Charakterisierung eines Typ III-Sekretionssystems für Virulenzproteine aus Salmonella typhimurium

Zur Strukturanalyse des Typ III-Sekretionssystems, kodiert von der Salmonella- Pathogenitätsinsel 2, wurden polyklonale Antikörper gegen rekombinante Proteine des Sekretionsapparates erzeugt. Zur Entfernung unspezifischer Bindungen wurden die polyklonalen Antiseren an eine CNBr-aktivierte Sepharose 4B, gekoppelt mit Salmonella- Lysaten, präadsorbiert. Anschließend konnten die Antiseren für verschiedene Immunoblotanalysen eingesetzt werden. Durch eine Membranfraktionierung mit N-Lauroyl-Sarcosin konnte die subzelluläre Lokalisation der Apparatsproteine SsaC, SsaN, SsaV und SsaB bestimmt werden. Dabei wurde SsaC in der äußeren, SsaN und SsaV in der inneren Membranfraktion nachgewiesen. SsaB war nur in der löslichen Fraktion detektierbar. Um mögliche Proteinkomplexe innerhalb des Sekretionsapparates zu identifizieren, wurde der membranpermeable Quervernetzer DSS eingesetzt. So konnten für das Sekretin-bildende Protein SsaC und für das putative Translokatorprotein SseD oligomere Strukturen nachgewiesen werden. Bei der Untersuchung der Effekte von Mutationen in verschiedenen SPI2-Genen auf die Synthese einzelner Proteine des Sekretionsapparates wurde deutlich, dass das Zwei- Komponenten-Regulationssystem SsrAB sowie alle untersuchten Apparatsproteine eine essentielle Rolle in der Synthese bzw. im Aufbau des Sekretionsapparates spielen. Lediglich eine Mutation in ssaV oder ssaG hatte einen weniger starken Effekt auf die Synthese der Apparatsproteine, so dass SsaC in Wildtyp-Mengen detektiert werden konnte. Darüber hinaus wurde die Synthese einzelner Proteine des Sekretionsapparates auch in Abhängigkeit des pH-Wertes analysiert. Nach einer Absenkung des pH-Wertes auf pH 5,8 nahmen die Proteinmengen weitaus stärker zu als ohne pH-Wert-Veränderung. Dabei konnte nachgewiesen werden, dass dieser Unterschied in den synthetisierten Proteinmengen, in Abhängigkeit des pH-Wertes, nicht auf eine verstärkte Transkription zurückzuführen ist und dass es sich um einen SPI2-spezifischen Effekt handelt. Die Kinetik des Aufbaus des Sekretionsapparates wurde anhand der Sekretion des putativen Translokatorproteins SseB bestimmt. 1 h nach der Absenkung des pH-Wertes auf pH 5,8 wurde eine intrazelluläre Akkumulation von SseB detektiert. Zu diesem Zeitpunkt konnte kein SseB auf der Zelloberfläche lokalisiert werden. Eine Sekretion von SseB wurde erst 3 h nach der Säure-Induktion beobachtet. Demzufolge muss der Sekretionsapparat in diesem Zeitraum vollständig aufgebaut und funktional intakt sein, um die pH-induzierte Sekretion zu ermöglichen. Das SPI2-Protein SsaB (SpiC) ist für die Sekretion der putativen Translokatorproteine SseB und SseC erforderlich. So könnte SsaB eine Komponente des Typ IIISekretionsapparates darstellen oder die Funktion eines Chaperones für die Effektorproteine, bzw. eines GSP-spezifischen Chaperones für das Sekretin-bildende Protein SsaC besitzen. Ebenso wäre es möglich, dass SsaB für die korrekte Lokalisation von SsaC in der äußeren Membran verantwortlich ist. Aus S. typhimurium konnten die als Nadel-Komplexe bezeichneten makromolekularen Strukturen, die den gesamten Sekretionsapparat darstellen, isoliert aber nicht eindeutig identifiziert werden. Da in einer SPI1-Mutante, die einen Defekt im Typ IIISekretionsapparat hat, keine Nadel-Komplexe mehr angereichert werden konnten, liegt die Vermutung nahe, dass es sich bei den Nadel-Komplexen, isoliert aus S. typhimurium- Wildtyp, um die SPI1-Strukturen handelt

"Spatial Joint Models through Bayesian Structured Piece-wise Additive Joint Modelling for Longitudinal and Time-to-Event Data"

Joint models for longitudinal and time-to-event data have seen many developments in recent years. Though spatial joint models are still rare and the traditional proportional hazards formulation of the time-to-event part of the model is accompanied by computational challenges. We propose a joint model with a piece-wise exponential formulation of the hazard using the counting process representation of a hazard and structured additive predictors able to estimate (non-)linear, spatial and random effects. Its capabilities are assessed in a simulation study comparing our approach to an established one and highlighted by an example on physical functioning after cardiovascular events from the German Ageing Survey. The Structured Piecewise Additive Joint Model yielded good estimation performance, also and especially in spatial effects, while being double as fast as the chosen benchmark approach and performing stable in imbalanced data setting with few events

COMPLEMENTARY USE OF DESIGN METHODOLOGIES IN EDUCATIONAL ENGINEERING DESIGN PROJECTS: A CASE STUDY

The challenge of a nowadays well-grounded engineering education is preparing industry ready graduates, that is, to provide students with the skills to master the complexity of products in terms of innovation, invention and problem solving combined with soft skills abilities. This addresses particularly the engineering design education, which in general should be mainly based on practical studies represented by engineering design projects. In order to supply industry with work-ready practitioners, the effectiveness and efficacy of design education respectively design projects is a crucial aspect. This article presents some findings of an efficient use of design methodologies and techniques when carrying through design projects in the faculty of Mechanical Engineering and Mechatronics at the University of Applied Sciences, Deggendorf, Germany. Engineering design projects are compulsory for students within their curriculum. The projects aim at fostering and stimulating students creativity by means of a complementary use of design methodologies and techniques. By taking advantage of this approach the systematic generation of ideas in the course of a design project is presented, which eventually led to the development of an innovative product

Sharp lines in the absorption edge of EuTe and Pb0.1_{0.1}Eu0.9_{0.9}Te in high magnetic fields

The optical absorption spectra in the region of the \fd transition energies of epitaxial layers of of EuTe and \PbEuTe, grown by molecular beam epitaxy, were studied using circularly polarized light, in the Faraday configuration. Under \sigmam polarization a sharp symmetric absorption line (full width at half-maximum 0.041 eV) emerges at the low energy side of the band-edge absorption, for magnetic fields intensities greater than 6 T. The absorption line shows a huge red shift (35 meV/T) with increasing magnetic fields. The peak position of the absorption line as a function of magnetic field is dominated by the {\em d-f} exchange interaction of the excited electron and the \Euion spins in the lattice. The {\em d-f} exchange interaction energy was estimated to be $J_{df}S=0.15\pm 0.01$ eV. In \PbEuTe the same absorption line is detected, but it is broader, due to alloy disorder, indicating that the excitation is localized within a finite radius. From a comparison of the absorption spectra in EuTe and \PbEuTe the characteristic radius of the excitation is estimated to be $\sim 10$\AA.Comment: Journal of Physics: Condensed Matter (2004, at press

Magnetic Ordering Of Eutepbte Multilayers Determined By X-ray Resonant Diffraction

In this work we use resonant x-ray diffraction combined with polarization analysis of the diffracted beam to study the magnetic ordering in EuTePbTe multilayers. The presence of satellites at the (1/2 1/2 1/2) magnetic reflection of a 50 repetition EuTePbTe superlattice demonstrated the existence of magnetic correlations among the alternated EuTe layers. The behavior of the satellites intensity as T increases toward the Ǹel temperature TN indicates that these correlations persist nearly up to TN and suggests the preferential decrease of the magnetic order parameter of external monolayers of each EuTe layer within the superlattice. © 2008 American Institute of Physics.9224Lovesey, S.W., Collins, S.P., (1996) X-Ray Scattering and Absorption by Magnetic Materials, , (Oxford University Press, New York)Granado, E., Pagliuso, P.G., Giles, C., Lora-Serrano, R., Yokaichiya, F., Sarrao, J.L., (2004) Phys. Rev. B, 69, p. 144411. , PRBMDO 0163-1829 10.1103/PhysRevB.69.144411Tonnerre, J.M., Seve, L., Raoux, D., Rodmacq, B., De Santis, M., Troussel, P., Brot, J.M., Chen, C.T., (1995) Nucl. Instrum. Methods Phys. Res. B, 97, p. 444. , NIMBEU 0168-583X 10.1016/0168-583X(94)00721-7Langridge, S., Stirling, W.G., Lander, G.H., Rebizant, J., (1994) Phys. Rev. B, 49, p. 12010. , PRBMDO 0163-1829 10.1103/PhysRevB.49.12010Leiner, V., Ay, M., Zabel, H., (2004) Phys. Rev. B, 70, p. 104429. , PRBMDO 0163-1829 10.1103/PhysRevB.70.104429Kepa, H., Springholz, G., Giebultowicz, T.M., Goldman, K.I., Majkrzak, C.F., Kacman, P., Blinowski, J., Bauer, G., (2003) Phys. Rev. B, 68, p. 024419. , PRBMDO 0163-1829 10.1103/PhysRevB.68.024419Binder, K., Hohenberg, P.C., (1974) Phys. Rev. B, 9, p. 2194. , PLRBAQ 0556-2805 10.1103/PhysRevB.9.2194Oliveira, N.F., Foner, S., Shapira, Y., Reed, T.B., (1972) Phys. Rev. B, 5, p. 2634. , PLRBAQ 0556-2805 10.1103/PhysRevB.5.2634Giles, C., Yokaichiya, F., Kycia, S.W., Sampaio, L.C., Ardiles-Saravia, D.C., Franco, M.K.K., Neuenschwander, R.T., (2003) J. Synchrotron Radiat., 10, p. 430. , JSYRES 0909-0495 10.1107/S0909049503020958Hol, V., Kubena, J., Ploog, K., (1990) Phys. Status Solidi B, 162, p. 347. , PSSBBD 0370-1972 10.1002/pssb.2221620204Nunez, V., Majkrzak, C.F., Springholz, G., Bauer, G., Giebultowicz, T.M., Kepa, H., Goldman, K.I., (1998) Superlattices Microstruct., 23, p. 41. , SUMIEK 0749-6036 10.1006/spmi.1996.0205Giebultowicz, T.M., Kepa, H., Blinowski, J., Kacman, P., (2001) Physica e (Amsterdam), 10, p. 411. , PELNFM 1386-9477 10.1016/S1386-9477(01)00128-