfunction, which is associated with severely defective Ca2+ handling and defective vitamin D signaling in 1α-OHase−/− mice

Association of cartilage-specific deletion of peroxisome proliferator-activated receptor γ with abnormal endochondral ossification and impaired cartilage growth and development in a murine model

Objective Long bones develop through the strictly regulated process of endochondral ossification within the growth plate, resulting in the replacement of cartilage by bone. Defects in this process can result in skeletal abnormalities and a predisposition to degenerative joint diseases such as osteoarthritis (OA). Studies suggest that activation of the transcription factor peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) is an important therapeutic target in OA. To devise PPARγ-related therapies in OA, it is critical to identify the role of this transcription factor in cartilage biology. Therefore, this study sought to determine the in vivo role of PPARγ in endochondral ossification and cartilage development, using cartilage-specific PPARγ-knockout (KO) mice. Methods Cartilage-specific PPARγ-KO mice were generated using the Cre/loxP system. Histomorphometric and immunohistochemical analyses were performed to assess the patterns of ossification, proliferation, differentiation, and hypertrophy of chondrocytes, skeletal organization, bone density, and calcium deposition in the KO mice. Results PPARγ-KO mice exhibited reductions in body length, body weight, length of the long bones, skeletal growth, cellularity, bone density, calcium deposition, and trabecular bone thickness, abnormal organization of the growth plate, loss of columnar organization, shorter hypertrophic zones, and delayed primary and secondary ossification. Immunohistochemical analyses for Sox9, 5-bromo-2\u27-deoxyuridine, p57, type X collagen, and platelet endothelial cell adhesion molecule 1 revealed reductions in the differentiation, proliferation, and hypertrophy of chondrocytes and in vascularization of the growth plate in mutant mice. Isolated chondrocytes and cartilage explants from mutant mice showed aberrant expression of Sox9 and extracellular matrix markers, including aggrecan, type II collagen, and matrix metalloproteinase 13. In addition, chondrocytes from mutant mice exhibited enhanced phosphorylation of p38 and decreased expression of Indian hedgehog. Conclusion The presence of PPARγ is required for normal endochondral ossification and cartilage development in vivo. Copyright © 2012 by the American College of Rheumatology

Osteocrin is a specific ligand of the natriuretic peptide clearance receptor that modulates bone growth

Osteocrin (Ostn) is a recently discovered secreted protein produced by cells of the osteoblast lineage that shows a well conserved homology with members of the natriuretic peptide (NP) family. We hypothesized that Ostn could interact with the NP receptors, thereby modulating NP actions on the skeleton. Ostn binds specifically and saturably to the NP peptide receptor-C (NPR-C) receptor with a K-d of similar to 5 nM with no binding to the GC-A or GC-B receptors. Deletion of several of the residues deemed important for NP binding to NPR-C led to abolition of Ostn binding, confirming the presence of a "natriuretic motif." Functionally, Ostn was able to augment C-type natriuretic peptide-stimulated cGMP production in both pre-chondrocytic (ATDC5) and osteoblastic (UMR106) cells, suggesting increased NP levels due to attenuation of NPR-C associated NP clearance. Ostn-transgenic mice displayed elongated bones and a marked kyphosis associated with elevated bone cGMP levels, suggesting that elevated natriuretic peptide activity contributed to the increased bone length possibly through an increase in growth plate chondrocyte proliferation. Thus, we have demonstrated that Ostn is a naturally occurring ligand of the NPR-C clearance receptor and may act to locally modulate the actions of the natriuretic system in bone by blocking the clearance action of NPR-C, thus locally elevating levels of C-type natriuretic peptide

Expression and Role of Ubiquitin-Specific Peptidases in Osteoblasts

The ubiquitin-proteasome system regulates biological processes in normal and diseased states. Recent investigations have focused on ubiquitin-dependent modifications and their impacts on cellular function, commitment, and differentiation. Ubiquitination is reversed by deubiquitinases, including ubiquitin-specific peptidases (USPs), whose roles have been widely investigated. In this review, we explore recent findings highlighting the regulatory functions of USPs in osteoblasts and providing insight into the molecular mechanisms governing their actions during bone formation. We also give a brief overview of our work on USP53, a target of PTH in osteoblasts and a regulator of mesenchymal cell lineage fate decisions. Emerging evidence addresses questions pertaining to the complex layers of regulation exerted by USPs on osteoblast signaling. We provide a short overview of our and others’ understanding of how USPs modulate osteoblastogenesis. However, further studies using knockout mouse models are needed to fully understand the mechanisms underpinning USPs actions

Sequence-Specific DNA Binding by the αNAC Coactivator Is Required for Potentiation of c-Jun-Dependent Transcription of the Osteocalcin Gene

Since the c-Jun coactivator αNAC was initially identified in a differential screen for genes expressed in differentiated osteoblasts, we examined whether the osteocalcin gene, a specific marker of terminal osteoblastic differentiation, could be a natural target for the coactivating function of αNAC. We had also previously shown that αNAC can specifically bind DNA in vitro, but it remained unclear whether the DNA-binding function of αNAC is expressed in vivo or if it is required for coactivation. We have identified an αNAC binding site within the murine osteocalcin gene proximal promoter region and demonstrated that recombinant αNAC or αNAC from ROS17/2.8 nuclear extracts can specifically bind this element. Using transient transfection assays, we have shown that αNAC specifically potentiated the c-Jun-dependent transcription of the osteocalcin promoter and that this activity specifically required the DNA-binding domain of αNAC. Chromatin immunoprecipitation confirmed that αNAC occupies its binding site on the osteocalcin promoter in living osteoblastic cells expressing osteocalcin. Inhibition of the expression of endogenous αNAC in osteoblastic cells by use of RNA interference provoked a decrease in osteocalcin gene transcription. Our results show that the osteocalcin gene is a target for the αNAC coactivating function, and we propose that αNAC is specifically targeted to the osteocalcin promoter through its DNA-binding activity as a means to achieve increased specificity in gene transcription

Le Roman de Tobit (filiation, fiction et vérité)

Le livre biblique de Tobit ouvre aux questions du rapport à l'origine et de la structuration subjective. Par le biais de l'histoire de sa mise en forme et de son inclusion dans le corpus biblique canonique, le roman de Tobit invite à une réflexion sur la filiation, la fiction et la vérité. Ce texte n'est ni fixe ni immuable et s'y recoupent une multitude de voix. A la lumière d'éléments de psychanalyse, il fournit une illustration des pièges tendus par un imaginaire qui se réclame d'inspiration divine. Tobit, l'homme bon, croit pouvoir transcender les registres les plus habituels de la condition et des relations humaines en se fusionnant à la Loi divine. Or, par l'épreuve qui s'abat sur lui à partir de Tb 2,10, un vide se creuse là où il était plein de sa propre rigueur morale. Ce passage peut évoquer aujourd'hui une dimension que Lacan nomme le symbolique, né du jeu des signifiants. La dimension de l'Autre est suggéré par la lecture proposé de la figure d'Azarias/Raphaël.STRASBOURG-B.N.U.S. (674821001) / SudocSTRASBOURG-Théologie Catho. (674822201) / SudocSTRASBOURG-Théologie Protest. (674822202) / SudocSudocFranceF