The One-Carbon metabolic network, the L-Arginine pathway and hypertension in adults and during pregnancy.

La alteración del metabolismo de monocarbono (1CM) se ha asociado a la hipertensión y a la hipertensión inducida por el embarazo, aunque el mecanismo es desconocido. Durante la remetilación de la homocisteína, S-adenosilmetionina dona grupos metilo para metilar la L-Arginina, creando ADMA y SDMA, que perjudican la conversión de L-Arginina en óxido nítrico (NO) por la eNOS. Lo cual se ha asociado a la disfunción endotelial, ya que el NO es un vasodilatador. En una población representativa de 788 adultos tHcy, pero no el genotipo MTHFR C677T, se asoció con ADMA y SDMA. ADMA, el Ratio L-Arginina/ADMA y la variante del genotipo NOS G894T se asociaron con la hipertensión en adultos de más de 50 años. En el Reus-Tarragona Birth Cohort, se reclutaron 810 madres con <12 semanas de gestación. Las concentraciones plasmáticas maternas del primer trimestre de ADMA y SDMA fueron mayores en el tercil alto de tHcy del primer trimestre, en comparación con el bajo y menores en los participantes con el genotipo MTHFR TT frente al CC. El Ratio ADMA/SDMA en el plasma materno del primer trimestre se asoció con un mayor riesgo de hipertensión inducida por el embarazo. Los 416 padres que participaron con tHcy en el tertil más altos tenían concentraciones plasmáticas de ADMA y SDMA más altas en comparación con los tertiles más bajos. Las concentraciones paternas de ADMA y SDMA no difirieron entre los genotipos MTHFR C677T.L'alteració del metabolisme de *monocarbono (1CM) s'ha associat a la hipertensió i a la hipertensió induïda per l'embaràs, encara que el mecanisme és desconegut. Durant la remetilació de la *homocisteína, S-*adenosilmetionina dona grups metil per a *metilar la L-Arginina, creant *ADMA i *SDMA, que perjudiquen la conversió de L-Arginina en òxid nítric (NO) per la *eNOS. La qual cosa s'ha associat a la disfunció endotelial, ja que el NO és un vasodilatador. En una població representativa de 788 adults *tHcy, però no el genotip *MTHFR C677T, es va associar amb *ADMA i *SDMA. *ADMA, el Ràtio L-Arginina/*ADMA i la variant del genotip ENS G894T es van associar amb la hipertensió en adults de més de 50 anys. En el Reus-Tarragona *Birth *Cohort, es van reclutar 810 mares amb <12 setmanes de gestació. Les concentracions plasmàtiques maternes del primer trimestre de *ADMA i *SDMA van ser majors en el tercil alt de *tHcy del primer trimestre, en comparació amb el baix i menors en els participants amb el genotip *MTHFR *TT enfront del CC. El Ràtio *ADMA/*SDMA en el plasma matern del primer trimestre es va associar amb un major risc d'hipertensió induïda per l'embaràs. Els 416 pares que van participar amb *tHcy en el *tertil més alts tenien concentracions plasmàtiques de *ADMA i *SDMA més altes en comparació amb els *tertiles més baixos. Les concentracions paternes de *ADMA i *SDMA no van diferir entre els genotips *MTHFR C677T.Impaired One-Carbon metabolism (1CM) has been associated with hypertension and pregnancy-induced hypertension, although the mechanism is unknown. During homocysteine remethylation, S-adenosylmethionine donates methyl groups to methylate L-Arginine, creating ADMA and SDMA, which impair the conversion of L-Arginine to nitric oxide (NO) by eNOS. This has been associated with endothelial dysfunction, as NO is a vasodilator. In a representative population of 788 adults tHcy, but not the MTHFR C677T genotype, was associated with ADMA and SDMA. ADMA, the L-Arginine/ADMA Ratio and the NOS G894T genotype variant were associated with hypertension in adults over 50 years of age. In the Reus-Tarragona Birth Cohort, 810 mothers at <12 weeks of gestation were recruited. First-trimester maternal plasma concentrations of ADMA and SDMA were higher in the highest first-trimester tHcy tertile compared with the lowest, and lower in participants with the MTHFR TT versus CC genotype. The ADMA/SDMA Ratio in first- trimester maternal plasma was associated with an increased risk of pregnancy-induced hypertension. The 416 participating fathers with tHcy in the highest tertile had higher plasma ADMA and SDMA concentrations compared with the lowest tertiles. Paternal ADMA and SDMA concentrations did not differ between MTHFR C677T genotypes

Identificación bioinformática y análisis funcional de factores de transcripción de Pseudomonas savastanoi potencialmente implicados en la infección de Mandevilla spp.

La bacteria fitopatógena Pseudomonas savastanoi, perteneciente al complejo Pseudomonas syringae, incluye 4 patovares aislados de diferentes plantas leñosas: pv. savastanoi (olivo), pv. nerii (adelfa), pv. fraxini (fresno) y pv. retacarpa (retama). Recientemente, se ha caracterizado en nuestro grupo un nuevo patovar causante de necrosis bacteriana en la planta ornamental dipladenia (Mandevilla spp.) (Caballo-Ponce, E, 2017, Tesis Doctoral). Estudios filogenéticos han demostrado la estrecha relación entre cepas del patovar nerii (Psn) y las aisladas de Mandevilla spp. (Psm), sin embargo, éstas difieren en el rango de huésped. En este trabajo hemos llevado a cabo un análisis bioinformático comparativo del repertorio de posibles factores de transcripción codificados en los genomas de la cepa Ph3 de Psm y de las cepas de Psn ICMP16943 (capaz de infectar dipladenia y adelfa) y ESC23 (infecta solamente adelfa). De la comparativa bioinformática de un total de 500 posibles factores de transcripción, se han seleccionado 9 de ellos: 3 factores exclusivos de Psm Ph3, 2 factores truncados en Psm Ph3 y 4 factores ausentes en las cepas capaces de infectar dipladenia (Psn ICMP16943 y Psm Ph3). La ausencia/presencia o el truncamiento de los genes codificadores de estos factores se ha comprobado en estas y otras cepas de P. savastanoi mediante técnicas de PCR y secuenciación. Actualmente estamos llevando a cabo la construcción de mutantes en los factores seleccionados para determinar su papel en la infección de dipladenia. Este trabajo pretende contribuir en el conocimiento de los determinantes genéticos implicados en la especificidad de huésped de los diversos patovares de la especie P. savastanoi.Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

Identificación bioinformática y análisis funcional de factores de transcripción de Pseudomonas savastanoi potencialmente implicados en la infección de Mandevilla spp.

La bacteria fitopatógena Pseudomonas savastanoi, perteneciente al complejo Pseudomonas syringae, incluye cuatro patovares aislados de diferentes plantas leñosas: pv. savastanoi (olivo), pv. nerii (adelfa), pv. fraxini (fresno) y pv. retacarpa (retama). Recientemente, se ha caracterizado en nuestro grupo un nuevo patovar (Psm) causante de necrosis bacteriana en la planta ornamental dipladenia (Mandevilla spp.) (Caballo-Ponce, E, 2017, Tesis Doctoral). Estudios filogenéticos han demostrado la estrecha relación existente entre cepas del patovar nerii (Psn) y las aisladas de Mandevilla spp., aun cuando éstas difieren en el rango de huésped. En este trabajo hemos llevado a cabo un análisis bioinformático comparativo del repertorio de posibles factores de transcripción (Fts) codificados en los genomas de la cepa Ph3 de Psm y de las cepas de Psn ICMP16943 y ESC23. La búsqueda se centró en aquellos Fts posiblemente implicados en la infección de dipladenia, seleccionando un total de nueve posibles Fts: tres factores exclusivos de Psm Ph3, dos factores truncados exclusivamente en Psm Ph3 y cuatro factores ausentes tanto en Psn ICMP16943 como Psm Ph3 (las dos cepas que infectan dipladenia). De entre los TFs identificados, hemos seleccionados tres que forman parte de un posible operón junto a otros genes implicados en quimiotaxis. Se han construido mutantes de este operón en cada uno de los tres genes codificadores de los Fts seleccionados y en dos genes codificadores de Methyl Chemotaxis proteins (MCP). Actualmente estamos analizando el papel de estos genes en la patogenicidad en plantas de dipladenia y su implicación en quimiotaxis. Este trabajo pretende contribuir en el conocimiento de los determinantes genéticos implicados en la especificidad de huésped de los diversos patovares de la especie P. savastanoi.Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

Characterization of the GacS/GacA system in the virulence regulation in Pseudomonas savastanoi.

The two-component regulatory system GacS/GacA is one of the main mechanisms for global regulation in bacteria. GacS/GacA is a highly conserved system that has been studied in many pathogenic bacteria. However, its characterization has been mainly focused on pathogenic bacteria of herbaceous plants. Despite previous works have reported that GacS/GacA regulates the expression of virulence factors, its role in virulence varies among different species and strains. The aim of this work was the identification of virulence factors regulated by the GacS/GacA system in the model bacterium Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi (Psv), causal agent of olive knot disease. To this end, we generated a gacA deletion mutant in the strain Psv NCPPB 3335, whose transcriptomic profile was further analyzed using a massive RNA sequencing (RNA-seq) strategy. The bioinformatic analysis of RNA-seq data showed that the Psv GacS/GacA system regulates a large number of genes, including some virulence factors already described, such as those related to the type III secretion system, the biosynthesis of phytohormones and the catabolism of aromatic compounds, among others. In addition, small Rsm-type RNAs and regulatory proteins (RsmA) were identified in the regulatory cascade of the GacS/GacA system. Finally, the involvement of some of the virulence factors of Psv NCPP 3335 were further studied through different phenotypic assays, such as plant virulence assays, induction of hypersensitive response, leaf adhesion tests and translocation of type III effectors. Results obtained in this work indicate that GacS/GacA system presents a role in regulation of virulence factors of Psv NCPPB 3335.Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

Host specificity in Pseudomonas savastanoi pathovars of woody hosts: comparative genomics and gene regulation

Conferencia por invitación a la sesión 11 del congreso "Genomics and Gene Regulation - I"Pseudomonas savastanoi belongs to the intensively studied Pseudomonas syringae complex, and includes four pathovars causing knots or excrescences in woody hosts. These are P. savastanoi pv. savastanoi (Psv), pv. nerii (Psn), pv. fraxini (Psf) and pv. retacarpa (Psr), comprising isolates from olive (Olea europaea), oleander (Nerium oleander), ash (Fraxinus excelsior) and Spanish broom (Retama sphaerocarpa), respectively. The recent availability of the draft genome sequences of several P. savastanoi strains isolated from different hosts has facilitated bioinformatics-based predictions of virulence determinants in this pathogen, including codification of phytohormones-related genes and type III secretion system effectors (T3E). The super-repertoire of T3E in the P. savastanoi pangenome comprises a core set of 21 effectors, some of which are truncated in the genomes of strains belonging to specific pathovars, suggesting a role of these proteins in host specificity. To address this issue, we have constructed both knock out mutants in some of these genes and strains expressing heterologously the complete version of the truncated effectors. Classification of P. savastanoi pathovar-specific genes into biological functions using Blast2GO revealed that most specific genes were included in the category “regulation of transcription”. Thus, we decided to construct a pipeline allowing the identification of regulatory elements in bacterial genomes. Our preliminary results indicate that P. savastanoi strains show significant differences in the number of transcriptional regulatory proteins (TFs), ranging from about 380 to 440. The role of some of these TFs in virulence and host specificity is currently under analysis and the results will be presented. This project is supported by the Spanish Plan Nacional I+D+i grants AGL2017-82492-C2-1-R and AGL2017-82492-C2-2-R, co-financed by The Fondo Europeo de Desarrollo Regional (FEDER).Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

Biological Activity of NHC-Gold-Alkynyl Complexes Derived from 3-Hydroxyflavones

In this paper we describe the synthesis of new N-heterocyclic carbene (NHC) gold(I) derivatives with flavone-derived ligands with a propargyl ether group. The compounds were screened for their antimicrobial and anticancer activities, showing greater activity against bacteria than against colon cancer cells (Caco-2). Complexes [Au(L2b)(IMe)] (1b) and [Au(L2b)(IPr)] (2b) were found to be active against both Gram-positive and Gram-negative strains. The mechanism of action of 1b was evaluated by measurement of thioredoxin reductase (TrxR) and dihydrofolate reductase (DHFR) activity, besides scanning electron microscopy (SEM). Inhibition of the enzyme thioredoxin reductase is not observed in either Escherichia Coli or Caco-2 cells; however, DHFR activity is compromised after incubation of E. coli cells with complex 1b. Moreover, loss of structural integrity and change in bacterial shape is observed in the images obtained from scanning electron microscopy (SEM) after treatment E. coli cells with complex 1b

Caracterización del sistema de dos componentes GacS/GacA en Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi

El sistema de dos componentes GacS/GacA es considerado uno de los principales mecanismos de regulación global en bacterias. Mayoritariamente, los trabajos de caracterización del sistema GacS/GacA se han centrado en bacterias patógenas de plantas herbáceas, donde su papel en virulencia es variable entre distintas especies y cepas. En este trabajo, nos hemos centrado en la identificación de los factores de virulencia regulados por el sistema GacS/GacA en la bacteria modelo Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi (Psv), agente causal de la tuberculosis del olivo. Para ello, hemos llevado a cabo un análisis de secuenciación masiva del RNA (RNA-seq) utilizando la cepa silvestre Psv NCPPB 3335 y un mutante gacA. El análisis bioinformático de los resultados obtenidos muestra que el sistema GacS/GacA de Psv participa en la regulación de un gran número de genes, incluyendo varios factores de virulencia previamente descritos, como el sistema de secreción tipo III, las fitohormonas o una región genómica implicada en el catabolismo de compuesto aromáticos. Además, se han identificado los pequeños RNAs tipo Rsm y las proteínas reguladoras (RsmA) que participan en la cascada de regulación del sistema GacS/GacA. Finalmente, hemos realizado ensayos fenotípicos (ensayos de virulencia en planta, inducción de respuesta hipersensible, síntesis de auxinas, adhesión a hojas y translocación de efectores) para determinar la implicación de algunos de los factores de virulencia identificados por RNAseq en la virulencia de Psv NCPP 3335

Behavior of vine varieties resistant to fungal diseases in the somontano region

The vine is highly susceptible to numerous fungal diseases, the incidence and severity of which are increasing because of climate change. To fight them, large amounts of phytosanitary products are generally used, although they entail important economic and environmental costs. The new fungus resistant vine varieties (PIWI) constitute one of the most active lines of research on plant material in viticulture and are regarded as a viable solution to respond to the requirements of European Directive 2009/128/EC. In the present work, the evolution and impact of the three main fungal diseases (powdery mildew, downy mildew and botrytis bunch rot) were monitored in plots in the Somontano region (Huesca, Spain), comparing three PIWI varieties (Sauvignon Kretos, Souvignier gris and Muscaris) with a susceptible control variety (Sauvignon blanc) in real field growing conditions over three successive years (2016–2018). The main ampelographic characters of each variety were studied and a weekly follow-up was carried out to track the development of each disease, relating it to climatic variables. Regardless of the climatic conditions (one of the growing seasons was rainy and the other two corresponded to dry years, with differences in the distribution of rainfall), the three PIWI varieties hardly presented any symptoms, demonstrating a high resistance to downy mildew and powdery mildew and even to botrytis. Principal component analysis results pointed to a differential behavior versus the control and treated Sauvignon blanc plants in terms of disease resistance. Based on production results, despite the youth of the plantation, the excellent potential of Sauvignon Kretos variety was observed. However, from the analysis of the quality of wine obtained in microvinifications from these fungus resistant varieties in the second and third year, the one obtained from Muscaris seemed to have the best organoleptic properties. Apart from environmental considerations, given that these fungus resistant varieties can significantly contribute to the sustainability of wineries, they may also respond to the demand of consumers who want zero-pesticide products or of the supporters of ecological products adjusted to European regulations

El sistema de dos componentes GacS/GacA regula la expresión de factores de virulencia y patogenicidad en Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi NCPPB3335.

GacS/GacA es uno de los principales sistemas de regulación global en bacterias gramnegativas. Trabajos previos realizados con bacterias patógenas de plantas herbáceas han descrito cómo el sistema GacS/GacA interviene en la regulación de diversos factores de virulencia. Sin embargo, la regulación de estos factores muestra variabilidad no solo entre especies, sino también entre cepas. En este trabajo, hemos estudiado el papel regulador del sistema GacS/GacA en la virulencia y patogenicidad de la cepa NCPPB 3335 de P. savastanoi pv. savastanoi (Psv), agente causal de la enfermedad conocida como tuberculosis del olivo. Para ello, se construyó un mutante por deleción del gen gacA, en la cepa Psv NCPPB3335, cuyo perfil transcriptómico se analizó globalmente mediante una estrategia de secuenciación masiva de ARN (RNA-seq). El análisis bioinformático de los datos de RNA-seq mostró que el sistema GacS/GacA de Psv regula la expresión de genes relacionados con el sistema de secreción tipo III (T3SS), la síntesis de auxinas, locomoción y quimiotaxis bacteriana, y la degradación de compuestos fenólicos asociada a la invasión de huéspedes leñosos. Además, se identificaron variaciones en los niveles de expresión de pequeños ARN de tipo Rsm y proteínas reguladoras (RsmA), elementos que intervienen en la cascada de regulación del sistema GacS/GacA. Con la intención de profundizar en la caracterización de este sistema, se han llevado a cabo ensayos fenotípicos complementantes, como ensayos de virulencia en plantas, inducción de respuesta hipersensible, sensibilidad a peróxido de hidrógeno y translocación de efectores tipo III.Universidad de Málaga. Campus de Excelencia Internacional Andalucía Tech

Biological Activities of Extracts from Aerial Parts of Salvia pachyphylla Epling Ex Munz

Abstract: The antioxidant, antimicrobial, antiproliferative, and enzyme inhibitory properties of five extracts from aerial parts of Salvia pachyphylla Epling ex Munz were examined to assess the prospective of this plant as a source of natural products with therapeutic potential. These properties were analyzed by performing a set of standard assays. The extract obtained with dichloromethane showed the most variety of components, as they yielded promising results in all completed assays. Furthermore,theextractobtainedwithethylacetateexhibitedthegreatestantioxidantactivity,aswell as the best xanthine oxidase inhibitory activity. Remarkably, both extracts obtained with n-hexane or dichloromethane revealed significant antimicrobial activity against the Gram-positive bacteria; additionally, they showed greater antiproliferative activity against three representative cell lines of the most common types of cancers in women worldwide, and against a cell line that exemplifies cancers that typically develop drug resistance. Despite that, other extracts were less active, such as the methanolic or aqueous; their results are promising for the isolation and identification of novel bioactive molecules