Looking for mechanisms regulating lung growth in CDH: rat and human studies

Tese de Doutoramento em Ciências da SaúdeLung development is a complex process that involves a coordinated orchestration of several signalling pathways and mechanisms in order to growth normally. Pulmonary hypoplasia emerges as a result of foetal abnormal lung development and consequently it leads to high rates of morbidity and mortality. The understanding of normal and abnormal foetal lung growth has became clinical relevant because it can offer new perspectives in the treatment of lung diseases. Regardless the recent advances in the knowledge of lung development, there are still a lot of mechanisms that need to be elucidated and investigated. The main aim of this PhD dissertation was to investigate new physiological regulators of foetal lung growth in order to find a prenatal therapy to revert foetal lung hypoplasia in Congenital Diaphragmatic Hernia (CDH) context. Moreover, two already well-known and studied signalling pathways (retinoic acid and neuroendocrine factors) were further investigated and an important link between them was discovered/established. Using molecular/histological techniques and gain-loss of function studies with nitrofen rat model and human samples we tried to achieve our goals. In this PhD thesis, it was demonstrated that ephrins B1, -B2 and eph B4 receptor were expressed during all foetal lung developmental stages. Moreover ephrin B1 and eph B4 receptor mainly presented mesenchymal expressions whereas ephrin B2 presented an epithelial expression. Ephrin B1 and –B2 administration contributed to increase foetal lung branching, but the observed increase has not significant biological meaning. Another interesting finding was the importance of microRNAs in human CDH. MicroRNA 10a and microRNA 200b are up-regulated in CDH human lungs when compared to normal lungs and they are also changed in the tracheal fluid of CDH babies that respond or did not respond to FETO. In FETO responders, after removing the plug, tracheal fluid presented higher expression of miR-10a and miR-200 family when compared to non-responders. Moreover, in responders the expression of those microRNAs increased significantly after removing the plug when compared to the expression observed at the moment of plug insertion. In line with the second aim mentioned above, we decided to look into two already known and apparently unrelated signalling pathways and discover a link between them because both of them are altered in CDH (retinoic acid was down-regulated and neuroendocrine factors were up-regulated). We found that neuroendocrine factors act as regulators of lung growth, sensitizing the lungs to the action of retinoic acid through RAR α and RAR γ up-regulation. To conclude, in this thesis, we showed that ephrins seem to be strong candidates to act as morphogens or being involved in vascular regulation instead of being a promisor mechanism to regulate lung growth. Additionally, we discovered that microRNAs are an important tool as a prognostic biomarker for CDH new-borns outcome. Moreover, we established a novel physiological link showing that neuroendocrine factors and retinoic acid signalling pathways interact with each other during foetal lung growth regulation. With this work, new insights into normal and abnormal foetal lung development were brought, discovering novel mechanisms to further explore as potential therapeutic targets into CDH field.O desenvolvimento pulmonar é um processo complexo que envolve a combinação e funcionamento coordenados de várias vias e mecanismos de sinalização, a fim do crescimento pulmonar normal. A hipoplasia pulmonar surge como resultado do desenvolvimento anormal do pulmão fetal estando associada a elevadas taxas de morbilidade e mortalidade. A compreensão do crescimento do pulmão fetal normal e anormal, tornou-se clinicamente relevante pelo facto de poder oferecer novas perspetivas no tratamento de doenças pulmonares. Independentemente dos recentes avanços no conhecimento do desenvolvimento pulmonar, ainda há muito que é preciso fazer, ser elucidado e investigado. O objetivo principal desta dissertação de doutoramento foi investigar novos reguladores fisiológicos de crescimento do pulmão fetal, a fim de encontrar uma terapia pré-natal para reverter a hipoplasia pulmonar fetal no contexto da Hérnia Diafragmática Congénita (HDC). Por outro lado, foi descoberto e estabelecido um elo de ligação entre duas vias de sinalização (via do ácido retinóico e fatores neuroendócrinos) já bem conhecidas e estudadas como sendo importantes ao longo do desenvolvimento pulmonar fetal. Foram utilizadas técnicas moleculares/histológicas e estudos de ganho-perda de função com o modelo do nitrofeno em rato e com amostras humanas. Nesta tese de doutoramento, foi demonstrado que as efrinas B1,-B2 e o recetor eph B4 são expressos durante todas as fases de desenvolvimento pulmonar fetal. Além disso, a efrina B1 e o recetor eph B4 expressaram-se essencialmente no mesenquima enquanto que a efrina B2 apresentou ter uma expressão epitelial. A administração de efrina B1 e –B2 em culturas de explantes pulmonares, contribuiu para aumentar a ramificação pulmonar fetal, embora o aumento observado não tenha significado biológico relevante. Outro achado interessante ao longo deste trabalho de Doutoramento, foi a importância dos microRNAs na fisiopatologia da HDC em humanos. O microRNA 10a e o microRNA 200b estão aumentados em pulmões humanos com HDC quando comparados com pulmões normais e a sua expressão está também alterada no fluido traqueal em crianças que sobrevivem ou morrem à oclusão fetal da traqueia (FETO). Nos pacientes que sobrevivem depois do FETO, após se remover o balão da traqueia, o fluido traqueal apresentou uma maior expressão de miR-10a e da família do miR-200 quando comparados com os não sobreviventes. Por outro lado, nos sobreviventes, a expressão desses microRNAs aumentou significativamente após a remoção do balão quando comparada com a expressão observada no momento da inserção do balão na traqueia. Em linha com o segundo objetivo acima mencionado, decidimos revesitar duas vias de sinalização já conhecidas e aparentemente não relacionadas, e descobrir uma ligação entre elas, pelo facto de ambas estarem alteradas na HDC (défice de ácido retinóico e aumento dos fatores neuroendócrinos nomeadamente da bombesina e da grelina). Descobrimos que os fatores neuroendócrinos atuam como reguladores do crescimento pulmonar, sensibilizando os pulmões para a ação do ácido retinóico através do aumento da expressão dos seus recetores (RAR α e RAR γ). Para concluir, nesta tese, mostramos que as efrinas parecem ser fortes candidatos para atuar como morfogéneos ou como fatores importantes na regulação vascular ao invés de serem um mecanismo importante de regulação do crescimento pulmonar. Por outro lado, descobrimos que os microRNAs são uma ferramenta importante que poderá vir a ser utilizada como um biomarcador de prognóstico em crianças com HDC. Adicionalmente, estabelecemos uma nova ligação fisiológica mostrando que os fatores neuroendócrinos e a via de sinalização do ácido retinóico interagem entre elas durante a regulação do crescimento fetal pulmonar. Com este trabalho, hipotetizámos novas abordagens sobre o desenvolvimento/regulação do pulmão fetal normal e anormal, descobrindo-se novos mecanismos para continuar a explorar como potenciais alvos terapêuticos para o tratamento da HDC

Estrategias para o mercado de cosmeticos no Brasil em tempos de crise

Orientadora : Danielle MantovaniTrabalho de Conclusão de Curso (especialização) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Sociais Aplicadas, Curso de Especialização MBA em MarketingInclui referênciasResumo: O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de fornecer um análise do comportamento do consumidor e das estratégias de marketing utilizadas pelas empresas de cosméticos brasileira buscando entender e sugerir a melhor estratégia em tempos de crise no Brasil. O trabalho apresenta-se sob a modalidade de pesquisa exploratória, qualitativa, mediante análise documental de dados secundários, que significa que foram coletados e escritos por pessoas que não estavam presentes por ocasião de sua ocorrência. A pesquisa documental foi baseada em literatura técnica, reportagens, relatórios, sites especializados no assunto e periódicos sobre o tema. O trabalho passa por uma revisão do refencial teórico, através de análise conceitual dos assuntos comportamento do consumidor e estratégias de marketing. O mercado de cosméticos vem crescendo vigorosamente nos últimos anos e o Brasil aparece na liderança de vários itens no ranking mundial. Entretanto, diante do cenário de instabilidade econômica do país, é importante encontrar formas de manter o padrão de consumo ou conquistar novos nichos de mercado. Como resultado da análise dos dados secundários e referencial teórico, propôs-se uma estratégia para as empresas de cosméticos nacionais manterem-se rentáveis mesmo em momentos em que o país enfrenta séria crise econômic

INDIVIDUALS WITH MULTIPLE SCLEROSIS PRESENT LOWER VELOCITY AND SIMILAR CADENCE TO HEALTHY PEERS

Purpose: To investigate velocity and cadence in people with multiple sclerosis (MS) submitted to different walking tasks, and to compare the results with those found in healthy control peers. Methods: One hundred thirty-three participants, sixty-six with MS and sixty-seven without MS, were enrolled in this study. Subjects were divided into three groups according to clinical condition and disease severity. Group 1 was formed by forty mild stage subjects with MS, group 2 was composed by twenty-six moderate stage subjects with MS and group 3 was formed by sixty-seven healthy control peers. Participants’ velocity (meters/second) and cadence (steps/minute) were assessed during a walking test, using a two-dimensional gait system. The tests were applied with motor and cognitive distractors. Statistical procedures involved repeated measures analyses of variance to test main effects for group and task. Significance was set at 5%. Results: The results showed velocity as being task- and group- dependent, id est, the impact on the outcome differs according to clinical condition (p=0.001; power of 99.9%) and to task complexity (p=0.001; power of 99.9%).  Cadence, differently, showed to be task- but not group-dependent. That is, complex tasks affect cadence in both groups (p=0.001; power of 99.9%) but on a similar basis (p=0.290; power of 26.8%). Conclusion: The results suggest that in MS clinical condition and disease severity impact gait velocity on a bigger extend than cadence. Further studies should be carried out to investigate the adaptation mechanisms that occur in MS during challenging mobility situations.Objetivo: Investigar velocidade e cadência em pessoas com esclerose múltipla (EM) submetidas a diferentes tarefas de caminhada e comparar resultados com os encontrados em controles saudáveis. Métodos: 133 participantes, 66 com EM e 67 sem EM, foram incluídos neste estudo. Os indivíduos foram divididos em três grupos de acordo com o quadro clínico e a gravidade da doença. O grupo 1 foi formado por 40 indivíduos com EM em estágio leve, o grupo 2 foi composto por 26 indivíduos com EM em estágio moderado e o grupo 3 foi formado por 67 sujeitos controles saudáveis. A velocidade dos participantes (m/s) e cadência (passos/minuto) foram avaliados durante um teste de caminhada, usando um sistema de marcha bidimensional. Os testes foram aplicados com distratores motores e cognitivos. Para a análise estatística utilizou-se o teste de  análise de variância de medidas repetidas, sob significância de 5%. Resultados: Os resultados mostraram que velocidade depende da tarefa e do grupo, isto é, o impacto difere de acordo com a condição clínica (p=0,001; poder: 99,9%) e tarefa (p=0,001; poder: 99,9%). A cadência mostrou-se dependente da tarefa mas não do grupo. Ou seja, tarefas complexas afetam a cadência em ambos os grupos (p=0,001; poder: 99,9%), mas de forma semelhante (p=0,290; poder: 26,8%). Conclusão: Os resultados sugerem que a condição clínica e a gravidade da EM afetam a velocidade da marcha em uma extensão maior que a cadência. Novos estudos devem ser realizados para investigar os mecanismos de adaptação que ocorrem na EM durante situações desafiadoras

Consumo/dependência de álcool e resiliência na pessoa idosa com hipertensão arterial sistêmica

Objetivo: evaluar el consumo/dependencia de alcohol y la resiliencia en la persona anciana con hipertensión arterial sistémica y analizar los factores asociados a estas variables. Método: estudio descriptivo-analítico, transversal, cuantitativo, desarrollado con 300 ancianos con hipertensión arterial sistémica de las Estrategias Salud de la Familia, en un municipio del estado de Minas Gerais. Se utilizó un cuestionario semiestructurado, la escala Alcohol Use Disorder Identification Test y la Escala de Resiliencia. Para el análisis de los datos se utilizaron las pruebas Chi-cuadrado de Person, Exacta de Fisher, Alfa de Cronbach, odds ratio y regresión logística. Resultados: 89,3% de los entrevistados hacían uso de bajo riesgo de bebidas alcohólicas. Las variables sexo, intervalo etario, tabaquismo y tiempo de enfermedad, presentaron asociación significativa con el consumo/dependencia de alcohol. Se constató que 36,7% de las personas presentaron resiliencia baja. Las variables renta familiar mensual y propia, escolaridad, actividad física y recreación, presentaron asociación con la resiliencia. No hubo asociación estadísticamente significativa entre el consumo/dependencia de alcohol y la resiliencia. Conclusión: el consumo de alcohol y la resiliencia pueden interferir en la salud física y mental de las personas ancianas con hipertensión arterial sistémica.Objetivo: avaliar o consumo/dependência de álcool e a resiliência na pessoa idosa com hipertensão arterial sistêmica e analisar os fatores associados a essas variáveis. Método: estudo descritivoanalítico, transversal, quantitativo, desenvolvido com 300 idosos com hipertensão arterial sistêmica das Estratégias Saúde da Família em um município de Minas Gerais. Foram utilizados o questionário semiestruturado, a escala Alcohol Use Disorder Identification Test e a Escala de Resiliência. Para análise dos dados, utilizaram-se os testes Qui-quadrado de Person, Exato de Fisher, Alfa de Cronbach, odds ratio e regressão logística. Resultados: 89,3% dos entrevistados fazem uso de baixo risco de bebidas alcóolicas. As variáveis sexo, faixa etária, tabagismo e tempo de doença apresentaram associação significativa com o consumo/dependência de álcool. Constatou-se que 36,7% das pessoas apresentaram resiliência baixa. As variáveis renda familiar mensal e própria, escolaridade, atividade física e de lazer apresentaram associação com a resiliência. Não houve associação estatisticamente significativa entre o consumo/dependência de álcool e a resiliência. Conclusão: o consumo de álcool e a resiliência podem interferir na saúde física e mental das pessoas idosas com hipertensão arterial sistêmica.Objective: to evaluate alcohol consumption/dependence and resilience in older adults with high blood pressure and to analyze the factors associated with these variables. Method: a descriptive, cross-sectional, quantitative study developed with 300 older adult patients with high blood pressure from Family Health Strategy units in a municipality of Minas Gerais, Brazil. A semistructured questionnaire called the Alcohol Use Disorder Identification Test and the Resilience Scale were used. Data were analyzed using the Pearson’s chi-square test, Fisher’s exact test, Cronbach’s alpha, odds ratio and logistic regression. Results: 89.3% of the interviewees were low-risk for consuming alcoholic beverages. The variables gender, age, smoking and disease duration were significantly associated with alcohol consumption/dependence. 36.7% of the people presented a low resilience. The variables family and individual monthly income, education level, physical activity and leisure had an association with resilience. No statistically significant association was observed between alcohol consumption/dependence and resilience. Conclusion: alcohol consumption and resilience can interfere with the physical and mental health of older adults with high blood pressure

The role of Ephrins-B1 and - B2 during fetal rat lung development

Background/Aims: The knowledge of the molecular network that governs fetal lung branching is an essential step towards the discovery of novel therapeutic targets against pulmonary pathologies. Lung consists of two highly branched systems: airways and vasculature. Ephrins and its receptors, Eph, have been implicated in cardiovascular development, angiogenesis and vascular remodeling. This study aims to clarify the role of these factors during lung morphogenesis. Methods: Ephrins-B1, -B2 and receptor EphB4 expression pattern was assessed in fetal rat lungs between 15.5 and 21.5 days post-conception, by immunohistochemistry. Fetal rat lungs were harvested at 13.5 dpc, cultured during 4 days and treated with increasing doses of ephrins-B1 and -B2 and the activity of key signaling pathways was assessed. Results: Ephrin-B1 presents mesenchymal expression, whereas ephrin-B2 and its receptor EphB4 were expressed by the epithelium. Both ephrins stimulated pulmonary branching. Moreover, while ephrin-B1 did not affect the pathways studied, ephrin-B2 supplementation decreased activity of JNK, ERK and STAT. This study characterizes the expression pattern of ephrins-B1, -B2 and EphB4 receptor throughout rat lung development. Conclusion: Our data highlight a possible role of ephrins as molecular stimulators of lung morphogenesis. Moreover, it supports the idea that classical vascular factors might play a role as airway growth promoters.We would like to thank Luis Martins and Miguel Carneiro for histological technical support and help on animal euthanasia. This project was funded by Fundacao para a Ciencia e a Tecnologia (PTDC/SAU-OBD/108051/2008). PPT was supported by POPH/ FSE by Fundacao para a Ciencia e a Tecnologia (reference SFRH/BD/73660/2010) and FOP was supported by Fundacao para a Ciencia e a Tecnologia (reference UMINHO/BII/172/2009)

A prevalência da toxoplasmose nas gestantes atendidas em um centro de referência no Municipio do Rio de Janeiro: o papel da enfermagem no diagnóstico precoce/ The prevalence of toxoplasmosis in pregnant women attended at a reference center in the Municipality of Rio de Janeiro: the role of nursing in early diagnosis

O presente estudo apresentou os seguintes objetivos: avaliar a prevalência e o risco para toxoplasmose nas gestantes através da sorologia e analisar os cuidados de enfermagem que foram direcionados para estas gestantes. Metodologia: Pesquisa do tipo descritiva, exploratória e documental com abordagem quantitativa. O campo de pesquisa foi uma unidade de referência à gestação de alto risco localizada no município do Rio de Janeiro. Participaram desta pesquisa 100 prontuários elencados de forma aleatória de gestantes que deram entrada na unidade hospitalar no período de dezembro de 2014 a outubro de 2016 para realização do parto. Como critério de inclusão: prontuários de mulheres com idade gestacional confirmada e que passaram pela triagem sorológica para toxoplasmose. Como critério de exclusão: prontuários sem informações sobre o teste sorológico. Utilizada a análise documental como técnica para o tratamento dos dados através de um instrumento de coleta auxiliar e análise crítica do prontuário. O projeto foi submetido e aprovado pelo Comitê de Ética nº 091412/2016 da Plataforma Brasil. Resultados: 67% das gestantes são suscetíveis e 33% apresentaram sororeatividade para toxoplasmose, destas 5% com possível infecção ativa. Das 05 amostras com possível infecção ativa 40% (2) realizaram o tratamento com espiramicina conforme preconizado pelo (MS), no entanto em 60% (3) das amostras não foi identificado informações sobre o tratamento. Apenas 4% (4) das gestantes receberam orientações no pré-natal, nas demais amostras 96% (96) não foram encontrados registros nos prontuários sobre medidas profiláticas ou qualquer outra orientação relativa à toxoplasmose. Conclusão: Esse achado é inquietante visto que o risco de transmissão vertical é elevado em regiões que apresentam prevalência entre 25 e 80%, sendo necessária a capacitação constante dos profissionais de saúde que atuam no pré-natal

Neuroendocrine factors regulate retinoic acid receptors in normal and hypoplastic lung development

Congenital diaphragmatic hernia (CDH) is characterised by a spectrum of lung hypoplasia and consequent pulmonary hypertension, leading to high morbidity and mortality rates. Moreover, CDH has been associated with an increase in the levels of pulmonary neuroendocrine factors, such as bombesin and ghrelin, and a decrease in the action of retinoic acid (RA). The present study aimed to elucidate the interaction between neuroendocrine factors and RA. In vitro analyses were performed on Sprague-Dawley rat embryos. Normal lung explants were treated with bombesin, ghrelin, a bombesin antagonist, a ghrelin antagonist, dimethylsulfoxide (DMSO), RA dissolved in DMSO, bombesin plus RA and ghrelin plus RA. Hypoplastic lung explants (nitrofen model) were cultured with bombesin, ghrelin, bombesin antagonist or ghrelin antagonist. The lung explants were analysed morphometrically, and retinoic acid receptor (RAR) α, β and γ expression levels were assessed via Western blotting. Immunohistochemistry analysis of RAR was performed in normal and hypoplastic lungs 17.5 days post-conception (dpc). Compared with the controls, hypoplastic lungs exhibited significantly higher RARα/γ expression levels. Furthermore considering hypoplastic lungs, bombesin and ghrelin antagonists decreased RARα/γ expression. Normal lung explants (13.5 dpc) treated with RA, bombesin plus RA, ghrelin plus RA, bombesin or ghrelin exhibited increased lung growth. Moreover, bombesin and ghrelin increased RARα/γ expression levels, whereas the bombesin and ghrelin antagonists decreased RARα/γ expression. This study demonstrates for the first time that neuroendocrine factors function as lung growth regulators, sensitising the lung to the action of RA through up-regulation of RARα and RARγ.P.P.-T. was supported by the Fundação para a Ciência e a Tecnologia (ref. SFRH/BD/73660/2010). R.S.M. was supported by the ON.2 SR&TD Integrated Program (N-01-01-01-24-01-07) (ref. UMINHO/BPD/31/2013). The funding bodies had no role in study design, data collection and analysis, decision to publish, or preparation of the manuscript

Consumo/dependência de álcool e resiliência na pessoa idosa: análise reflexiva

Objetivo: Refletir sobre a relação do consumo/dependência de álcool e resiliência na pessoa idosa. Método: Realizada uma reflexão com base nas bibliografias publicadas sobre a pessoa idosa, com foco no consumo/dependência de álcool e na resiliência, utilizando-se os referenciais teóricos da Organização Mundial de Saúde para o consumo/dependência de álcool e de Wagnild e Yong para o contexto da resiliência. Resultados: A reflexão apresenta-se em três vertentes, a primeira ‘O consumo/dependência de álcool pela pessoa idosa’, seguida da ‘Resiliência da pessoa idosa’ e, por último, ‘Resiliência e consumo/dependência de álcool na pessoa idosa’. Conclusão: Durante o acompanhamento da pessoa idosa, cabe ao enfermeiro buscar o conhecimento de seus hábitos de vida e de sua motivação para o enfrentamento das adversidades da vida, para que possa auxiliá-lo na busca do envelhecimento bem-sucedido. Para tanto, a avaliação do consumo de álcool e da resiliência na pessoa idosa constitui-se uma etapa importante e que deve fazer parte da rotina dos profissionais da área da saúde, principalmente da equipe de enfermagem

Consumo/dependência de álcool e resiliência na pessoa idosa: análise reflexiva

Objetivo: Refletir sobre a relação do consumo/dependência de álcool e resiliência na pessoa idosa. Método: Realizada uma reflexão com base nas bibliografias publicadas sobre a pessoa idosa, com foco no consumo/dependência de álcool e na resiliência, utilizando-se os referenciais teóricos da Organização Mundial de Saúde para o consumo/dependência de álcool e de Wagnild e Yong para o contexto da resiliência. Resultados: A reflexão apresenta-se em três vertentes, a primeira ‘O consumo/dependência de álcool pela pessoa idosa’, seguida da ‘Resiliência da pessoa idosa’ e, por último, ‘Resiliência e consumo/dependência de álcool na pessoa idosa’. Conclusão: Durante o acompanhamento da pessoa idosa, cabe ao enfermeiro buscar o conhecimento de seus hábitos de vida e de sua motivação para o enfrentamento das adversidades da vida, para que possa auxiliá-lo na busca do envelhecimento bem-sucedido. Para tanto, a avaliação do consumo de álcool e da resiliência na pessoa idosa constitui-se uma etapa importante e que deve fazer parte da rotina dos profissionais da área da saúde, principalmente da equipe de enfermagem

Difficulties faced by nurses for carrying out risk pre-christ consultations / Dificuldades enfrentadas pelos enfermeiros para a realização das consultas de pré-natal de risco habitual

Objetivo: analisar na literatura as dificuldades enfrentadas pelos enfermeiros na realização das consultas de pré-natal de risco habitual. Método: trata-se de uma revisão integrativa que utilizou a questão norteadora: quais as dificuldades enfrentadas pelos enfermeiros para a realização das consultas de pré-natal de risco habitual (baixo risco)? Aplicou-se como critérios de inclusão o período de corte desde o ano 2000 até 2018, nos idiomas portugués, inglês e espanhol. A busca de artigos realizou-se em seis bases e bancos de dados. Resultados: foram incluídos no estudo 13 artigos, sendo elencados duas categorias: Dificuldades enfrentadas na realização das consultas de pré-natal de risco habitual (baixo risco) e Estratégias adotadas para minimizar as dificuldades enfrentadas na realização das consultas de pré-natal de risco habitual (baixo risco). Identificaram-se 13 dificuldades e 09 estratégias para minimiza-las. Conclusão: É necessário a conscientização dos profissionais enfermeiros quanto a um pré-natal de forma qualificada, humanizada e integral