Purificação e utilização do heterodímero PSP-I/PSP-II como marcador de congelabilidade do sêmen suíno

Este estudo teve como objetivo avaliar a ação do heterodímero PSP-I/PSP-II como marcador de congelabilidade e sua influência na proteção espermática durante a criopreservação do sêmen suíno. O sêmen de quatro varrões foi congelado na presença ou não do heterodímero. Após a descongelação, analisou-se a integridade acrossomal (sodas fluorescentes), integridade da membrana plasmática (sondas fluorescentes), a atividade mitocondrial (citoquimica) e a motilidade espermática (CASA). Para a integridade da membrana plasmática e acrossomal, o tratamento com 3,0 mg/mL de PSP-I/PSP-II apresentou uma maior porcentagem de células intactas (p<0,05). Não foi observada diferença significativa entre os tratamentos quanto a motilidade e atividade mitocondrial. A média dos tratamentos com 1,5 e 3,0 mg/mL de PSP-I/PSP-II foram numericamente superiores em relação ao controle (0 mg/mL) na avaliação da atividade mitocondrial. Conclui-se que o heterodímero foi capaz de proteger a membrana plasmática e acrossomal, aumentando o percentual de espermatozoides viáveis após a criopreservação. Desta forma, pode-se considerar esta proteína como um potencial marcador de congelabilidade do sêmen suíno

PROTEÍNAS DO PLASMA SEMINAL ASSOCIADAS À CONGELABILIDADE DO SÊMEN SUÍNO

Esse trabalho objetivou identificar as proteínas do plasma seminal que estejam relacionadas com a proteção espermática durante o processo de criopreservação. Amostras de sêmen de 14 varrões foram coletadas e duas alíquotas foram separadas e destinadas à criopreservação do sêmen e ao estudo proteômico do plasma seminal. Os ejaculados foram submetidos a uma curva de resfriamento lenta. O sêmen descongelado foi ressuspenso e analisado quanto ao vigor e motilidade. Para o estudo das proteínas do plasma seminal, estes foram submetidos à eletroforese bidimensional. Os géis foram corados, digitalizados e analisados por meio do aplicativo PDQuest. Para a busca por marcadores de congelabilidade, foi feita uma divisão dos animais em dois grupos: congelabilidade boa (GFEs) e ruim (PFEs), segundo os resultados de vigor e motilidade após a descongelação. O delineamento experimental foi inteiramente casualisado. Seis animais foram considerados do grupo GFEs e apresentaram uma média para vigor e motilidade espermática de 2,2 ± 0,8 e 41,8 ± 22,9, respectivamente, enquanto o grupo PFEs foi composto por oito animais que apresentaram média de 1,9 ± 0,6 de vigor espermático e 26,8 ± 17,5 de motilidade espermática. Foram encontrados 28 spots que divergiram significativamente entre os grupos, correspondendo a 16 proteínas. Dois desses foram expressos com maior intensidade no grupo GFEs, e correspondeu a apenas uma proteína característica do plasma seminal, a Carbohydrate-binding protein. Assim, conclui-se que a Carbohydrate-binding protein pode ser utilizada como um marcador de congelabilidade para a espécie suína

CONCENTRAÇÃO DE PROTEÍNAS DO PLASMA SEMINAL E SUA RELAÇÃO COM A CRIOPRESERVAÇÃO DO SÊMEN OVINO EM DIFERENTES DILUENTES

The objective of this study was to evaluate the relation between the protein concentration in ram seminal plasma and quality parameters of the semen cryopreserved in TRIS and Coconut Water Powder (ACP102c) extenders. A total of 12 semen collections/animal of Santa Ines (n=2) and Dorper (n=2) rams were performed to obtain seminal plasma and semen cryopreservation in work extenders. The protein content was determined using the Bradford´s method. The eosin-nigrosin and hyposmotic (HOST) viable tests and motility   parameters obtained by computer assisted semen analysis were evaluated for fresh and cryopreserved semen. The ejaculates were grouped in high (AP) and low (BP) protein content, based on the mean value of protein concentration. Significantly positive correlations were found between the protein content and progressive motility (PROG), freezability (CONGEL) and negative for lateral head displacement (ALH) in the semen cryopreserved in both extenders. Therefore, positive correlation was found for total motility (MOT) in TRIS. Semen samples from AP group cryopreserved in TRIS extender were significantly better than BP group for MOT, PROG and CONGEL, and inferior for ALH. When criopreserved in ACP102c extender, the AP group were better than BP group for PROG and CONGEL. Variations in the quality of cryopreserved semen from different ejaculates may be associated with the concentration of seminal plasma proteins and may act to maintain the progressiveness of ram sperm cryopreserved in TRIS and ACP102c extenders.O objetivo deste trabalho foi avaliar a relação entre a concentração de proteínas no plasma seminal ovino com parâmetros de qualidade do sêmen criopreservado em diluentes TRIS e em Água de Coco em Pó (ACP102c). Um total de 12 coletas/animal em ovinos Santa Inês (n=2) e Dorper (n=2) foram realizadas para obtenção do plasma seminal e para criopreservação nos diluentes de trabalho. Foi utilizado o método de Bradford para determinação da concentração de proteína. Para avaliação do sêmen fresco e criopreservado foram utilizados os testes de viabilidade por eosina-nigrosina e teste hiposmótico (HOST), além dos parâmetros de motilidade em sistema de análise de sêmen auxiliada por computador (CASA). Baseado no valor médio da concentração de proteína, os ejaculados foram agrupados em alta (AP) e baixa (BP) concentração proteica. Correlações significativamente positivas foram encontradas entre a concentração de proteína com os parâmetros motilidade progressiva (PROG) e congelabilidade (CONGEL), e negativa para deslocamento lateral de cabeça (ALH) nas amostras criopreservadas em ambos os diluentes, além de correlação positiva para motilidade total (MOT) em TRIS. Sêmen de ejaculados do grupo AP criopreservados em TRIS apresentaram MOT, PROG e CONGEL significativamente superior ao grupo BP e inferiores para ALH. Quando criopreservado em ACP102c, sêmen do grupo AP foi superior ao BP para PROG e CONGEL. Variações na qualidade do sêmen criopreservado entre ejaculados podem estar associados à concentração de proteínas do plasma seminal, e estas podem atuar na manutenção da progressividade de espermatozoides ovinos criopreservados em diluentes TRIS e ACP102c

Superoxide dismutase and catalase activity in collared peccary (Pecari tajacu) seminal plasma and their relation to sperm quality

The study of the seminal plasma help us to understand the mechanisms by which reactive oxygen species (ROS) affect the sperm. The antioxidant enzymes, as the superoxide dismutase - SOD and catalase - CAT, are capable of removing the oxidative agents before they produce injuries. The aim of the current study was to investigate the activity of antioxidant enzymes SOD and CAT in seminal plasma, and their association with sperm quality in collared peccaries. Study was conducted during the dry period (August and September) on a region characterized by a semiarid climate, with an average annual temperature of 27°C and irregular rainfall (Mossoro, RN, Brazil; 5°10´S and 37°10´W). Nine ejaculates were obtained from sexually mature males (1 sample per animal) by electroejaculation. Semen was evaluated for microscopic parameters and the activity of SOD and CAT was measured by spectrophotometry. All ejaculates were white in color. Mean values for concentration were of 207 ± 160 x106 sperm/mL, motility of 83.0 ± 20.9% and viability of 72.5 ± 10.4%. In regards to the enzymatic activity, none was observed for the CAT enzyme. Trace levels of SOD (0.034 ± 0.049 AU/mgP) were detected in the ejaculates of all individuals; however, no correlation was observed between SOD levels and the sperm motility (R = 0.35; P = 0.931), vigor (R = 0.29; P = 0.133), viability (R = 0.16; P = 0.29), functional membrane (R = 0.04; P = 0.617) or morphology (R = 0.03; P = 0.637). In conclusion, we demonstrated the first description of antioxidant enzyme activity in seminal plasma of fresh ejaculates obtained from collared peccaries. SOD antioxidant activity was evident during the dry period of a semi-arid region, but no relationship between SOD and semen parameters was observed

Descripción del perfil proteomico del plasma seminal de asininos de la raza Pêga

A ausência da categoria asinina nas normas técnicas de avaliação seminal promove a necessidade de informações reprodutivas desta espécie. Objetivou-se descrever o perfil proteômico do plasma seminal de jumentos da raça Pêga (Equus asinus). Utilizaram-se seis animais púberes, com peso 239±32,6 Kg e circunferência escrotal de 36,8±6,9 cm, criados em mesma propriedade no estado do Tocantins, Brasil. Foi realizada eletroforese unidimensional, utilizando 12,5% de acrilamida e 30μg de proteína. As bandas foram descoradas e digeridas com tripsina para análise em espectrômetro de massa ESI-Q-TOF. Através de bioinformática, pelo banco de dados UniProtKB, as proteínas foram identificadas. Os termos da ontologia genética foram obtidos a partir do software STRAP®. A média da concentração proteica do plasma seminal foi 23,6±12,6 μg/μL. Foram detectadas pelo menos 26 bandas por animal (QuantityOne®). Um total de 19 bandas e 52 proteínas, com pesos entre 9,51 e 155,9 kDa, foram identificadas pela espectrometria. Os processos biológicos mais relevantes ligados às proteínas identificadas foram a regulação (24%) e processo celular (22%). As funções moleculares das proteínas foram descritas como ligação (42%) e atividade catalítica (31%). Em conclusão, a existência da descrição do padrão eletroforético destas proteínas plasmáticas seminais contribuirão com a construção de parâmetros para fertilidade.Palavras-chave: Proteômica, eletroforese, sêmen.The absence of the asinine category in the technical standards of seminal evaluation, promotes the need for reproductive information of this species. The objective of this study was to describe the proteomic profile of seminal plasma of Pêga donkeys (Equus asinus). Six pubertal animals, weighing 239±32.6 Kg and scrotal circumference of 36.8±6.9 cm, were raised in same farm in the state of Tocantins, Brazil. One-dimensional electrophoresis was performed using 12.5% acrylamide and 30μg protein. The bands were destained and digested with trypsin for analysis on ESI-Q-TOF mass spectrometer. Through bioinformatics, through the UniProtKB database, the proteins were identified. The terms of the genetic ontology were obtained from the software STRAP®. The mean protein concentration of seminal plasma was 23.6±12.6 μg/μL. At least 26 bands per animal were detected (QuantityOne®). A total of 19 bands and 52 proteins, with weights between 9.51 and 155.9 kDa, were identified by spectrometry. The most relevant biological processes related to the identified proteins were regulation (24%) and cellular process (22%). The molecular functions of the proteins were described as binding (42%) and catalytic activity (31%). In conclusion, the existence of a description of the electrophoretic pattern of these seminal plasma proteins will contribute to the construction of parameters for fertility.Keywords: Proteomics, electrophoresis, semen.La ausencia de la categoría asinina en las normas técnicas de evaluación seminal promueve la necesidad de información reproductiva da especie. Se objetivó describir el perfil proteómico del plasma seminal de asnos de la raza Pêga (Equus asinus). Se utilizaron seis animales púberes, con peso 239±32,6 Kg y circunferencia escrotal de 36,8±6,9 cm, creados en misma granja del estado de Tocantins, Brasil. Se realizó una electroforesis unidimensional, utilizando 12,5% de acrilamida y 30μg de proteína. Las bandas fueron blanqueadas y digeridas con tripsina para análisis en espectrómetro de masa ESI-Q-TOF. Através de bioinformática, por la base de datos UniProtKB, las proteínas fueron identificadas. Los términos de la ontología genética se obtuvieron a partir del software STRAP®. La media de la concentración proteica del plasma seminal fue de 23,6±12,6 μg/μL. Se detectaron al menos 26 bandas por animal (QuantityOne®). Un total de 19 bandas y 52 proteínas, con pesos entre 9,51 y 155,9 kDa, fueron identificadas por la espectrometría. Los procesos biológicos más relevantes relacionados con las proteínas fueron la regulación (24%) y el proceso celular (22%). Las funciones moleculares se describieron como enlace (42%) y actividad catalítica (31%). En conclusión, la existencia de la descripción del patrón electroforético de estas proteínas plasmáticas seminales contribuirán a la construcción de parámetros para la fertilidad.Descriptores: Proteómica, electroforesis, semen

Respostas hormonais ao tratamento com GnRH e estradiol e suas correlações com desenvolvimento testicular e número de células sertoli em touros angus x charolês na fase de pré-puberdade

O objetivo desta pesquisa foi determinar as correlações entre níveis hormonais aos 2 e 6 meses de idade e diâmetro e histologia testicular em tourinhos Angus x Charolês aos 6 meses de idade (n=15). Aos dois meses, duas amostras basais de sangue foram coletadas a intervalos de 1 hora. Após a última coleta, os animais receberam 5 mg de GnRH e 1,5 e 3,0 horas depois novas amostras foram coletadas. Aos seis meses, os tourinhos foram tratados com 1 mg de estradiol benzoato (E) e receberam 10 mg de GnRH doze horas depois. Após cinco dias, os tourinhos receberam 10 mg de GnRH, mas sem pré-tratamento com estradiol. As amostras de sangue foram coletadas 1,5 e 3,0 horas após a injeção de GnRH nas duas ocasiões. Imediatamente antes dos tratamentos com estradiol e GnRH, duas amostras basais foram coletadas. Os animais foram cirurgicamente castrados aos seis meses. Houve correlações entre níveis de FSH estimulados com GnRH aos dois meses e diâmetro testicular e número de células Sertoli e espermatogônias A1 por testículo aos seis meses de idade (r = -0,65 a -0,80). As associações entre FSH aos dois meses e número de seções de túbulos seminíferos sem células germinativas (r = 0,59) e número de túbulos com espermátides circulares (r = -0,55) também foram significativas. As correlações entre níveis de LH e esteróides e parâmetros testiculares não foram significativas. Aos 6 meses, níveis basais de FSH não alteraram 12 horas após estradiol, mas as concentrações de FSH estimuladas com GnRH foram 2,5 vezes mais elevadas, quando se usou estradiol em relação ao uso somente de GnRH. Modelos de regressão com número de células Sertoli, em função dos níveis de FSH após GnRH, mostraram que, quando se utilizaram GnRH + estradiol, obteve-se maior valor de R² (0,43) em comparação à injeção somente de GnRH (0,30). Portanto, concentrações periféricas de FSH são potenciais indicadores do desenvolvimento testicular na fase de pré-puberdade