Distribution of virulence markers in clinical and environmental Vibrio cholerae non-O1/non-O139 strains isolated in Brazil from 1991 to 2000

One hundred seventy nine Vibrio cholerae non-O1/non-O139 strains from clinical and different environmental sources isolated in Brazil from 1991 to 2000 were serogrouped and screened for the presence of four different virulence factors. The Random Amplification of Polymorphic DNA (RAPD) technique was used to evaluate the genetic relatedness among strains. Fifty-four different serogroups were identified and V. cholerae O26 was the most common (7.8%). PCR analysis for three genes (ctxA, zot, ace) located of the CTX genetic element and one gene (tcpA) located on the VPI pathogenicity island showed that 27 strains harbored one or more of these genes. Eight (4.5%) strains possessed the complete set of CTX element genes and all but one of these belonged to the O26 serogroup suggesting that V. cholerae O26 has the potential to be an epidemic strain. The RAPD profiles revealed a wide variability among strains and no genetic correlation was observed.Cento e setenta e nove amostras de V. cholerae não O1/não O139, isoladas de casos clínicos (139) e de meio ambiente (40), no período de 1991 a 2000 no Brasil, foram caracterizadas antigenicamente pelo National Institute of Health (Japão) e investigadas quanto ao seu potencial genético de virulência, representado pelos genes ctxA, zot, ace e tcpA. As análises fenotípicas revelaram extraordinária diversidade antigênica, com a ocorrência de 54 diferentes sorogrupos, com prevalência para O26 (7,8%). A técnica de PCR, empregada na detecção dos genes localizados no elemento genético CTX (ctxA, zot, ace) e na Ilha de Patogenicidade de Vibrio-VPI (tcpA), possibilitou a identificação de 27 cepas contendo qualquer um desses genes. O gene ctxA (codificador da sub-unidade A de CT), só foi evidenciado no sorogrupo O26, sendo também o único capaz de se apresentar com o cassete de virulência de forma intacta. Com base nos resultados obtidos deste estudo preliminar, admite-se a hipótese da potencialidade destas cepas, evoluir para raças epidêmicas

Escherichia coli isolated from seafood: toxicity and plasmid profiles

Thirty-two Escherichia coli strains were isolated from red snapper (Lutjanus purpureus) and from seabob shrimp (Xiphopenaeus kroyeri). The strains were numbered S1–S16, and F1–F16, which corresponds to the isolation origin from shrimp (S) and fish (F). The isolates were biologically and antigenically characterized by agglutination tests with enteropathogenic E. coli (EPEC)-, enteroinvasive E. coli (EIEC)- and enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157-specific antisera. The ETEC enterotoxinswere characterized by GMI-ELISA for enterotoxin LT-1 (thermolabile) and by inoculation of supernatants prepared from newly born mice for enterotoxin Sta. A total of 14 strains produced exotoxins, of which seven were thermolabile (LT) and seven were thermostable (ST). Antimicrobial susceptibility profiles were determined by disc diffusion in agar using ampicillin, cephalothin, cefoxitin, ceftriaxone, imipenem, nalidixic acid, ciprofloxacin, chloramphenicol, gentamicin, nitrofurantoin, sulfamethoxazole–trimethoprim, and tetracycline. Four isolates showed lower susceptibility to some antibiotics, two strains were resistant to ampicillin, tetracycline, and sulfamethoxazole-trimethoprim, and two were resistant to tetracycline and nitrofurantoin. Plasmids were extracted in the four resistant isolates; two of them contained plasmids whose molecular weight varied from low to high. The characterization of LT- and ST-toxin-producing E. coli strains displaying multiresistance and containing plasmids suggests the need for tightening current control measures for the use of antimicrobials

Isolation of Salmonella enterica in opossum (Didelphis aurita and Didelphis albiventris) of the São Paulo State, Brazil

No Brasil, não há relato de estudos de Salmonella em gambás, sendo assim, este trabalho tem por objetivo determinar a frequência de isolamento de Salmonella enterica em gambás (D. aurita e D. albiventris) no Estado de São Paulo. No período de janeiro de 2005 a dezembro de 2006, foram necropsiados 106 D. aurita e 40 D. albiventris e colhidos fragmentos de intestinos delgado, grosso e suabe da cloaca. As amostras foram plaqueadas diretamente em ágar Mac Conkey, paralelamente suspendidas nos caldos Rappaport-Vassiliadis e Tetrationato e posteriormente plaqueados em ágar XLT4. As colônias sugestivas de Salmonella foram confirmadas através de provas bioquímicas e sorotipagem. Encontrou-se Salmonella enterica em 17,0% (18/106) dos D. aurita. Destes, 50% apresentaram positividade no intestino delgado (ID), 88,9% no intestino grosso (IG) e 66,7% na cloaca. Da espécie S. enterica, as subespécies encontradas foram: diarizonae (11,1%) houtenae e enterica (5,5% cada um); enquanto da subespécie S. enterica enterica os sorotipos foram Newport (83,3%), Typhimurium e Cerro (5,5% cada um). Nos D. albiventris, 17,5% (7/40) eram positivos, sendo que se encontraram 42,8% no ID, 85,7% no IG e 71,4% na cloaca. O sorotipo mais prevalente também foi Newport (71,4%), seguido por Typhimurium, Bareilly e Thompson (14,3% cada um). Através dos resultados obtidos neste estudo pode-se comprovar a presença de Salmonella enterica no trato intestinal de gambás no Brasil.In Brazil there is not report of Salmonella in opossum, so then, the objective of this study is to determine the isolation frequency of Salmonella enterica in opossum in São Paulo State, Brazil. From January 2005 to December 2006, 106 D. aurita and 40 D. albiventris were necropsied and samples from small and large intestine and cloacal swab were collected. These samples were submitted to direct plating in Mac Conkey agar and parallel suspension in Rappaport-Vassiliadis and Tetrationate broths with posterior streaking in XLT4 agar. The characterization of the isolates was done through biochemical tests and serotyping. Salmonella enterica was found in 17.0% (18/106) of the D. aurita; 50% presented the bacteria in the small intestine (SI), 88.9% in the large intestine (LI) and 66.7% in the cloaca. Of the S. enterica were found the subspecies: diarizonae (11.1%), enterica and houtenae (5.5% each); and the serotypes of the S. enterica enterica were Newport (83.3%), Typhimurium and Cerro (5.5% each). In the D. albiventris 17.5% (7/40) were positive; 42.8% in the SI, 85.7% in the LI and 71.4% in the cloaca. Newport (71.4%) was also the most frequent serotype and the second were Typhimurium, Bareilly and Thompson (14.3% each). The presence of Salmonella enterica in the intestines of opossums in Brazil was proved

Uso de extrato de plantas medicinais (Psidium guajava Linn. e Carica papaya Linn.) frente a bactérias isoladas de pescado, causadoras de diarréias infantis

Out of the twenty-four samples of shrimp and fish muscle used for this study, twelve were collected near a large marine sewer for waste disposal, 3 km off the coast of Fortaleza (Brazil) and used for the isolation of E. coli. Other twelve were collected at the Mucuripe fresh fish market (Fortaleza, Brazil) and used for the isolation of Staphylococcus aureus. Ethanol, water and acetone-diluted extracts of guava and papaya leaf sprouts were tested on the bacteria in order to verify their microbicidal potential. The E. coli strains used in the trials were rated LT positive. The papaya leaf extracts (Carica papaya Linn) showed no microbicidal activity while the guava sprout extracts (Psidium guajava Linn) displayed halos exceeding 13 mm for both species, an effect considered to be inhibitory by the method employed. Guava sprout extracts by 50% diluted ethanol most effectively inhibited E. coli (EPEC), while those in 50% acetone were less effective. It may be concluded that guava sprout extracts constitute a feasible treatment option for diarrhea caused by E. coli or by S. aureus-produced toxins, due to their quick curative action, easy availability in tropical countries and low cost to the consumer.Foram coletadas doze amostras de camarão e peixes nas imediações do interceptor oceânico, em Fortaleza e igual número na Feira de pescado do Mucuripe, Fortaleza, para isolamento de E. coli e Staphylococcus aureus, respectivamente. Extratos aquosos, alcoólicos e cetônicos de broto de goiabeira e de folha de mamão foram testados frente às bactérias para se verificar suas ações antibióticas. As cepas de E. coli utilizadas nos ensaios foram as classificadas como LT positivas. Os extratos de folhas de mamão (Carica papaya Linn) não revelaram quaisquer atividades antibióticas enquanto que os preparados com broto de goiabeira (Psidium guajava Linn) apresentaram halos sempre >;13 mm para as duas espécies, considerados como de inibição pelo método empregado. Os extratos de broto de goiabeira que apresentaram melhores resultados frente às cepas de E. coli ETEC foram os alcoólicos a 50% seguido do cetônico também a 50%. Concluímos que nos tratamentos de diarréias causadas por E. coli ou por toxinas elaboradas por S. aureus o extrato de brotos de goiabeira é uma opção devido a sua pronta ação curativa, seu fácil cultivo nos países tropicais e ao seu baixo valor aquisitivo

Vibrio spp. e Salmonella spp. em caranguejos, Ucides cordatus

The presence of Vibrio spp. and Salmonella spp. in crabs marketed at the Bezerra de Menezes Ave., Fortaleza, State of Ceará, Brazil, was assessed between February and May, 2003. The number of individuals sampled in each one of the fifteen weekly samplings ranged between four and eight. Seven strains of Salmonella, from four different samplings, were identified, being five of them identified as serotype S. Senftenberg and two as S. Poona. All strains of Salmonella were sensitive to the tested anti-microbial drugs, with the exception of tetracycline and nalidixic acid, for which an intermediary sensibility was found. The MPN's for Vibrio ranged between 110/g and 110,000/g. Of the forty five Vibrio strains isolated from the crab samples, only 10 were identified up to the species level: two V. alginolyticus and eight V. parahaemolyticus. Bacteria belonging to the Enterobacteriaceae and Pseudomonaceae families were also identified, namely Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, Pantoea agglomerans and Pseudomonas aeruginosa. The proper cooking of the animals is recommended in order to avoid problems for the consumers of this crustacean.Foram pesquisadas a presença de Vibrio spp. e de Salmonella spp. em caranguejos comercializados na Av. Bezerra de Menezes, Fortaleza, Ceará, Brasil, no período entre fevereiro e maio de 2003. O número de indivíduos em cada, das quinze coletas realizadas, semanalmente, variava entre quatro e oito dependendo do tamanho dos animais, totalizando um número de 90 (noventa) animais examinados. Foram identificadas sete cepas de Salmonella spp. provenientes de quatro coletas: cinco foram identificadas como sorovar S. Senftenberg e duas como S. Poona. Todas as cepas de Salmonella, isoladas das amostras de caranguejos, apresentaram sensibilidade aos antimicrobianos testados, com exceção de tetraciclina e ácido nalidíxico para os quais elas apresentaram uma sensibilidade intermediária. Os NMPs para Vibrio spp. variaram entre 110 e 110.000/g. Das quarenta e cinco cepas de Vibrio spp. isoladas das amostras de caranguejo, foram identificadas, até espécie, somente 10: duas de V. alginolyticus e oito de V. parahaemolyticus. Foram também identificadas bactérias pertencentes às famílias Enterobacteriaceae e Pseudomonadaceae: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae, Pantoea agglomerans e Pseudomonas aeruginosa. Recomenda-se que a cocção dos animais seja bem feita a fim de se evitar problemas para os consumidores dos crustáceos

Vibrio vulnificus: um fator de risco para a saúde do consumidor de camarões

Over the last 30 years, a number of Vibrio species found in the aquatic environment have been indicated as cause of disease in human beings. Vibrio vulnificus is an emergent pathogen, an invasive and lethal marine bacterium related to wound infection and held accountable for gastroenteritis and primary septicemia. It occurs quite frequently in marine organisms, mainly in mollusks. This study aimed at isolating and identifying strains of V. vulnificus based upon the analysis of twenty samples of seabob shrimp, Xiphopenaeus kroyeri (Heller), purchased at the Mucuripe fish market (Fortaleza, Brazil). TCBS agar was used to isolate suspect strains. Seven of twenty-nine strains isolated from six different samples were confirmed as such by means of biochemical evidence and thus submitted to biological assays to determine their virulence. The susceptibility of the V. vulnificus strains to a number of antibiotics was tested. None of the V. vulnificus strains showed signs of virulence during a 24-hour observation period, possibly due to the shedding of the capsules by the cells. As to the results of the antimicrobial susceptibility tests, the seven above-mentioned V. vulnificus strains were found to be sensitive to nitrofurantoin (NT), ciprofloxacin (CIP), gentamicin (GN) and chloramphenicol (CO) and resistant to clindamycin (CI), penicillin (PN) and ampicillin (AP).Nos últimos 30 anos várias espécies de Vibrio que vivem em ambientes aquáticos têm sido proclamadas como vetor de doenças que atingem o ser humano. Vibrio vulnificus é um patógeno de origem marinha, com potencial invasor, podendo ser letal. Tem sido relacionado com feridas infeccionadas e responsável por incontáveis casos de gastrenterites e septicemia primária. Sua frequência em organismos marinhos é considerada alta, principalmente em moluscos. Este trabalho objetivou isolar e identificar cepas de Vibrio vulnificus a partir de 20 amostras de camarão sete- barbas, Xiphopenaeus kroyeri (Heller), comercializado na feira de pescado do Mucuripe, Fortaleza, Ceará, Brasil. O ágar TCBS foi usado para isolamento primário e as cepas confirmadas através de provas bioquímicas eram submetidas a testes de virulência em camundongos. Posteriormente as cepas identificadas como Vibrio vulnificus foram testadas em relação à susceptibilidade a antimicrobianos. De 29 cepas, isoladas de 20 amostras, sete (35%), originadas de sete diferentes amostras, foram confirmadas como Vibrio vulnificus, significando alta percentagem de amostras contaminadas. Nenhuma das cepas apresentou virulência após 24 horas de observação, possivelmente devido à perda das cápsulas pela célula. As sete cepas de Vibrio vulnificus mostraram-se sensíveis a nitrofurantoína (NT), ciprofloxacina (CIP), Gentamicina (GN), Cloranfenicol (CO), mas resistentes a Clindamicina (CI), Penicilina (PN) e a Ampicilina (AP)

CONDIÇÃO DE SAÚDE DAS TARTARUGAS MARINHAS DO LITORAL CENTRO-NORTE DO ESTADO DO RIO DE JANEIRO, BRASIL: AVALIAÇÃO SOBRE A PRESENÇA DE AGENTES BACTERIANOS, FIBROPAPILOMATOSE E INTERAÇÃO COM RESÍDUOS ANTROPOGÊNICOS

HEALTH STATUS OF SEA TURTLES FROM THE CENTRAL-NORTH COAST OF RIO DE JANEIRO STATE, BRAZIL: EVALUATION ABOUT THE PRESENCE OF BACTERIAL AGENTS, FIBROPAPILLOMATOSIS AND INTERACTION WITH ANTHROPOGENIC DEBRIS.  In Brazil, there are five species of sea turtles, commonly known as loggerhead (Caretta caretta), green turtle (Chelonia mydas), hawksbill (Eretmochelys imbricata), olive ridley (Lepidochelys olivacea) and leatherback turtle (Dermochelys coriacea). All are considered endangered under national and international criteria. Human action has caused many impacts on marine ecosystem and threatened its biodiversity. Several microorganisms inhabit this ecosystem and are able to cause infectious diseases. Therefore, marine environment changes contribute to the emergence of diseases, such as fibropapillomatosis in sea turtles. The ingestion of solid anthropogenic debris is another important menace to many marine organisms. In this context, the present study aims to investigate the presence of bacterial agents of the Vibrionaceae and Aeromonadaceae Families, the occurrence of fibropapillomatosis, and the interaction with anthropogenic debris in stranded sea turtles found along the central-north coast of Rio de Janeiro state, and thus assess the health status of these organisms and their environment. For this, beach monitoring was made at intervals of 15 days along the study area by GEMM-Lagos / Oceanites staff in 2009. Sea turtles were identified at species level and checked for the presence of external tumors. Specimens, when fresh, were necropsied and gastrointestinal contents screened to evaluate the presence of anthropogenic debris. Swabs were also collected for bacteriological analysis conducted by LRNCEB / FIOCRUZ -- an innovative survey for sea turtles in Brazil. 143 sea turtles were found stranded in the study area, and only four of the 68 analyzed turtles had tumors. 44% of the 32 gastrointestinal contents screened had anthropogenic debris, indicating a potential cause of sea turtles' death in the region, specially of Chelonias mydas. 88% of swabs were positive for Vibrio and 53% for Aeromonas. Thus, sea turtles, as sentinels of marine ecosystem health, indicate the environmental degradation of the central-north coast of Rio de Janeiro state, prompting the need for urgent mitigation actions. Keywords: Marine chelonians; pathogenic microorganisms; tumors; plastic debris; environmental health.CONDICIONES DE SALUD DE LAS TORTUGAS MARINAS DEL LITORAL CENTRO-NORTE DEL ESTADO DE RIO DE JANEIRO, BRASIL: EVALUACIÓN DE LA PRESENCIA DE AGENTES BACTERIANOS, FIBROPAPILOMATOSIS E INTERACCIÓN CON RESIDUOS ANTROPOGÉNICOS. En Brasil, se encuentran cinco especies de tortugas marinas, conocidas popularmente como cabezona (Caretta caretta), verde (Chelonia mydas), carey (Eretmochelys imbricata), golfina (Lepidochelys olivacea) y baula (Dermochelys coriacea). Todas son consideradas amenazadas de extinción en los ámbitos nacional e internacional. La acción humana ha causado numerosos impactos sobre el ecosistema marino y amenazado su diversidad biológica. Varios microorganismos habitan este ecosistema y son capaces de causar enfermedades infecciosas. Por esto, cambios en el ambiente marino contribuyen al surgimiento de enfermedades, como la fibropapilomatosis en tortugas marinas. La ingesta de residuos sólidos de origen antropogénico constituye otra importante amenaza a varios organismos marinos. En este contexto, el presente trabajo pretende investigar la presencia de agentes bacterianos de las familias Vibrionaceae y Aeromonadaceae, la ocurrencia de casos de fibropapilomatosis y de interacción con residuos sólidos antropogénicos en los especímenes de tortugas marinas encontrados encallados a lo largo del litoral centro-norte del estado de Rio de Janeiro, y de esta forma evaluar las condiciones de salud de estos organismos y del ambiente que frecuentan. Para esto, fueron realizados monitoreos quincenales de playa a lo largo del área de estudio por el equipo de GEMM-Lagos /Oceanites durante el año de 2009.Las tortugas fueron determinadas taxonómicamente y examinadas para detectar la presencia de tumores externos. Los especímenes, cuando frescos, fueron sometidos a necropsia y los contenidos gastrointestinales clasificados para evaluar la presencia de residuos antropogénicos. También fueron realizados frotis (swabs) para análisis bacteriológicos, conducidos por el LRNCEB / FIOCRUZ -- un levantamiento inédito para las tortugas marinas del Brasil. 143 tortugas marinas fueron encontradas encalladas en el área de estudio y apenas cuatro de las 68 tortugas examinadas presentaron tumores. 44% de los 32 contenidos gastrointestinales analizados presentaron residuos antropogénicos, indicando una causa potencial de muerte de las tortugas marinas en la región, principalmente de Chelonias mydas. De los frotis analizados, 88% presentaron resultado positivo para  Vibrio y 53% para Aeromonas. Así, las tortugas marinas, como indicadores de la salud del ecosistema marino, ponen en evidencia la degradación ambiental del litoral centro-norte del estado de Rio de Janeiro, alertando sobre la necesidad de acciones mitigadoras urgentes. Palabras clave: Quelonios marinos; microorganismos patógenos; tumores; residuos plásticos; salud ambiental.No Brasil, ocorrem cinco espécies de tartarugas marinhas, conhecidas popularmente como cabeçuda, verde, tartaruga-de-pente, oliva e tartaruga-de-couro. Todas são consideradas ameaçadas de extinção em âmbito nacional e internacional. A ação humana tem causado inúmeros impactos no ecossistema marinho e ameaçado sua diversidade biológica. Vários microrganismos habitam esse ecossistema e são capazes de causar doenças infecciosas. Por isso, mudanças do ambiente marinho contribuem para o surgimento de doenças, como a fibropapilomatose em tartarugas marinhas. A ingestão de detritos sólidos de origem antropogênica constitui outra importante ameaça a vários organismos marinhos. Neste contexto, o presente trabalho pretende investigar a presença de agentes bacterianos das Famílias Vibrionaceae e Aeromonadaceae, a ocorrência de casos de fibropapilomatose e de interação com resíduos sólidos antropogênicos nos espécimes de tartarugas marinhas encontrados encalhados ao longo do litoral centro-norte do estado do Rio de Janeiro, e dessa forma avaliar a condição de saúde desses organismos e do ambiente que frequentam. Para isso, foram realizados monitoramentos de praia quinzenais ao longo da área de estudo pela equipe do GEMM-Lagos / Oceanites no ano de 2009. As tartarugas foram identificadas quanto a espécie e averiguadas em relação à presença de tumores externos. Os espécimes, quando frescos, foram necropsiados e os conteúdos gastrointestinais triados para avaliar a presença de resíduos antropogênicos. Também foram coletados swabs para análises bacteriológicas conduzidas pelo LRNCEB / FIOCRUZ -- um levantamento inédito para as tartarugas marinhas do Brasil. 143 tartarugas marinhas foram encontradas encalhadas na área de estudo e apenas quatro apresentaram tumores. Essa baixa incidência pode ser explicada pelo avançado estado de decomposição da maioria dos espécimes. 43,7% dos conteúdos gastrointestinais triados apresentaram resíduos antropogênicos, indicando uma potencial causa de morte das tartarugas marinhas na região, principalmente de C. mydas. Dos swabs analisados, 88,2% apresentaram resultado positivo para Vibrio e 52,9% para Aeromonas. Assim, as tartarugas marinhas, como sentinelas da saúde do ecossistema marinho, evidenciam a degradação ambiental do litoral centro-norte do estado do Rio de Janeiro, alertando para a necessidade de ações mitigadoras urgentes