Identification of toxocara canis antigens by Western blot in experimentally infected rabbits

Toxocariasis is a frequent helminthiasis that can cause visceral and ocular damage in humans specially in children. The identification of specific antigens of Toxocara canis is important in order to develop better diagnostic techniques. Ten rabbits were infected orally with a dose of 5000 Toxocara canis embryonated eggs. Rabbits were bled periodically and an ELISA assay was performed to determine levels of specific Toxocara IgG antibodies. ELISA detected antibodies at day 15 after infection. Western blot (WB) assay was performed using excretory/secretory antigens (E/S) of T. canis second stage larvae. Different antigen concentrations were evaluated: 150, 200, 250 and 300 µg/mL. The concentration of 250 µg/mL was retained for analysis. Rabbit sera were diluted 1:100. Secondary antibody was used at a dilution of 1:1000. Results of WB indicated that in the first month after infection specific antibodies against the 200 KDa, 116 KDa, 92 KDa and 35 KDa antigens were detected; antibodies against the 92 KDa, 80 KDa, 66 KDa, 45 KDa, 31 KDa and 28 KDa antigens appeared later. All positive sera in the ELISA test were also positive in WB. Two antigen bands, 92 KDa and 35 KDa, were identified since the beginning and throughout the course of infection. These antigens merit further evaluation as candidates for use in diagnosis.O Toxocara canis é responsável por uma helmintíase freqüente, causando danos viscerais e oculares no ser humano, especialmente em crianças. A identificação de antígenos específicos de Toxocara canis é importante para se obter melhores técnicas de diagnóstico. Neste trabalho, dez coelhos foram infectados, por via oral, com um inóculo de 5000 ovos embrionados de T. canis. Periodicamente, foi coletado sangue dos coelhos para determinação dos níveis de anticorpos IgG, pela técnica ELISA, que revelou anticorpos no 15º dia após a infecção. A técnica de Western blot foi realizada utilizando os antígenos excretores-secretores (E/S) com larvas de T. canis de segundo estádio. Foram avaliadas diferentes concentrações de antígeno: 150, 200, 250 e 300 µg/mL. No final, a concentração ótima de antígenos para análise foi 250 µg/mL. Cada soro foi diluído 1:100 e o anti IgG de coelho, ligado a fosfatase alcalina, fui utilizado a 1:10000. Os resultados do Western blot indicaram que no primeiro mês após a infecção apareceram anticorpos específicos contra os determinantes antigênicos 200 KDa, 116 KDa, 92 KDa e 35 KDa; os anticorpos contra 92 KDa, 80 KDa, 66 KDa, 45 KDa, 35 KDa e 28 KDa apareceram mais tarde. Todos os soros positivos pela técnica ELISA, também foram positivos pela de Western blot. Duas bandas estiveram presentes desde o começo da infecção. Estes antígenos justificam uma futura avaliação para uso no diagnóstico da Toxocaríase

Prevalencia de helmintos en la planta de aguas residuales del municipio el rosal, cundinamarca

Objetivo Determinar la  prevalencia de huevos de helmintos en lodos, agua residual cruda y tratada, provenientes de un sistema de tratamiento de aguas residuales del municipio el Rosal, Cundinamarca.Metodología Se tomaron 30 muestras de agua residual, y 10 de lodos en la Planta El Rosal, durante 10 semanas. Las muestras de aguas y lodos se procesaron siguiendo los métodos de BAILENGER, y el método de la Norma Oficial Mexicana, respectivamente. La viabilidad de los huevos se determinó por el método de Victórica and amp; Galván y la Norma Oficial Mexicana.Resultados Los datos fueron analizados con estadística descriptiva. El 100 % de las muestras de agua residual sin tratar evidenció presencia de huevos, encontrándose al menos un huevo viable de helminto/litro en el 90 % de las mismas. El 90 % de las aguas residuales tratadas fueron positivas para la presencia de huevos, encontrándose que el 70 % presentaba al menos 1 huevo viable. Todas las muestras de agua residual cruda que se vierten directamente a la quebrada, fueron positivas a helmintos, igual situación se encontró al momento de realizar la prueba de viabilidad. Todos los lodos fueron positivos para helmintos, encontrándose que en el 100 % de estos, al menos un huevo fue viable. Conclusión El uso de estas aguas para riego de hortalizas, y el uso de estos lodos como abono, representa un riesgo potencial para la salud pública. Los lodos solo pueden ser usados en actividades forestales, siempre y cuando no estén en contacto con humanos

Concepciones de los profesores de postgrado de la facultad de medicina de la universidad nacional de colombia sobre la evaluación académica

Antecedentes. Proyectos en pregrado desarrollados en la línea de investigación en evaluación, creada hace once años, en el Grupo de Apoyo Pedagógico y Formación Docente de la Facultad de Medicina. Objetivo. Indagar las concepciones de los docentes de posgrado sobre la evaluación del estudiante. Material y métodos. Metodología de la teoría fundamentada para construir una teoría que explique las conceptualizaciones que subyacen al proceso de evaluación del estudiante de posgrado. Se entrevistaron 33 profesores, en 10 grupos focales, según nivel de formación (especialización, especialidad médico-quirúrgica, maestría y doctorado), se discutió: el papel del profesor en la evaluación; la metodología, los propósitos, los problemas y sugerencias para mejorar este proceso. Resultados. Los docentes conceptualizaron la evaluación como proceso, independiente del nivel de formación; sin embargo, hay diferencias en el papel de la evaluación según el tipo de formación en posgrado; en las disciplinas (maestrías de investigación y doctorados) se fundamenta en proyectos de investigación y en las profesiones (especialidades médico-quirúrgicas) en el desempeño, con el paciente y la familia, contempla no solo conocimientos sino aptitudes y actitudes. Conclusiones. Los requisitos de ingreso a la carrera docente evalúan la capacitación en la disciplina o profesión pero no la pedagógica, esto explica por qué los profesores tienen concepciones y criterios heterogéneos para evaluar y guiar al estudiante de posgrado. Las concepciones de los docentes reflejan la evaluación como un proceso funcional que involucra retroalimentación del discípulo y el profesor pero desligado del aprendizaje y para clasificar al estudiante al aprobar o reprobar

Absceso hepático por Ascaris lumbricoides: reporte de un caso

Se presenta el caso de una mujer que vivía en zona rural con una enfermedad crónica consistente en pérdida de peso y dolor epigástrico y del cuadrante superior derecho del abdomen. El diagnóstico inicial fue de masa hepática izquierda a estudio, demostrándose luego por frotis directo y por histopatología que se trataba de un absceso hepático por Ascaris lumbricoides. Huevos de Ascaris lumbricoides y abundantes cristales de Charcot-Leyden fueron encontrados.A case is reported of a woman who lived in a rural area with a chronic illness that consisted of weight loss and abdominal pain in the epigastrium and upper right quadrant. The initial diagnosis was a mass in the liver, which was later, demonstrated, both by direct and histological examination, to be an abscess caused by Ascaris lumbricoides. Eggs of Ascaris lumbricoides and abundant Charcot-Leyden Crystals were found

Frecuencia de parásitos intestinales en pacientes VIH+ en la ciudad de Santa Fe de Bogotá

El objetivo del presente trabajo fue hallar la frecuencia de parásitos intestinales oportunistas en una población de individuos VIH positivos consultantes al programa de Enfermedades de Transmisión Sexual (ETS) del Hospital San Juan de Dios en la ciudad de Santa Fe de Bogotá. Cryptosporidium sp e lsospora belli especies consideradas oportunistas se observaron con frecuencias de 1.0%. Es importante resaltar la baja frecuencia de estas especies en la población en estudio. La mayor frecuencia de parásitos intestinales correspondió a Endolimax nana con un 15.1 %, seguida por Entamoeba coli 13.2%. La frecuencia de nemátodos es muy baja: se encontraron uncinaria y Strongyloides stercoralis con una frecuencia de 1% aproximadamente.The objective ofthe present work is to find frequency of intestinasl opportunistic parasites in a population of HIV + outpatients that assisted to the program of Sexual Transmited Diseases (STD) in University Hospital San Juan de Dios at Santa Fe de Bogotá. Cryptosporidum sp. and lsospora belli were observed in 1% of patients. It is important to emphasize the low frequency of opportunistic parasites in this study. The highest prevelence corresponded to Endolimax-nana (15.1 %) and Entamoeba coli  (13.2%). The frequency of nematodes is very low: unicinaria and Strongyloides stercoralis were presentn 1%

Parasitismo intestinal en la población infantil menor de 15 años atendida en el servicio de consulta externa del hospital de la misericordia y evaluación de métodos para su diagnóstico

EI presente trabajo tuvo como objetivo evaluar la prevalencia de parasitismo intestinal en niños menores de 15 años y comparar los métodos para su diagnóstico. Se procesaron muestras de materia fecal de cien niños menores de 15 años atendidos en el servicio de Consulta Externa del Hospital Infantil Universitario de La Misericordia. Las muestras fueron evaluadas por el Método directo y por el método de concentración. Además , se hicieron coloraciones especiales para CryptosporidiulII (Z-N modificado) y microsporidios (tricrómica de Ryan y blanco de calcofluor). Se encontró una prevalencia de parasitismo intestinal de 77%; 37 de los 77 niños parasitados (48%) tenían al menos un parasito patógeno. Los parásitos mas frecuentes fueron: B. hominis (51 %), Giardia intestinalis (32%), Elltullloeba coli y Elldolimax Ilalla (28% cada una). La sensibilidad del método de concentración (96%) fue mayor que la del examen directo (84%) siendo las diferencias estadísticamente significativas (p Las técnicas empleadas para la detección de icrosporidios mostraron alta sensibilidad pero baja especificidad: de 32 muestras positivas para calcoflúor solamente seis 10 fueron con la coloración tricrómica de Ryan. Las principales conclusiones de este trabajo son: 1. La prevalencia de parasitismo intestinal fue alta; 2. EI método de concentración es más sensible que el examen directo; 3. idealmente el directo y el concentrado deberían realizarse secuencialmente y 4. es necesario mejorar la especificidad de las técnicas para detección de microsporidios. / Abstract. In order to assess the prevalence ofintestinal parasitism in children under 15 years and compare diagnostic methods, 100 fecal specimens from children attended in the outpatient clinic of La Misericordia Hospital in Bogota were examined. The samples were processed by direct examination and by the Ritchie-Frick concentration technique. Special staining methods such as the modified Ziehl-Neelsen technique for Cryptospo,.itlium oOq'sts, Ryan's trichrome stain and calcoOuor white for microsporidia were also performed. The prevalence of intestinal parasitism among this group was 77%; 37 of the 77 (48%) parasitized children were infected with at least one pathogenic parasite. The most frequent parasites w~re: B. hominis (51 %), Giul"{liuilltestinalis (32%), EllIumoebu coli and Endolimax nuna (28% each). The sensitivity of the concentration method (96%) was greater than that of the direct examination (84%); these difference was satistically significant (pIn order to assess the prevalence of intestinal parasitism in children under 15 years and compare diagnostic methods, 100 fecal specimens from children attended in the outpatient clinic of La Misericordia Hospital in Bogotá were examined. The samples were processed by direct examination and by the Ritchie-Frick concentration technique. Special staining methods such as the modified Ziehl-Neelsen technique for Cryptosporidium oocysts, Ryan's trichrome stain and calcofluor white for microsporidia were also performed. The prevalence of intestinal parasitism among this group was 77%; 37 of the 77 (48%) parasitized children were infected with at least one pathogenic parasite. The most frequent parasites were: B. hominis (51 %), Giardia intestinalis (32%), Entamoeba  coli and Endolimax nana (28% each). The sensitivity of the concentration method (96%) was greater than that of the direct examination (84%); these difference was satistically significant (

Frecuencia de anticuerpos anti Trypanozoma cruzi en pacientes portadores de marcapasos de la Clinica San Pedro Claver de Bogotá

Introduction. In Colombia the impact of infections of Trypanosoma cruzi are known to produce chronic cardiopathy and expressed by bradycardia. In Colombia the extent and impact of these infections has not been examined.Objective. The current study aimed to determine the prevalence of T. cruzi infection as measured by serology, in a population of patients with cardiopathy that required a permanent pacemaker as treatment for cardiac rhythm abnormalities and conduction blocking.Materials and methods. A cross sectional study sampled 332 patients from the pacemaker clinic at the San Pedro Claver Hospital in Bogotá, Colombia, for one year (2004-2005). Epidemiological and clinical data were obtained through interviews and physical examination. Serological tests consisted of indirect inmunofluorescence assay and ELISA. Statistical analyses were accomplished with chi-square and Students' t tests.Results. Of patients with pacemakers, 17.1% had anti-T. cruzi antibodies (seropositive). At the time when the pacemaker was implanted, chronic Chagas' disease patients were younger(55±13 years) than those patients with cardiopathy (60±17 years) with no anti-T. cruzi antibodies (p<0.01). The seropositive group was aware of the Chagas' disease vector (83.6%) in contrast to the seronegative group (39.6%, p<0.001). In 60% of the patients of the seropositive group, no clinical signs of the disease were apparent. The geographical origin of the seropositive group were traced to regions in Colombia known to be endemic for Chagas´ disease transmission.Conclusion. Chagas´ disease prevalence is high in Colombian patients who required a permanent cardiac pacemaker. Chronic Chagas' disease patients required pacemaker implantat a younger age in contrast with patients with other cardiac pathologies. The clinical recognition of Chagas´ disease associated with cardiopathy is low despite the epidemiological data.Introducción. En Colombia no se conoce cuál es el impacto de la infección por Trypanosoma cruzi en la producción de cardiopatía crónica expresada por bradiarritmias graves que requierenimplante de marcapaso.Objetivo. Determinar la seroprevalencia de anticuerposanti-Trypanosoma cruzi en pacientescon bloqueos de conducción o disfunción sinusal que requirieron implantación de marcapaso.Materiales y métodos. Mediante un estudio descriptivo de corte transversal (2004-2005) en 332 pacientes de la consulta de marcapaso de la clínica San Pedro Claver de Bogotá, seestimó la seroprevalencia de anticuerpos anti-Trypanosoma cruzi mediante las pruebas de inmunofluorescencia indirecta y ELISA. Se aplicó un formulario de recolección de datosepidemiológicos y de hallazgos de examen físico. El análisis estadístico se hizo mediante las pruebas de ji al cuadrado y T de Student.Resultados. La seroprevalencia anti-T. cruzi fue de 17,11%. Esta seropositividad se asoció con: menor edad al momento del implante del marcapaso (55,22+13,62 Vs. 59,82+17,19, p=0,0013), con el reconocimiento de los triatominos (83,6% Vs. 39,6%, p<0,001) y con haber vivido antes de los 15 años en zonas endémicas para la enfermedad de Chagas. El paciente no conocía el diagnóstico de enfermedad de Chagas o éste no se sospechó clínicamente en el 60% de los casos.Conclusiones. La prevalencia de anticuerpos anti-T. cruzi en pacientes portadores de marcapaso es alta. La implantación de marcapasos se presentó más tempranamente en el grupo seropositivo. No hay adecuada sospecha clínica ni información al paciente sobre el diagnóstico de la enfermedad de Chagas

Preservación de huevos de Necator americanus con acetato de sodio-ácido acético-formalina (SAF). Estudio de caso.

Introducción. La técnica de Kato Katz es el método recomendado para realizar el recuento de huevos en materia fecal y determinar la intensidad parasitaria por helmintos. La calidad de los resultados se ve afectada por la tardanza en el procesamiento de la muestra, por lo que se requiere de preservantes que faciliten la lectura posterior a las 24 horas de recolección de la muestra.Objetivo. Demostrar validez de la solución con acetato de sodio-ácido acético-formalina (SAF) como preservante de huevos de Necator americanus por medio del estudio de un caso clínico.Materiales y métodos. Descripción de caso clínico con diagnóstico de parásitos intestinales por coprológico, intensidad de la infección por la técnica de Kato Katz, evaluación de la presencia de huevos N. americanus por la técnica de Kato Katz durante 10 meses en muestra preservada en SAF y determinación de especie de Uncinaria sp.por qPCR.Resultados. Los huevos de N. americanus se conservan de manera adecuada en morfología durante los primeros cinco meses.Conclusiones. A fin de ejecutar la técnica de Kato Katz, la fijación con SAF demostró ser adecuada para el mantenimiento de la intensidad parasitaria y morfología de los huevos de N. americanus en un período de hasta cinco meses.Introduction: The Kato Katz technique is the recommended method for fecal egg counts and determining the intensity of parasitic helminths. The quality of the results is affected by the delay in the analysis of the sample. Therefore, fixatives are necessary to make the reading easier 24 hours after sample collection.Objective: To prove the usefulness of sodium acetate-acetic acid-formalin (SAF) solution as a fixative for Necator americanus eggs by means of a clinical case study.Materials and methods: Clinical case description and intestinal parasites diagnosis by direct stool microscopic analysis and parasite infection intensity by means of the Kato Katz technique. N. americanus eggs were detected by Kato Katz method for 10 months on a SAF-fixed stool sample. Identification of Uncinaria sp. by qPCR.Results: N. americanus eggs are adequately preserved in SAF during the first five months.Conclusions: SAF fixative is suitable for Kato Katz method and proved to be capable of maintaining parasite intensity and N. americanus egg morphology over a period of up to five months

Polimorfismos en los genes de dihidrofolato-reductasa (dhfr) y dihidropteroato-sintasa (dhps) y modelado estructural del gen dhps en aislamientos colombianos de Toxoplasma gondii

Introduction: There are no reports describing polymorphisms in target genes of anti-Toxoplasma drugs in South American isolates.Objective: This study sought to perform cloning and sequencing of the dihydrofolate reductase (dhfr) and dihydropteroate-synthase (dhps) genes of the reference Rh strain and two Colombian isolates of Toxoplasma gondii.Materials and methods: Two isolates were obtained from the cerebrospinal fluid of HIV-infected patients with cerebral toxoplasmosis. A DNA extraction technique and PCR assay for the dhfr and dhps genes were standardized, and the products of amplification were cloned into Escherichia coli and sequenced.Results: One polymorphism (A ↔ G) was found at position 235 of exon 2 in the dhps gene. In addition, two polymorphisms (G ↔ C) at positions 259 and 260 and one polymorphism (T ↔ G) at position 371 within exon 4 of the dhps gene were detected. In this last exon, a bioinformatic analysis revealed a non-synonymous polymorphism in the coding region that could lead to the substitution of Glu (CAA or CAG) for His (encoded by codons AAU or AAC). A structural model of the T. gondii DHPS protein was calculated, and the results revealed modifications in secondary structure due to mutations.Conclusions: The methods described in this study can be used as a tool to search for polymorphisms in samples from patients with different clinical manifestations of toxoplasmosis and to examine their relationship with the therapeutic response.Introducción. No existen reportes sobre las variaciones en la secuencia de los genes blanco de los medicamentos anti-Toxoplasma en aislamientos provenientes de Suramérica.Objetivo. Clonar y secuenciar los genes de la dihidrofolato-reductasa (dhfr) y la dihidropteroato-sintetasa (dhps) de la cepa de referencia RH y de dos aislamientos colombianos de Toxoplasma gondii.Materiales y métodos. Se obtuvieron dos aislamientos de T. gondii en líquido céfalorraquídeo de pacientes colombianos positivos para HIV con toxoplasmosis cerebral. Se extrajo el ADN de los genes dhfr y dhps y se amplificaron mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los productos fueron clonados en el vector pGEM-T y secuenciados.Resultados. Se encontró un cambio de adenina por guanina (A↔G) en la posición 235 del exón 2 del gen dhps, dos cambios de guanina por citocina (G↔C) en las posiciones 259 y 260 y un cambio de timina por guanina (T↔G) en la posición 371 del exón 4 del gen dhps. Por análisis bioinformático, en este último exón se identificó un polimorfismo no sinónimo en la región codificante, que podría llevar al cambio de una Glu (CAA o CAG) por una His (codificada por los codones AAU o AAC). Se calculó el modelo estructural de la enzima dihidropteroato-sintetasa (DHPS) de T. gondii y se identificaron las modificaciones en la estructura secundaria ocasionadas por las mutaciones.Conclusiones. La metodología estandarizada puede servir como base para la búsqueda de polimorfismos en muestras de pacientes con diferentes manifestaciones clínicas de toxoplasmosis y para establecer su posible relación con los cambios en la sensibilidad a los antifolatos y la reacción al tratamiento

Impacto de la ivermectina sobre las geohelmintiasis en el foco de oncocercosis en colombia

Objetivo Evaluar el efecto de la ivermectina sobre la frecuencia de infección por geohelmintos en una población colombiana incluida en el  Programa para la Eliminación de la Oncocercosis en las Américas. Métodos Estudio de evaluación de impacto con un enfoque longitudinal con punto referente inicial, la población de Naicioná (1996) y como control, sujetos de la misma población (2008). Para el enfoque transversal se empleó como referente la población de Naicioná en 2008 y como control, sujetos de la población de Dos Quebradas en 2008. El procesamiento de las muestras de materia fecal se hizo por Ritchie-Frick modificado. Resultados Ascaris lumbricoides fue el parásito más frecuente 49,6 % (60/121; IC  95 %:37,8-63,8) en Naicioná  y 47,4 % (36/76; IC 95 %: 33,2-65,6) en Dos Quebradas. El mayor efecto de la ivermectina en población mayor de 5 años fue la disminución del riesgo de infección, con reducción de 86 % (IC95 %:74-93) para Trichiuris trichiura en la evaluación longitudinal y 63 % (IC 95 %:24-82) en la evaluación transversal. Se encontró disminución en la frecuencia de Strongyloides stercoralis 93 % (IC 95 %: 45-99), en la evaluación longitudinal y 85 % (IC95 %:-031 - 99) en la evaluación transversal.Conclusiones El uso de la ivermectina en el contexto del Programa para la Eliminación de la Oncocercosis en las Américas no es suficiente para el control de la morbilidad de todas las geohelmintiasis. Por tanto, se requiere de programas integrales que incluyan los componentes de educación y saneamiento básico