Extracellular extract of Bacillus sp. halotolerant bacterium is cytotoxic to 786.0 human renal adenocarcinoma cell line

The halotolerant microorganisms are considered as a promising source of bioproducts with potential interest for many industrial sectors. The potential of biotechnological applications of these microorganisms highlights the importance of research for biologically active biomolecules. In this context, this study aimed to evaluate the in vitro cytotoxicity of extracellular extract halotolerant bacterium Bacillus sp. in human renal cell carcinoma. The bacteria were obtained from saline Saint Camillus (S 05 ° 03 947 ', N 37 ° 16,318, Natal, Rio Grande do Norte, Brazil) and isolated in BHI medium at 37 °C. Biochemical and morphological analyzes classified the species as halotolerant, supporting up to 13% NaCl. Extracellular extract was obtained by ethyl acetate immersion in culture medium after a 24 h incubation. Cytotoxicity was measured by MTT assay. Cells were cultured for 24 h (5x 103 and 1x 104 cells/well) with different concentrations of the extract. Concentrations of 75 and 100 μg/mL caused severe cytotoxic effects against the cell line 786.0. We conclude that the extracellular extract of Bacillus sp. resulted in severe cytotoxic activity on human kidney cancer cells and not cancerous cells.(Extrato extracelular de bactéria halotolerante Bacillus sp. é citotóxica para linhagem celular 786.0 de adenocarcinoma renal humano). Micro-organismos halotolerantes são considerados como uma fonte promissora para a obtenção de bioprodutos potencialmente promissores em diversos setores industriais. O potencial de aplicações biotecnológicas referente a esses micro-organismos evidencia a importância de pesquisas destinadas à busca de biomoléculas biologicamente ativas. Nesse contexto, esse estudo teve como objetivo analisar in vitro a citotoxicidade de extrato extracelular de bactéria halotolerante Bacillus sp. em linhagem celular de adenocarcinoma humano 786.0. A bactéria foi isolada de habitat salino no Brasil (05º 03,947’S; 37º 16,318’O) usando meios BHI a 37 ºC, aspectos bioquímicos e morfológicos foram verificados e o extrato extracelular foi obtido por imersão do meio de cultura no solvente acetato de etila após um período de 24h de incubação. A citotoxicidade foi verificada pelo ensaio de MTT. Células foram cultivadas por 24h (5x103 e 1x104 células/poço) em diferentes concentrações do extrato. Análises bioquímicas e morfológicas classificaram a espécie como halotolerante, suportando até 13% de NaCl. Duas concentrações do extrato, 75 e 100 μg/mL, mostraram efeitos citotóxicos significativos frente à linhagem celular 786.0

Gossypol Promotes Degeneration of Ovarian Follicles in Rats

The present study aimed to determine if gossypol interferes with ovarian follicles in rats. Twenty-four female Wistar rats were assigned to two equal groups: one control group and the other dosed with gossypol (25 mg/kg/day, subcutaneously) for 15 days. Ovarian follicles were histologically classified according to the stage of development and as normal or atretic. Gossypol treatment reduced the length of estrous with an increase in the duration of the diestrus phase. This compound was responsible for reduced serum levels of T4 and progesterone. Treatment with gossypol was responsible for a significant reduction in the number of normal ovarian follicles and a significant increase in the number of atretic follicles, both in all stages of development. Thus, treatment of rats with gossypol was responsible for reduction in the number of viable follicles and changes in hormone levels that resulted in interference of the estrous cycle

Mitochondria Express α7 Nicotinic Acetylcholine Receptors to Regulate Ca2+ Accumulation and Cytochrome c Release: Study on Isolated Mitochondria

Nicotinic acetylcholine receptors (nAChRs) are ligand-gated ion channels that mediate synaptic transmission in the muscle and autonomic ganglia and regulate transmitter release in the brain. The nAChRs composed of α7 subunits are also expressed in non-excitable cells to regulate cell survival and proliferation. Up to now, functional α7 nAChRs were found exclusively on the cell plasma membrane. Here we show that they are expressed in mitochondria and regulate early pro-apoptotic events like cytochrome c release. The binding of α7-specific antibody with mouse liver mitochondria was revealed by electron microscopy. Outer membranes of mitochondria from the wild-type and β2−/− but not α7−/− mice bound α7 nAChR-specific antibody and toxins: FITC-labeled α-cobratoxin or Alexa 555-labeled α-bungarotoxin. α7 nAChR agonists (1 µM acetylcholine, 10 µM choline or 30 nM PNU-282987) impaired intramitochondrial Ca2+ accumulation and significantly decreased cytochrome c release stimulated with either 90 µM CaCl2 or 0.5 mM H2O2. α7-specific antagonist methyllicaconitine (50 nM) did not affect Ca2+ accumulation in mitochondria but attenuated the effects of agonists on cytochrome c release. Inhibitor of voltage-dependent anion channel (VDAC) 4,4′-diisothio-cyano-2,2′-stilbene disulfonic acid (0.5 µM) decreased cytochrome c release stimulated with apoptogens similarly to α7 nAChR agonists, and VDAC was co-captured with the α7 nAChR from mitochondria outer membrane preparation in both direct and reverse sandwich ELISA. It is concluded that α7 nAChRs are expressed in mitochondria outer membrane to regulate the VDAC-mediated Ca2+ transport and mitochondrial permeability transition

Evaluation of the role of connexin 43 in the development of granuloma, experimentally induced in mice

A doença granulomatosa inflamatória envolve interações coordenadas entre linfócitos, monócitos/macrófagos, células epitelióides, eosinófilos, neutrófilos e fibroblastos. A comunicação intercelular mediada por junções gap, constituídas por conexinas, é responsável pela homeostase tecidual. A Cx43 está presente em células linfóides, células mielóides, fibroblastos e outras. Assim, para compreendermos o possível envolvimento das conexinas no granuloma, nós analisamos o efeito da deleção heterozigótica de uma Gja1 (gene Cx43) na formação e desenvolvimento dos granulomas hepáticos, induzidos por ovos de Schistosoma mansoni. Para tanto, camundongos heterozigotos (Cx43+/-) e selvagens (Cx43+/+) foram infectados com cercárias de Schistosoma mansoni e avaliados nos tempos: 6, 8 e 12 semanas após a infecção. As células dos granulomas apresentaram expressão de conexina 43, notadamente após 12 semanas de infecção. As lesões dos camundongos Cx43+/- apresentaram índice de proliferação reduzido e aumento na deposição de colágeno em fases tardias da doença. Apesar desses achados, não se encontrou redução no tamanho e celularidade das lesões em comparação aos camundongos selvagens. Também não obtivemos diferenças em relação ao hemograma ou população de linfócitos esplênicos CD4, CD8 e CD19. As células peritoneais dos animais de ambos genótipos apresentaram produção de NO e H<SUB2O<SUB2 similares. Contudo, os neutrófilos e monócitos sanguíneos dos animais Cx43+/-, estimulados por PMA, apresentaram aumento significante do burst oxidativo. Concluindo, nossos resultados indicam que a deleção de um alelo do gene da Cx43 modifica claramente a evolução da doença granulomatosa, mostrando um papel desta conexina no desenvolvimento do granuloma.Inflammatory granulomatous disease involves coordinated interactions among lymphocytes, monocytes/macrophages, epithelioid cells, eosinophils, neutrophils and fibroblasts. Intercellular communication mediated by gap junctions constituted of connexins, is responsible for tissue homeostasis. Cx43 is present in lymphoid cells, myelogenous cells, fibroblasts and others. In order to understand the possible involvement of connexins in granuloma, we analyzed the effect of the heterologous deletion of a Gja1 (Cx43 gene) on the formation and development of hepatic granulomas induced by Schistosoma mansoni eggs. Heterozigous (Cx43+/-) and wild-type (Cx43+/+) mice were infected with S. mansoni cercarie and evaluated after 6, 8 and 12 weeks. Granuloma cells express Cx43, with considerable reduction in Cx43+/- mice. Moreover, granuloma cells from Cx43v+/- mice displayed reduced proliferation and increased collagen deposition at late phases of the disease. Despite these findings, no reduction of size or cellularity of the lesions was found in comparison to wild-type mice. We didn?t find differences in relation to blood count and splenic lymphocyte population CD4, CD8 and CD19. Peritoneal cells from animals of both genotypes presented similar production of NO and H2O2. However, blood neutrophils and monocytes from Cx43+/- mice, stimulated by PMA, displayed significantly increased oxidative burst. In conclusion, our results indicate that the deletion of one allele of the Cx43 gene clearly modifies the evolution of a granulomatous disease, supporting a role for this connexin on granuloma development

Evaluation of the role of connexin 43 in the development of granuloma, experimentally induced in mice

A doença granulomatosa inflamatória envolve interações coordenadas entre linfócitos, monócitos/macrófagos, células epitelióides, eosinófilos, neutrófilos e fibroblastos. A comunicação intercelular mediada por junções gap, constituídas por conexinas, é responsável pela homeostase tecidual. A Cx43 está presente em células linfóides, células mielóides, fibroblastos e outras. Assim, para compreendermos o possível envolvimento das conexinas no granuloma, nós analisamos o efeito da deleção heterozigótica de uma Gja1 (gene Cx43) na formação e desenvolvimento dos granulomas hepáticos, induzidos por ovos de Schistosoma mansoni. Para tanto, camundongos heterozigotos (Cx43+/-) e selvagens (Cx43+/+) foram infectados com cercárias de Schistosoma mansoni e avaliados nos tempos: 6, 8 e 12 semanas após a infecção. As células dos granulomas apresentaram expressão de conexina 43, notadamente após 12 semanas de infecção. As lesões dos camundongos Cx43+/- apresentaram índice de proliferação reduzido e aumento na deposição de colágeno em fases tardias da doença. Apesar desses achados, não se encontrou redução no tamanho e celularidade das lesões em comparação aos camundongos selvagens. Também não obtivemos diferenças em relação ao hemograma ou população de linfócitos esplênicos CD4, CD8 e CD19. As células peritoneais dos animais de ambos genótipos apresentaram produção de NO e H<SUB2O<SUB2 similares. Contudo, os neutrófilos e monócitos sanguíneos dos animais Cx43+/-, estimulados por PMA, apresentaram aumento significante do burst oxidativo. Concluindo, nossos resultados indicam que a deleção de um alelo do gene da Cx43 modifica claramente a evolução da doença granulomatosa, mostrando um papel desta conexina no desenvolvimento do granuloma.Inflammatory granulomatous disease involves coordinated interactions among lymphocytes, monocytes/macrophages, epithelioid cells, eosinophils, neutrophils and fibroblasts. Intercellular communication mediated by gap junctions constituted of connexins, is responsible for tissue homeostasis. Cx43 is present in lymphoid cells, myelogenous cells, fibroblasts and others. In order to understand the possible involvement of connexins in granuloma, we analyzed the effect of the heterologous deletion of a Gja1 (Cx43 gene) on the formation and development of hepatic granulomas induced by Schistosoma mansoni eggs. Heterozigous (Cx43+/-) and wild-type (Cx43+/+) mice were infected with S. mansoni cercarie and evaluated after 6, 8 and 12 weeks. Granuloma cells express Cx43, with considerable reduction in Cx43+/- mice. Moreover, granuloma cells from Cx43v+/- mice displayed reduced proliferation and increased collagen deposition at late phases of the disease. Despite these findings, no reduction of size or cellularity of the lesions was found in comparison to wild-type mice. We didn?t find differences in relation to blood count and splenic lymphocyte population CD4, CD8 and CD19. Peritoneal cells from animals of both genotypes presented similar production of NO and H2O2. However, blood neutrophils and monocytes from Cx43+/- mice, stimulated by PMA, displayed significantly increased oxidative burst. In conclusion, our results indicate that the deletion of one allele of the Cx43 gene clearly modifies the evolution of a granulomatous disease, supporting a role for this connexin on granuloma development

EFEITO TOXICOLÓGICO IN VIVO DE EXTRATO HIDROALCOÓLICO DE ARRABIDAEA PULCHRA (CHAM.) SANDWITH

Da A. pulchra, foi isolado ácido ursólico com atividade tripanomisida, tendo desse gênero poucos relatos de estudos fitoquímicos. Para o estudo da toxicidade de A. pulchra, coletou-se o material vegetal na Flona de Açu-RN. O extrato foi obtido por meio de folhas decantadas em álcool e evaporado em rotavapor. No experimento, ratos Wistar machos foram distribuídos em: controle (n=5), que recebeu água destilada; G1 (n=5) recebeu extrato na dose 0,1g/kg p.v; G2 (n=5) recebeu extrato na dose 1g/kg p.v; G3 (n=5) recebeu extrato na dose 2,5g/kg p.v, via gavagem por 60 dias. No exame histopatológico de rins e fígado, não foram identificadas alterações dignas de nota. Os resultados da bioquímica foram: ALT (30 ± 13; 49 ± 18; 48 ± 8; 64 ± 75), AST (108 ± 28; 97 ± 25; 85 ± 10; 133 ± 110), ureia (62 ± 3; 50 ± 6; 73 ± 18; 51 ± 11), creatinina (0,5 ± 0,2; 0,6 ± 0,3; 0,6 ± 0,1; 0,4 ± 0,1), proteínas totais (5,4 ± 0,3; 5,4 ± 0,5; 5,1 ± 0,2; 6,5 ± 5) e glicose (199 ± 28; 212,8 ± 9,6; 208 ± 13; 213 ± 13), demonstrando ausência de toxicidade renal e hepática in vivo.Palavras-chave: Toxicidade. Extrato de Planta. Fígado. Rim

Gossypol Toxicity from Cottonseed Products

Gossypol is a phenolic compound produced by pigment glands in cotton stems, leaves, seeds, and flower buds (Gossypium spp.). Cottonseed meal is a by-product of cotton that is used for animal feeding because it is rich in oil and proteins. However, gossypol toxicity limits cottonseed use in animal feed. High concentrations of free gossypol may be responsible for acute clinical signs of gossypol poisoning which include respiratory distress, impaired body weight gain, anorexia, weakness, apathy, and death after several days. However, the most common toxic effects is the impairment of male and female reproduction. Another important toxic effect of gossypol is its interference with immune function, reducing an animal’s resistance to infections and impairing the efficiency of vaccines. Preventive procedures to limit gossypol toxicity involve treatment of the cottonseed product to reduce the concentration of free gossypol with the most common treatment being exposure to heat. However, free gossypol can be released from the bound form during digestion. Agronomic selection has produced cotton varieties devoid of glands producing gossypol, but these varieties are not normally grown because they are less productive and are more vulnerable to attacks by insects

ATIVIDADE ANTICÂNCER IN VITRO DE TEDANIA IGNIS (PORÍFERA: DEMOSPONGIAE) EM CÉLULAS PC-3

O ambiente marinho é uma das principais fontes de novas entidades bioativas. Há poucos estudos sobre o potencial biotecnológico de organismos marinhos do litoral Nordeste Brasileiro. Esse estudo objetivou verificar o efeito citotóxico de um extrato aquoso da espécie Tedania ignis sobre a linhagem celular de câncer de próstata PC-3. Para tal, amostras da esponja foram colhidas na praia da Baixa Grande, litoral oeste do Rio Grande do Norte, Brasil. Células PC-3 foram tratadas com extrato aquoso de Tedania ignis em 3 diferentes concentrações (1000, 500 and 100 μg / mL). A viabilidade celular foi determinada pelo MTT e teste de exclusão pelo corante vital azul de tripan. As concentrações de 500 μg/mL e 100 μg/mL do extrato demostraram efeito citotóxico e antiproliferativo sobre a linhagem PC-3, já a concentração de 1000 μg/mL mostrou atividade levemente citotóxica. Conclui-se que o extrato de Tedania ignis apresenta potencial biotecnológico e atividade anticâncer in vitro. Palavras-chave: Anticâncer. Citotoxicidade. Esponja. Próstata

Extracellular extract of Bacillus sp. halotolerant bacterium is cytotoxic to 786.0 human renal adenocarcinoma cell line

The halotolerant microorganisms are considered as a promising source of bioproducts with potential interest for many industrial sectors. The potential of biotechnological applications of these microorganisms highlights the importance of research for biologically active biomolecules. In this context, this study aimed to evaluate the in vitro cytotoxicity of extracellular extract halotolerant bacterium Bacillus sp. in human renal cell carcinoma. The bacteria were obtained from saline Saint Camillus (S 05 ° 03 947 ', N 37 ° 16,318, Natal, Rio Grande do Norte, Brazil) and isolated in BHI medium at 37 °C. Biochemical and morphological analyzes classified the species as halotolerant, supporting up to 13% NaCl. Extracellular extract was obtained by ethyl acetate immersion in culture medium after a 24 h incubation. Cytotoxicity was measured by MTT assay. Cells were cultured for 24 h (5x 103 and 1x 104 cells/well) with different concentrations of the extract. Concentrations of 75 and 100 μg/mL caused severe cytotoxic effects against the cell line 786.0. We conclude that the extracellular extract of Bacillus sp. resulted in severe cytotoxic activity on human kidney cancer cells and not cancerous cells.(Extrato extracelular de bactéria halotolerante Bacillus sp. é citotóxica para linhagem celular 786.0 de adenocarcinoma renal humano). Micro-organismos halotolerantes são considerados como uma fonte promissora para a obtenção de bioprodutos potencialmente promissores em diversos setores industriais. O potencial de aplicações biotecnológicas referente a esses micro-organismos evidencia a importância de pesquisas destinadas à busca de biomoléculas biologicamente ativas. Nesse contexto, esse estudo teve como objetivo analisar in vitro a citotoxicidade de extrato extracelular de bactéria halotolerante Bacillus sp. em linhagem celular de adenocarcinoma humano 786.0. A bactéria foi isolada de habitat salino no Brasil (05º 03,947’S; 37º 16,318’O) usando meios BHI a 37 ºC, aspectos bioquímicos e morfológicos foram verificados e o extrato extracelular foi obtido por imersão do meio de cultura no solvente acetato de etila após um período de 24h de incubação. A citotoxicidade foi verificada pelo ensaio de MTT. Células foram cultivadas por 24h (5x103 e 1x104 células/poço) em diferentes concentrações do extrato. Análises bioquímicas e morfológicas classificaram a espécie como halotolerante, suportando até 13% de NaCl. Duas concentrações do extrato, 75 e 100 μg/mL, mostraram efeitos citotóxicos significativos frente à linhagem celular 786.0