Risikoanalyse durch eine wirkungsbezogenen Analytik mit der instrumentellen Hochleistungs-Dünnschichtchromatographie in der Lebensmittelüberwachung

Zusammenfassung.: Als wirkungsbezogene Analytik wird die Kopplung von biochemischen bzw. biologischen Testverfahren an chemisch/physikalische oder chromatographische Verfahren bezeichnet. So lassen sich mittels der Dünnschichtchromatographie die aufgetrennten Komponenten direkt auf dem Chromatogramm physikalisch-chemisch detektieren und quantifizieren. Durch die Kopplung von biochemischen (z.B. enzymatischen Hemmtests) oder biologischen Testverfahren können toxikologisch wirksame Substanzen in situ nachgewiesen werden. Mit diesen biologischen Testsystemen können - direkt auf dem Chromatogramm auf der Dünnschichtplatte - Fungizide, Antibiotika und Lumnineszenz-Hemmstoffen nachgewiesen werden; ein neues molekularbiologisches Testverfahren ermöglicht den qualitativen und quantitativen Nachweis von Hormonen. Mit biochemischen und biologischen Detektionsverfahren können Wirkstoffe in Lebensmittelproben sowie bei der Reinheitskontrolle und in der Metabolismusforschung von Chemikalien nachgewiesen werden. Außerdem können die detektierten Wirkstoffe durch ihre Migrationsstrecke und ihr UV-Spektrum charakterisiert oder auch identifiziert werden. Pflanzliche Lebensmittel wurden mit der wirkungsbezogenen Analytik auf die Gegenwart von Pestiziden hin untersucht. Biochemische und biologische Detektionsverfahren auf dem Dünnschichtchromatogramm sind sehr selektiv und sensitiv und schließen damit die Lücke zwischen biologischen in vitro-Testverfahren und instrumenteller Analytik. Die Detektion von Wirkungsäquivalenten ist als Screening-Verfahren zunächst unabhängig von Referenzsubstanzen. Neben verschiedenen Testverfahren wird ein Konzept zur Risikoanalyse und Risikobewertung vorgestellt, bei dem die wirkungsbezogene Analytik als Bindeglied zwischen Biotests und chemisch/physikalischen Analytik- und Identifizierungsverfahren fungier

Histone deacetylase 8 in neuroblastoma tumorigenesis

Purpose: The effects of pan-histone deacetylase (HDAC) inhibitors on cancer cells have shown that HDACs are involved in fundamental tumor biological processes such as cell cycle control, differentiation, and apoptosis. However, because of the unselective nature of these compounds, little is known about the contribution of individual HDAC family members to tumorigenesis and progression. The purpose of this study was to evaluate the role of individual HDACs in neuroblastoma tumorigenesis. Experimental Design: We have investigated the mRNA expression of all HDAC1-11 family members in a large cohort of primary neuroblastoma samples covering the full spectrum of the disease. HDACs associated with disease stage and survival were subsequently functionally evaluated in cell culture models. Results: Only HDAC8 expression was significantly correlated with advanced disease and metastasis and down-regulated in stage 4S neuroblastoma associated with spontaneous regression. High HDAC8 expression was associated with poor prognostic markers and poor overall and event-free survival. The knockdown of HDAC8 resulted in the inhibition of proliferation, reduced clonogenic growth, cell cycle arrest, and differentiation in cultured neuroblastoma cells. The treatment of neuroblastoma ceil lines as well as short-term-culture neuroblastoma cells with an HDAC8-selective small-molecule inhibitor inhibited cell proliferation and clone formation, induced differentiation, and thus reproduced the HDAC8 knockdown phenotype. Global histone 4 acetylation was not affected by HDAC8 knockdown or by selective inhibitor treatment. Conclusions: Our data point toward an important role of HDAC8 in neuroblastoma pathogenesis and identify this HDAC family member as a specific drug target for the differentiation therapy of neuroblastoma. © 2009 American Association for Cancer Research

Characterization of different isoforms of the HIF prolyl hydroxylase PHD1 generated by alternative initiation

The heterodimeric transcription factor HIF (hypoxia-inducible factor) is central to the regulation of gene expression by oxygen. Three oxygen-dependent prolyl hydroxylase enzymes [PHD1 (prolyl hydroxylase domain 1), PHD2 and PHD3] control the abundance of HIF. In the presence of oxygen, they hydroxylate specific proline residues in HIF-α, allowing recognition by pVHL (von Hippel-Lindau protein) and subsequent ubiquitylation and proteasomal destruction. The precise roles and regulation of these enzymes are therefore of particular importance in understanding the physiological and pathological responses to hypoxia. In the present study, we define the existence of two species of PHD1 and provide evidence that they are generated by alternative translational initiation. We demonstrate that these alternative forms are both biologically active with similar HIF prolyl hydroxylase activity but that they differ in their responses to oestrogen, cell confluence and proteasomal inhibition. We show that the two PHD1 species are subject to proteolytic regulation but differ markedly in their protein stability. Though each isoform has the potential to interact with members of the Siah (seven in absentia homologue) ubiquitin ligase family, genetic studies indicated that other proteolytic mechanisms are responsible for control of stability under the conditions examined. The data define the existence of a further level of control in the pathway that regulates cellular responses to hypoxia