Cyclic strain promotes shuttling of PYK2/Hic-5 complex from focal contacts in osteoblast-like cells.

International audienceWe showed that cyclic strain (CS) of osteoblastic cells induced tyrosine phosphorylation of two homologous tyrosine kinases FAK and PYK2, and of two homologous adaptor proteins paxillin and Hic5, with similar kinetics. Immunostaining showed that all four proteins were localized to focal contacts in controls. In contrast, the dynamics of their subcellular localization observed after CS differed. While FAK and paxillin remained at the focal contact, Hic-5 and PYK2 translocated outside ventral focal contacts as early as 30 min after CS and were sequestered by the cytoskeleton. Co-immunoprecipitation showed that the association of PYK2/Hic-5 and PYK2/FAK increased with time after strain while that of paxillin and Hic-5 decreased. Altogether these results suggested that CS regulates focal contact activity in osteoblasts by modulating PYK2-containing complexes in particular by shuttling out of the focal contact the adaptor Hic-5 and favoring the anchorage of FAK within contacts

The Collapsin Response Mediator Protein 5 Onconeural Protein Is Expressed In Schwann Cells Under Axonal Signals And Regulates Axon-Schwann Cell Interactions

Metacommunity theory allows predictions about the dynamics of potentially interacting species\u27 assemblages that are linked by dispersal, but strong empirical tests of the theory are rare. We analyzed the metacommunity dynamics of Florida rosemary scrub, a patchily distributed pyrogenic community, to test predictions about turnover rates, community nestedness, and responses to patch size, arrangement, and quality. We collected occurrence data for 45 plant species from 88 rosemary scrub patches in 1989 and 2005 and used growth form, mechanism of regeneration after fire, and degree of habitat specialization to categorize species by life history. We tested whether patch size, fire history, and structural connectivity (a measure of proximity and size of surrounding patches) could be used to predict apparent extinctions and colonizations. In addition, we tested the accuracy of incidence-function models built with the patch survey data from 1989. After fire local extinction rates were higher for herbs than woody plants, higher for species that regenerated only from seed than species able to resprout, and higher for generalist than specialist species. Fewer rosemary specialists and a higher proportion of habitat generalists were extirpated on recently burned patches than on patches not burned between 1989 and 2005. Nestedness was highest for specialists among all life-history groups. Estimated model parameters from 1989 predicted the observed (1989-2005) extinction rates and the number of patches with persistent populations of individual species. These results indicate that species with different life-history strategies within the same metacommunity can have substantially different responses to patch configuration and quality. Real metacommunities may not conform to certain assumptions of simple models, but incidence-function models that consider only patch size, configuration, and quality can have significant predictive accuracy. © 2011 Society for Conservation Biology

Voies de signalisation impliquées dans la réponse de cellules ostéoblastiques à une contrainte mécanique cyclique.

Les ostéoblastes sont les régulateurs clé du remodelage osseux en réponse à la contrainte mécanique. Cependant les mécanismes moléculaires conduisant à cette réponse restent encore mal connus. -1- Nous avons montré que des contraintes mécaniques cycliques de 1% (CM) (10 min, 0.25Hz) stimulent la prolifération de cellules ostéoblastiques ROS 17/2.8, qui est bloquée par le PD98059, un inhibiteur de MEK. De plus, la phosphorylation du site tyrosine (Y) 187 de la MAPK ERK2 augmente avec le temps après CM. L'immunoprécipitation (IP) par anticorps anti-P-Y suivie d un immunoblot (IB) anti-P-Y a montré que 3 groupes de protéines étaient phosphorylées par la CM et qui pouvaient correspondre à FAK, src et PYK2, toutes 3 localisées au contact focal. L analyse quantitative de cellules immunomarquées par Ac anti P-Y montre une augmentation du nombre et de la taille des contact focaux chez les cellules contraintes suggérant un remodelage de l adhérence intégrinique au cours de ce stimulus mitogène. Utilisant la même approche IP/IB nous avons montré que la CM active FAK aux sites Y 397 et 925. La transfection des cellules avec un vecteur d expression exprimant FAK mutée en Y397 bloque complètement la phosphorylation de ERK2Y187. La CM induit également la phosphorylation du site Y418 de src et l association de src avec FAK. L utilisation d un inhibiteur de la famille src, le pyrazolopyrimidine 2 (PP2) diminue la phosphorylation basale de FAKY397 mais n empêche pas son activation par la CM. La CM active également le résidu Y402 d'une tyrosine kinase PYK2 homologue de FAK, ainsi que son association avec cette dernière. L ajout d'un chélateur du calcium intra ou extracellulaire empêche l activation de PYK2 uniquement à 4h. La mutation de Y402 de PYK2 empêche la phosphorylation de ERK2 uniquement 4h après l'arrêt de la CM. Au total, la mitogénicité de la CM pour des ostéoblastes dépend de ERK2 dont l'activation est sous le contrôle de la phosphorylation de FAK et de PYK2. -2- Nous nous sommes ensuite intéressés à 2 protéines adaptatrices, Paxilline et Hic-5 qui sont phosphorylées par la CM avec la même cinétique que FAK et PYK2. L'immunomarquage montre que ces 4 protéines sont localisées au contact focal chez les contrôles Cependant, leur localisation subcellulaire et leurs associations respectives diffèrent après CM. Alors que FAK et paxilline restent au contact focal, PYK2 et Hic-5 sont transportées au noyau 30 min après la CM commencent à retourner au contact focal à 4h. L'association PYK2/ Hic-5 augmente avec le temps chez les cellules contraintes alors que celle Hic-5/ paxilline diminue. La localisation nucléaire de PYK2 et de Hic-5 a été confirmée par IB des protéines nucléaires. Ces résultats suggèrent que l'association PYK2/Hic-5 observées sous CM se fait au dépens de celle avec Paxilline.ST ETIENNE-BU Médecine (422182102) / SudocPARIS-BIUP (751062107) / SudocSudocFranceF