Avaliação do efeito mutagênico do herbicida Roundup em bioensaio agudo com o bioindicador Corydoras paleatus (Pisces)

Orientadora: Marta Margarete CestariCoorientador: Marcos Vinícius Mocellin FerraroMonografia (Bacharelado) - Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Curso de Graduaçao em Ciencias BiológicasResumo : O Roundup® é um herbicida sistêmico não seletivo a base de glifosato. Descritos pelos fabricantes como pesticidas de "baixa toxicidade e boa compatibilidade ambiental", os herbicidas à base de glifosato representam um bálsamo quando se trata da vegetação indesejada. Além disso, a criação de transgênicos resistentes a Roundup contribui não só para o aumento da produção agrícola, mas também pode resultar em mais resíduos de glifosato que podem ser bioacumulados ao longo da cadeia trófica, podendo afetar animais e, entre eles os humanos. Utilizou-se como bioindicador o peixe Corydoras paleatus, original da Bacia do Rio Amazonas e amplamente distribuído no Sul do Brasil. Seu destaque devese à sua característica ruderal nativa, se distribuindo em regiões com forte interferência humana, como áreas de agricultura intensiva e relacionadas à piscicultura, apresentando valor comercial como peixe ornamental. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito genotóxico da exposição de exemplares de Corydoras paleatus ao Roundup®, utilizando-se como biomarcadores as técnicas do Ensaio Cometa de eritrócitos e hepatócitos e o Micronúcleo Písceo de eritrócitos (MNP). Os peixes foram expostos à água contaminada em concentração de Roundup 6,67.10-3l/l (0,00667ml/l) por períodos de 3, 6 e 9 dias, e um grupo controle foi exposto somente a água destilada. O MNP mostrou não haver diferença significante entre os controles e os grupos contaminados; a despeito disso, o ensaio cometa de sangue revelou diferença significante entre o grupo controle quando comparado aos contaminados com cada um dos diferentes tempos de exposição; e Ensaio Cometa com células do fígado também revelou diferença entre o grupo controle e os três tratamentos. O potencial genotóxico do Roundup deveras tem apresentado resultados inconsistentes e muitas vezes controversos, e, apesar de cada método de teste ter suas vantagens, nenhum é universal. Sugere-se afinal que sejam feitos estudos mais aprofundados sobre a biologia de Corydoras paleatus, seu comportamento, sua taxa metabólica e as respostas mais específicas de cada tecido a contaminação. Seria válida também a avaliação de danos diários aos animais, e com no mínimo três concentrações para avaliar a formação de alguma tendência na comparação de dias, danos e concentrações

Avaliação Genotóxica em Rhamdia quelen após contaminação Sub-Crônica com Fipronil

Co-Orientador: Prof. Marcos Vinicius Mocellin FerraroOrientadora : Marta Margarete CestariDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 28/01/2010Bibliografia: fls.62-76Área de concentração: GenéticaA populacao humana mundial em 1950 era de 2,5 bilhoes. Em 2000 ja havia mais de seis bilhoes de pessoas no planeta. O crescimento populacional apresenta-se como um fator negativo frente a disponibilidade dos recursos naturais. A agua se constitui atualmente um fator limitante para o desenvolvimento agricola, urbano e industrial. Rios, lagos e oceanos sao frequentemente usados como esgotos a ceu aberto, sendo os ultimos recipientes de toda a poluicao. Agrotoxicos, derramamento de oleo, metais pesados, detergentes e lixos industriais podem prejudicar e matar organismos que vivem em ambientes aquaticos. Surge assim a necessidade de se avaliar os efeitos que essas substancias podem causar nestes organismos, bem como a necessidade de padronizar as metodologias de avaliacao dos danos causados por tais substancias. Neste trabalho pesquisou-se os efeitos que uma exposicao subcronica de 60 dias ao agrotoxico Fipronil, nas concentracoes de 0,05µg/L, 0,10µg/L e 0,23µg/L, pode causar no peixe Rhamdia quelen atraves do teste do Micronucleo Pisceo, do Ensaio Cometa com branquia e de analise histopatologicas das branquias. Os resultados para o Ensaio Cometa e para lesoes histopatologicas branquiais nao mostraram diferenca entre o controle negativo e os grupos contaminados. Para o teste do Micronucleo Pisceo, a menor concentracao de Fipronil mostrou-se igual ao grupo controle, e as demais concentracoes, acima do controle, com relacao a taxa de dano ao DNA. Esses resultados indicam que as concentracoes testadas de Fipronil nao foram suficientes para se detectar grandes alteracoes no DNA de Rhamdia quelen com os testes escolhidos. Talvez a aplicacao de novos testes, mais precisos podem revelar alguma alteracao. Durante o experimento foram feitas duas padronizacoes de metodologia: uma para o Teste do Micronucleo Pisceo, que concluiu que a contagem de somente mil celulas e suficiente para se obter resultados confiaveis; e outra para o Ensaio Cometa, onde se padronizou o soro bovino fetal como a melhor solucao de estoque para ate 48 horas.In 1950 the human population in the world was around 2.5 billion people. In 2000 there were over six billion on the planet. Population growth is a negative factor against the availability of natural resources. The water is currently an limiting factor for agricultural, urban and industrial development. Rivers, lakes and oceans are often used as sewers, and the ultimate recipient of all pollution. Pesticides, waste and oil spills, metals, urban and industrial waste can harm and kill organisms living in aquatic environments. These situations create the need to evaluate the effects these substances can cause to these organisms. This study therefore investigated, through the Piscine Micronucleus test, the Comet Assay with gill and histopathological analysis of the gills, the effects of the insecticide Fipronil in concentrations of 0.05 µg / L, 0.10µg / L and 0.23µg / L, on fish Rhamdia quelen. The results for the Comet test and histopathological gill lesions showed no difference between the negative control and contaminated groups. For the micronucleus piscine test, the lower concentration of Fipronil was equivalent to the control group and the other concentrations, above the control, when compared with the rate of DNA damage. These results indicate that concentrations of fipronil tested were not sufficient to detect a change in the DNA of Rhamdia quelen with the chosen tests; perhaps more accurate new tests could reveal any changes. During the experiment were done two standardization methods: one for the piscine micronucleus test, which concluded that the counting of only a thousand cells is sufficient to obtain reliable results, and other for the Comet assay, where standardized fetal bovine serum as the best solution for stock up to 48 hours

Efeitos citotóxicos de um herbicida a base de glifosato no peixe Astyanax altiparanae

A constante preocupação em otimizar a produtividade agrí­cola frente a demanda aumentada por alimentos, traz consigo uma crescente utilização de pesticidas visando proteger as lavouras contra pragas. Nos últimos anos, com o aumento no uso de lavouras geneticamente modificadas, o glifosato se tornou um produto indispensável à agricultura, tornando-se um dos pesticidas mais utilizados ao redor do mundo. Desta forma, aumentou também as preocupações quanto a segurança ambiental e pública do uso deste pesticida. Assim o objetivo deste estudo foi avaliar a toxicidade do herbicida Roundup® WG nas concentrações 1,58 mgL-1 e 5,0 mgL-1 no peixe Astyanax altiparanae. Os indiví­duos foram expostos pelo perí­odo de 120 horas (cinco dias) e, posteriormente amostras de sangue foram coletadas da veia caudal para realização do Teste do Micronúcleo Pí­sceo (MN) e alterações nucleares eritrocitárias (ANE). Nossos resultados indicaram que os indiví­duos expostos à concentração de 5 mgL-1 foram os que apresentaram significante í­ndice de alterações nucleares eritrocitárias. Frente à diversidade de substâncias potencialmente tóxicas que acabam por alcançar e se acumular em ambientes aquáticos, conhecer os efeitos destes agentes xenobióticos sobre as espécies é fundamental para o monitoramento de ambientes, visando guiar ações que minimizem a contaminação e possivelmente regulamentar concentrações permitidas

<b>Fish welfare: the state of science by scientometrical analysis

  In 2014, Brazil produced 474.33 thousand tons of captive-bred fish. In addition, regulatory agencies of animal ethics and welfare have recently encouraged experiments to be done using simpler vertebrates, such as fish. The aim of this article was to perform a scientometric analysis of scientific production that deals with fish welfare, in an attempt to find trends and gaps in this line of research. Our analyses showed a growing concern about fish welfare, although several questions remained inadequately covered. The most studied species was the Atlantic salmon, with Norway having the most publications on this theme. There are controversies among scientists about fish capacity for suffering and enjoyment (sentience). As regards slaughter or euthanasia, some studies showed that some methods are more endorsed than others, because they effectively reduce suffering and improve the appearance of the meat. In respect of animals used for experimentation, the most recommended substances were benzocaine and MS222. Thus, despite the importance of this subject, few studies are decisive and there is still no consensus on how to improve fish welfare or even on how to reduce suffering at the moment of slaughter.

What is the best buffer for preservation of cells in vitro: a standardization for gill cells in order to use in the Comet Assay

The Comet Assay is a rapid and sensitive method for detection of breaks in the DNA strand into individual cells, commonly used at ecotoxicology. At this time, the method has been refined, but not yet fully standardized and variations on protocol are common. When environmental reviews are performed, the large number of samples required and the conditions of handling during transportation of samples to the laboratory are frequent problems. Until now, however, no truly effective method for samples preservation for this test was described. Therefore, we tested three stock solutions: fetal bovine serum (FBS), phosphate buffered saline (PBS) e Tris. Gill cells of Rhamdia quelen contaminated with insecticide Fipronil were maintained in these solutions, for 0, 24 and 48 hours to perform Comet Assay. It was found that fetal bovine serum was the solution that best preserved the DNA integrity of gill cells, followed by Tris and finally by PBS. We concluded in this study that fetal bovine serum is the solution that best conserve the gill cells and genetic material of R. quelen for a time until 48 hours in the absence of light and at 4ºC

Are Our Farm Workers in Danger? Genetic Damage in Farmers Exposed to Pesticides

Modern agriculture, practiced after the &#8220;green revolution&#8222; worldwide, aims to maximize production in order to provide food for the growing world population. Thus, farmers are required to modernize their practices through the mechanization of land use and, above all, the use of chemical pesticides to control agricultural pests. However, in addition to combating the target pest, chemical pesticides indirectly affect a wide range of species, including humans, leading to health damage. Among the main problems caused by the use of pesticides is the genotoxicity caused by chronic exposure. The present study aims to verify the occurrence of genetic damage in farmers who are occupationally exposed to agrochemicals compared to people of other professions that do not use toxic substances (control group). The research was conducted with 36 male participants (18 farmers and 18 control group, ages 24&#8315;71 for the farmer group and 22&#8315;61 for the control group). The comet assay and micronucleus test results revealed a higher rate of genetic damage in the group of farmers than in the control group. A questionnaire answered by the farmers showed that the Personal Protect Equipment (PPE) is used incorrectly or not used. In summary, our results indicate that farmers are exposed to occupational hazards. To mitigate this risk, we conducted awareness campaigns to notify the farmers of the risks and highlight the importance of using PPE correctly. Intensive efforts and training are thus required to build an awareness of safety practices and change the attitudes of farm workers in the hope of preventing harmful environmental and anthropogenic effects