Obtención de una sonda para cuantificar el mARN del factor activador de la transcripción STAT5 en rata

The strategy for cloning a PCR-amplified STAT5 fragment into an expression vector is described. By optimising the magnesium level and the annealing temperature in the PCR reaction, target fragment amplification was achieved, using mouse STAT5b cDNA as a template. The PCR product was cloned and probe identity was confirmed by restriction analysis and sequencing. This probe was used in a solution hybridisation-Rnase protection assay to quantify STAT5 mRNA in female rats' livers and thymus lymphocytes. A higher STAT5 mRNA expression was found in liver.Se describe la estrategia empleada para clonar, en un vector de expresión, un fragmento del gen de STAT5 amplificado por la técnica de PCR. Variando la concentración de magnesio y la temperatura de alineación, se logró amplificar el fragmento deseado a partir de un cADN de STAT5b de ratón. El producto de PCR se clonó y se comprobó la identidad de la sonda mediante análisis de restricción y secuenciación. Esta sonda se usó en el ensayo de protección con ribonucleasa A o hibridización en solución, para cuantificar el mARN de STAT5 en hígado y linfocitos de timo de ratas hembras. Se encontró una mayor expresión del mARN de STAT5 en hígado

Obtención de una sonda para cuantificar el mARN del factor activador de la transcripción STAT5 en rata

Se describe la estrategia empleada para clonar, en un vector de expresión, un fragmento del gen de STAT5 amplificado por la técnica de PCR. Variando la concentración de magnesio y la temperatura de alineación, se logró amplificar el fragmento deseado a partir de un cADN de STAT5b de ratón. El producto de PCR se clonó y se comprobó la identidad de la sonda mediante análisis de restricción y secuenciación. Esta sonda se usó en el ensayo de protección con ribonucleasa A o hibridización en solución, para cuantificar el mARN de STAT5 en hígado y linfocitos de timo de ratas hembras. Se encontró una mayor expresión del mARN de STAT5 en hígado

Papel de las moléculas de adhesión ICAM-1 Y LFA-1 en la patogénesis de la Paracoccidioidomicosis pulmonar experimental

<p class="MsoNormal"><strong><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">Introducción: </span></strong><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">La Paracoccidioidomicosis</span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial"> (PCM), micosis sistémica común en América Latina, es una enfermedad crónica progresiva, causada por la inhalación de las conidias del hongo dimórfico térmico Paracoccidiodes brasiliensis (Pb). La infección pulmonar inicial se caracteriza por una importante respuesta inflamatoria aguda, posteriormente se observa una respuesta inflamatoria crónica y finalmente se desencadena un proceso fibrótico, secuela que se presenta en el 60 - 80 % de los pacientes. El proceso de adhesión de los leucocitos al endotelio se considera un evento temprano y es requisito indispensable para que se produzca la respuesta inflamatoria. Este proceso de adherencia es mediado por moléculas de adhesión como la molécula de adhesión intercelular-1 (ICAM-1) presente en el endotelio que se une a una </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Symbol">b</span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">-2 integrina presente en el leucocito (LFA-1). Dichas moléculas no solo son necesarias para la adhesión de los leucocitos sino también, para su migración y activación. Su importancia ha sido demostrada en otras micosis como la candidiasis, criptococosis, aspergilosis y pneumocistosis. El objetivo del presente estudio es evaluar la expresión a nivel pulmonar de ICAM-1 y LFA-1 en un modelo murino de PCM experimental, establecer su relación con la respuesta inflamatoria observada y determinar el papel que jugarían estas moléculas en la patogénesis de la micosis.</span></p> <p class="MsoNormal"><strong><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">Metodología: </span></strong><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">se utilizan ratones machos isogénicos BALB/c de 6 semanas de edad, los cuales son inoculados intranasalmente (i.n.) con 4 x 10</span><span style="font-size: 4.5pt; font-family: Arial">6 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">conidias de P. brasiliensis, cepa ATCC 60855 o con PBS (grupo control). Para determinar la respuesta inflamatoria y la expresión de ICAM-1 y LFA-1 a nivel pulmonar los animales son sacrificados a los 0, 1, 2, 3, 4, 7, 14 y 28 días post-infección para estudiar en ellos:</span></p> <p class="MsoNormal"><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">a) La celularidad del lavado broncoalveolar (LBA) (# total de células/animal y % de cada tipo celular) y b) la detección por inmunohistoquímica de la expresión de ICAM-1 y LFA-1 en los pulmones de ambos grupos de animales. Para evaluar el papel in vivo del ICAM-1 y LFA-1 en el control de la infección los animales infectados y no infectados serán tratados con anticuerpos monoclonales anti-ICAM-1 y anti-LFA-1. Se registrará diariamente el numero de muertes de cada grupo, por un periodo de cuatro meses y se determinará la diseminación extrapulmonar del hongo mediante el cultivo de órganos (hígado,</span></p> <p class="MsoNormal"><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">bazo y pulmón).</span></p> <p class="MsoNormal"><strong><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">Resultados: </span></strong><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">se obtuvieron un total de 112 LBA distribuidos en 8 grupos con 14 muestras cada uno (8 infectados y 6 controles). El grupo control presento una baja celularidad (0.13 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Symbol">± </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">0.032 x 10</span><span style="font-size: 4.5pt; font-family: Arial">6 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">células) sin existir diferencia significativa entre los diferentes periodos estudiados. Estos LBA presentaron un alto porcentaje de macrófagos ( 97.0 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Symbol">± </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">5.4 %) con escasos PMN (2.4 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Symbol">± </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">5.4 %). Por el contrario, los LBA provenientes de animales infectados presentaron un aumento significativo en su celularidad (1.4 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Symbol">± </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">1.5 x 10</span><span style="font-size: 4.5pt; font-family: Arial">6 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">cels, p= 0.0019) siendo mayor este incremento en las primeras horas ( de 24hs= 1.12 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Symbol">± </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">0.19 x 10</span><span style="font-size: 4.5pt; font-family: Arial">6 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">cels a 96hs= 2.07 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Symbol">± </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">0.19 x 10</span><span style="font-size: 4.5pt; font-family: Arial">6 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">cels) con un pico máximo significativo a las 48hs (4.81 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Symbol">± </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">0.86 x 10</span><span style="font-size: 4.5pt; font-family: Arial">6</span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">, p= 0.0001 ), mostrando un predominio de PMN (92.5 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Symbol">± </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">2.0% y 90.7 </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Symbol">± </span><span style="font-size: 8pt; font-family: Arial">3.0 %) en las primeras 24 y 48hs respectivamente. Estos resultados confirman que la infección por vía inhalatoria con conidias de Pb induce un respuesta inflamatoria aguda inicial en pulmón con un reclutamiento de leucocitos y con predominio de PMN. Estos datos se correlacionarán posteriormente con la expresión a nivel pulmonar de las moléculas de adhesión ICAM-1 y LFA-1.</span></p&gt

Los yacimientos paleontológicos como recurso didáctico II: las visitas virtuales como recursos didácticos en las Ciencias de la Naturaleza.

Depto. de Didáctica de las Ciencias Experimentales , Sociales y MatemáticasFac. de EducaciónFALSEsubmitte