Detecção e caracterização de marcadores de virulência e perfil de resistência antimicrobiana em Escherichia coli isoladas de ambientes de abatedouros frigoríficos de bovinos e de aves no estado do Goiás e Distrito Federal

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2020.Este estudo teve como objetivo detectar Escherichia coli, em ambientes de abatedouros frigoríficos de bovinos e de aves, localizados em Goiás e no Distrito Federal, bem como promover a pesquisa dos genes marcadores de virulência e de resistência antimicrobiana, caracterizar a resistência fenotípica por realização de testes de sensibilidade aos antimicrobianos, verificar a capacidade de formação de biofilmes in vitro e o sequenciamento total do genoma em isolados de Escherichia coli. Foram analisados um total de 193 amostras de swabs de abatedouros frigoríficos de bovinos e de aves entre os meses de agosto de 2017 e agosto de 2018. Dentre essas, 74 amostras de swabs oriundas de abatedouro frigoríficos de bovinos e 121 de aves. Foram detectados um total de 63 isolados de Escherichia coli, 19 oriundas de abatedouro frigoríficos de bovino e 44 de aves. Em instalações e em equipamentos em abatedouros de bovinos, a E. coli foi encontrada em maior frequência em ralos de sala de abate (38%) e em caixas plásticas brancas (42,9%). Nos abatedouros frigoríficos de aves esta bactéria foi detectada em maior quantidade nos ralos da área limpa na sala de abate (45,8%), e em esteiras de cortes de frango (72,2%). Foram detectados nos isolados de E. coli oriundas de abatedouros frigoríficos de aves e de bovinos os genes codificadores de marcadores de virulência Stx 1 (23,8%), Hyla (9,5%), Saa (3.2%), Eae (4.8%) e Tir β (3,2%). Todas os 63 isolados foram resistentes ao antimicrobiano Vancomicina e Teicoplanina. Em abatedouros frigoríficos de bovinos os isolados de E. coli apresentaram uma maior resistência a Eritromicina (63,2%), Cefazolina (26,3%) e Sulfonamidas (26,3%). Nos isolados de abatedouros frigoríficos de aves os isolados de E. coli foram resistentes ao Ácido nalidíxico (70,5%), Eritromicina (52,3%) Sulfonamidas (43,2%). Os isolados de E. coli oriundos de abatedouros frigoríficos de bovino obtiveram uma presença de genes de resistência aos antimicrobianos Amp(C) de 63,2%, Tet (B) com 52,6%, Sul 1 com (15,8%), Cmla com 5,3%, Aac(3)-I com 5,3% e Tet (A) com 5,3% s. Para os de aves o resultado foi Amp(C) (70,5%), Tet (B) (34,1%), Tet (A) (29,5%), Sul 1 (25%), Cmla (18,2%), Aac(3)-I (9,1%). O sequenciamento completo do genoma dos isolados B2, A56 e A64 permitiu descrever pela primeira vez na região os sorotipos O177:H28 e O71:H48 e observou-se uma capacidade de formação de biofilme fraca em dois dos cinco isolados testados.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).The aim of this work was to detect Escherichia coli, in environments of slaughterhouses for cattle and poultry, located at the Goiás and Federal District areas, as detect virulence and antimicrobial resistance genes, and characterize phenotypic resistance by performing antibiograms, to verify the capacity of biofilm formation in vitro and the total genome sequencing in E. coli isolates. A total of 193 swab samples from slaughterhouses for cattle and poultry were analyzed between August 2017 and August 2018. Among these, 74 swab samples from beef slaughterhouses and 121 from poultry. A total of 63 isolates of E. coli were detected, 19 from beef slaughterhouses and 44 from poultry. In facilities and equipment in cattle slaughterhouses, E. coli was found more frequently in slaughter room drains (38%) and in white plastic boxes (42.9%). In the poultry slaughterhouses, this bacterium was detected in greater quantity in the drains of the clean area at the slaughter room (45.8%), and in the belts of chicken-cutting area (72.2%). The genes encoding virulence markers were, Stx 1 (23,8%), Hyla (9,5%), Saa (3.2%), Eae (4.8%) and Tir β (3,2%), detected in E. coli isolates from both slaughterhouses. All 63 isolates were resistant to the antimicrobial Vancomycin and Teicoplanin. In bovine slaughterhouses, E. coli isolates showed greater resistance to Erythromycin (63.2%), Cefazolin (26.3%) and Sulphonamides (26.3%). In poultry slaughterhouses isolates, they were resistant to Nalidixic acid (70.5%), Erythromycin (52.3%) Sulphonamides (43.2%). E. coli isolates from bovine slaughterhouses obtained a presence of antimicrobial resistance genes from Amp (C) of 63.2%, Tet (B) with 52.6%, Sul 1 with (15.8%), Cmla with 5.3%, Aac(3) -I with 5.3% and Tet (A) with 5.3%. For poultry the result was Amp (C) with 70.5%, Tet (B) (34.1%), Tet (A) (29.5%), Sul 1 (25%), Cmla (18, 2%), Aac(3)-I (9.1%). The complete genome sequencing of B2, A56 and A64, allowed the description of serotypes O177: H28 and O71: H48, those were described for first time in this region. A weak biofilm formation capacity was observed in two of the five isolates tested

Electrocardiographic evaluation in quarter horse foals of different ages

Foram avaliados eletrocardiograficamente 20 potros clinicamente sadios da raça Quarto de Milha, machos e fêmeas, com idade variando de 5 a 13 meses. Os animais foram divididos em quatro grupos de acordo com a idade, sendo o grupo I (GI) composto por animais de com seis meses de idade, o grupo II (GII) por animais com sete meses, o grupo III (GIII) por animais com oito meses e o grupo IV (GIV) por animais com doze meses. O ritmo encontrado em 100% dos potros foi o sinusal. Entretanto. a frequência cardíaca, assim como a amplitude de QRS, Qt e QTc apresentaram uma tendência semelhante de variação com a idade, ou seja aumentando do grupo GI para GII e a partir daí uma redução até o GIV. Nos grupos GI, GII e GIII foi observado onda T única = 1,14 mV; onda P única= 0,38 mV; e outra T única= 0,83 mV respectivamente. Pode-se observar que os resultados demonstraram variação discreta entre os grupos avaliados. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT20 clinically healthy of Quarter Horses foals, males and females, with ages between 5 and 13 months were electrocardiographically evaluated. The animals were divided in four groups according to their age: the group I (GI) comprised animals with six months, the group II (GII) was constituted of animals with seven months. Group III (GIII) and group IV (GIV) contained animals with eight months and twelve months, respectively. The rhythm found in 100% of foals was sinus. However, the heart frequency, as well as the amplitude of QRS, Qt and QTc, increased from group GI to GII. From this point, all these parameters decreased until to GIV. In the groups GI, GII and GIII were observed only one wave T = 1.14 mV, an unique wave P= 0.38 mV and another unique wave T = 0.83 mV, respectively. It was observed that the Results showed a slight variation among the groups

Molecular characterization of Listeria monocytogenes from beef samples and cattle slaughterhouses located in the Federal District, Brazil

Este trabalho teve como objetivo realizar a detecção de cepas de Listeria monocytogenes de cortes cárneos bovinos bem como no ambiente de abatedouros frigoríficos localizados no Distrito Federal, promover a sorotipificação pela reação em cadeia da polimerase (PCR), realizar antibiograma e submeter às cepas à eletroforese de campo pulsado (Pulsed-field gel electrophoresis - PFGE). Foram analisados um total de 125 cortes cárneos bovinos, 45 amostras de swabs de carcaças e 43 amostras de swabs em que foram detectados 13 cepas de Listeria monocytogenes, sendo 11 em cortes cárneos bovinos e 2 swabs de ambiente em um abatedouro frigorifico. Não foram isoladas cepas de swabs de carcaça. Dentre as 13 cepas de Listeria monocytogenes foram encontradas seis cepas do sorotipo 4b, cinco do sorotipo 1/2c e duas cepas do sorotipo 1/2a. Dentre as 11 cepas de L. monocytogenes encontradas em cortes cárneos bovino, uma (9,1%) cepa apresentou resistência a eritromicina, outra (9,1%) cepa a gentamicina e outra a ciprofloxacina (9,1%) e todas as cepas (100%) apresentaram resistência ao Ác. Nalidíxico. Das duas (2) cepas oriundas de ralos de abatedouro frigorífico, todas (100%) apresentaram resistência ao Ác. Nalidíxico e a sulfonamidas. A análise por eletroforese de campo pulsante (PFGE) demonstrou 13 diferentes pulsotipos, em que foram agrupados em 3 diferentes grupos clonais, que coincidentemente se correlacionavam com os 3 diferentes sorotipos encontrados sugerindo uma ampla disseminação desses perfis no Distrito Federal.The aim of the study was the analysis of Listeria monocytogenes strains in beef samples as well as slaughterhouse environment, located in the Federal District, promote serotyping by polymerase chain reaction (PCR), perform antibiotic susceptibility and submit the strains to Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). A total of 125 beef samples were analyzed, 45 samples of carcasses swabs and 43 swab samples. It detected 13 strains of Listeria monocytogenes, 11 in beef samples. and 2 in slaughterhouse environment. No carcass swabs strains were isolated. Among the 13 strains of L. monocytogenes six strains of serotype 4b were found, five serotype 1/2c and two strains of serotype 1/2a. Among the 11 strains of L. monocytogenes found in beef, one (9.1%) strain showed resistance to erythromycin, one (9.1%) strain to gentamicin, one to ciprofloxacin (9.1%) and all strains (100%) were resistant to nalidixic acid. The two strains coming from the slaughterhouse drains, all (100%) were resistant to nalidixic acid and Sulfonamides. The analysis by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) showed 13 different pulsotypes; they were grouped into three different clonal groups, coincidentally correlated with the three different serotypes found, what suggests a widespread dissemination of these profiles in the Federal District, Brazil

Molecular characterization and biofilm-formation analysis of Listeria monocytogenes, Salmonella spp., and Escherichia coli isolated from Brazilian swine slaughterhouses

This study aimed to verify the presence of Listeria monocytogenes, Salmonella spp., and Escherichia coli in two Brazilian swine slaughterhouses, as well as to perform antibiograms, detect virulence and antimicrobial resistance genes, and evaluate the in vitro biofilm-forming capability of bacterial isolates from these environments. One Salmonella Typhi isolate and 21 E. coli isolates were detected, while L. monocytogenes was not detected. S. Typhi was isolated from the carcass cooling chamber’s floor, resistant to several antimicrobials, including nalidixic acid, cefazolin, chloramphenicol, doxycycline, streptomycin, gentamicin, tetracycline, and sulfonamide, and contained resistance genes, such as tet(B), tet(C), tet(M), and ampC. It also showed moderate biofilm-forming capacity at 37°C after incubating for 72 h. The prevalence of the 21 E. coli isolates was also the highest on the carcass cooling chamber floor (three of the four samplings [75%]). The E. coli isolates were resistant to 12 of the 13 tested antimicrobials, and none showed sensitivity to chloramphenicol, an antimicrobial prohibited in animal feed since 2003 in Brazil. The resistance genes MCR-1, MCR-3, sul1, ampC, clmA, cat1, tet(A), tet(B), and blaSHV, as well as the virulence genes stx-1, hlyA, eae, tir α, tir β, tir γ, and saa were detected in the E. coli isolates. Moreover, 5 (23.8%) and 15 (71.4%) E. coli isolates presented strong and moderate biofilm-forming capacity, respectively. In general, the biofilm-forming capacity increased after incubating for 72 h at 10°C. The biofilm-forming capacity was the lowest after incubating for 24 h at 37°C. Due to the presence of resistance and virulence genes, multi-antimicrobial resistance, and biofilm-forming capacity, the results of this study suggest a risk to the public health as these pathogens are associated with foodborne diseases, which emphasizes the hazard of resistance gene propagation in the environment

Electrocardiographic evaluation of horses after polo exercise

A eletrocardiografia pode ser usada para quantificar o treinamento e o desempenho atlético. Pode ainda avaliar a função cardíaca sob efeito do exercício identificando a influência de anomalias cardíacas, assim como os efeitos deletérios do esforço frente à função cardíaca. Considerando a complexidade do esforço físico inerente a cavalos em competições de polo, juntamente com a carência de relatos na literatura sobre a demanda cardíaca resultante. O objetivo deste estudo foi o de identificar e avaliar eletrocardiograficamente os efeitos cardíacos do exercício de polo em equinos de forma a subsidiar dados para a compreensão da demanda fisiológica cardíaca desta modalidade. Foram avaliados 27 equinos praticante de polo em repouso e entre cinco e dez minutos após o exercício. Os resultados obtidos demonstraram que as alterações observadas na duração e amplitude da onda P e duração do intervalo PR e QT foram consideradas fisiológicas em resposta ao aumento da frequência cardíaca. A onda P difásica encontrada em repouso representou hipertrofia atrial e quando bífida representou diferentes pontos de ativação do nó sinoatrial. Como esperado o complexo QRS não sofreu alterações consideráveis entre os dois momentos. O supradesnível do segmento ST e as variações da onda T observadas após o exercício poderiam representar efeito adverso ao miocárdio, entretanto estudos analisando múltiplos fatores são necessários para confirmar esta associação e definir sua real causa. O aumento do QTc sugeriu fadiga miocárdica leve representando alta demanda cardíaca para esta modalidade. O escore cardíaco demonstrou que estes animais estavam dentro do padrão de adaptação cardíaca para um cavalo atleta. A rápida recuperação cardíaca demonstrou bom condicionamento atlético. O marca-passo atrial mutável foi um achado normal encontrado nos equinos de polo. Foi observada baixa incidência de alterações no ritmo cardíaco.Electrocardiography can be used to quantify the training and athletic performance as well as evaluating the cardiac function under the effect of exercise identifying the influence of cardiac anomalies, and deleterious effects of stress ahead of heart function. Considering the complexity of the physical efforts inherent in polo ponies in competitions, together with the lack of reports in the literature, on the demand resulting for heart. The aim of this study was to identify and evaluate the cardiac effects of electrocardiographic exercise in polo horses in order to support data for understanding the physiological cardiac demand of this sport. We evaluated 27 equine practitioner polo at rest and between five and ten minutes after exercise. The results showed that the observed changes in the duration and P wave amplitude and duration of PR and QT interval were considered in physiological response to increased heart rate. The diphasic P wave found at rest and when atrial hypertrophy represented bifida represented different points of activation of the sinoatrial node. As expected, the QRS complex has not undergone major changes. The ST-segment elevation and T wave changes observed after exercise could pose adverse effects to the myocardium, but studies examining multiple factors are needed to confirm this association and define your actual question. The increase in QTc suggested fatigue mild myocardial represented high heart demand for this type of exercise. The heart score showed that these animals were within the pattern of cardiac adaptation to a horse athlete. The rapid recovery of HR showed good conditioning of these animals. The pacemaker migration was observed in most animals proven to be a normal finding horse athlete. We observed a low incidence of changes in cardiac rhythm

A molecular characterization of Listeria monocytogenes from beef samples and cattle slaughterhouses located in Federal District

Este trabalho teve como objetivo realizar a detecção de cepas de Listeria monocytogenes de cortes cárneos bovinos bem como no ambiente de abatedouros frigoríficos localizados no Distrito Federal, promover a sorotipificação pela reação em cadeia da polimerase (PCR), realizar antibiograma e submeter às cepas à eletroforese de campo pulsado (Pulsed-field gel electrophoresis - PFGE). Foram analisados um total de 125 cortes cárneos bovinos, 45 amostras de swabs de carcaças bovinas e 43 amostras de swabs em que foram detectados um total de 13 cepas de Listeria monocytogenes, sendo 11 oriundas de cortes cárneos bovinos e duas cepas oriundas deswabs de ambiente em um abatedouro frigorifico. Não foram detectadas cepas de swabs de carcaça. Dentre as 13 cepas de Listeria monocytogenes foram encontradas seis cepas do sorotipo 4b, cinco do sorotipo 1/2c e duas cepas do sorotipo 1/2a. Dentre as 11 cepas de L. monocytogenes encontradas em cortes cárneos bovino, uma (9,1%) cepa apresentou resistência a eritromicina, outra (9,1%) cepa a gentamicina e outra a ciprofloxacina (9,1%) e todas as cepas (100%) apresentaram resistência ao Ácido Nalidíxico. Das duas (2) cepas oriundas de ralos de abatedouro frigorífico, todas (100%) apresentaram resistência ao Ácido Nalidíxico e a sulfonamidas. A análise por eletroforese de campo pulsante (PFGE) demonstrou 8 diferentes pulsotipos, em que foram agrupados em 3 diferentes grupos clonais, que coincidentemente se correlacionavam com os 3 diferentes sorotipos encontrados sugerindo um ampla disseminação desses perfis no Distrito Federal. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACTThe aim of the present work was the analysis of Listeria monocytogenes strains in beef samples as well as slaughterhouse environment, located in the Federal District, promote serotyping by polymerase chain reaction (PCR), perform antibiotic susceptibility and submit the strains to Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). A total of 125 beef samples were analyzed, 45 samples of carcasses swabs and 43 swab samples. It detected 13 strains of Listeria monocytogenes, 11 in beef samples. and 2 in slaughterhouse environmental. No carcass swabs strains were isolated. Among the 13 strains of Listeria monocytogenes, was found six strains of serotype 4b, five serotype 1/2c and two strains of serotype 1/2a. Among the 11 strains of Listeria monocytogenes found in beef, one (9.1%) strain showed resistance to erythromycin, one (9.1%) strain to gentamicin, one to ciprofloxacin (9.1%) and all strains (100%) were resistant to nalidixic acid. The two (2) strains coming from the slaughterhouse drains, all (100%) were resistant to nalidixic acid and Sulfonamides. The analysis by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) showed 8 different pulsotypes, they were grouped into three different clonal groups, which coincidentally correlated with the three different serotypes found, what suggests a widespread dissemination of these profiles in the Federal District

Main damage found in bovine carcass or organs coming from slaughterhouses locate at Federal District and Goiás areas

Monografia (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Curso de Medicina Veterinária, 2013.O presente trabalho teve como objetivo verificar as principais lesões que ocorrem em órgãos e carcaças de bovinos oriundos de frigoríficos localizados no Distrito Federal e Goiás. A pesquisa foi realizada a partir do acompanhamento das atividades da Inspeção Federal do Serviço de inspeção do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) e do Distrito federal, Diretoria de Inspeção de Produtos de Origem Vegetal e Animal (DIPOVA), durante o período de março a maio de 2012, junto às linhas de inspeções, totalizando 4012 carcaças de animais abatidos, sendo 3419 no estado do Goiás e 593 animais no Distrito Federal. Foram condenados 1411 órgãos na inspeção post mortem, e as principais lesões observadas nos mesmos, do total de 4012 animais abatidos, foram renais, devido à nefrite com 160 (11,34%), pulmonares devido a enfisema com 114 (8,08%) e aspiração de sangue com 97 (6,87%) e de fígado devido a telangiectasia com 51 (3,61%). Não houve nenhuma condenação total ou parcial de carcaça no período analisado. Os resultados observados sugerem que as principais causas de condenação do pulmão e fígado são devido a falhas na tecnologia de abate, atentando assim para necessidade de treinamento dos funcionários da indústria e também a possíveis falhas no manejo no caso das condenações devido à nefrite e outras detectadas nesse estudo.The aim of this work was to verify the lesions that occur in organs and carcasses of cattle from slaughterhouses localized in Federal District and Goiás. This study was performed by monitoring the activities of the Federal Inspection Service of the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA), of the District Board of Inspection Products of Plant and Animal Origin from Federal District area (DIPOVA), and along the lines of inspections of four different cattle slaughterhouses. Three slaughterhouses are located in the state of Goiás and the other one in the Federal District. All activities of this study were done between March and May 2012. Were analysed a total of 4012 carcasses of slaughtered animals. From these, 3,419 carcasses were from the state of Goiás and 593 from the Federal District area. It was condemned a total of 1411 organs in the post mortem inspection procedures, 3419 from the Goiás slaughterhouses and 593 from DF. The major lesions observed in organs of all the 4012 animals slaughtered, were nephritis with 160 (11,34%), in the lung was emphysema with 114 (8,08%) and blood aspiration with 97 (6,87%) and in the liver condemnation was due telangiectasia with 51 (3,61%). No carcass was condemned. The results indicate that the major cause of lung and liver condemnation were caused by failure in the slaughter technology. In the case of contamination and blood aspirations, is important paying attention to an improvement in training of the employees of the slaughterhouse, and also possible failures in the cattle ranching management due to the presence of the lesions detected

Raw gel image of Fig 1 - PCR confirmation of <i>Salmonella</i> Typhi.

Row 1) 100-bp marker (Invitrogen®), row 2) negative control, row 3) positive control for Salmonella spp., 204-bp fragment (ompC primer), row 4) 204-bp fragment (ompC primer) for Salmonella spp., and 738-bp fragment (viaB primer) for Typhi serotype. Visualization on a 2% agarose gel stained with 0.5 μg/mL ethidium bromide in an ultraviolet transilluminator (Major Science®). (PDF)</p

<i>E</i>. <i>coli</i> genes’ detection and antibiograms.

Results of 21 E. coli antibiograms, detection of resistance and virulence genes, and detection points in slaughterhouses A and B.</p