Máscaras de tecido na prevenção da COVID-19: expectativa ou realidade?

Com a pandemia da COVID-19, causada pelo vírus SARS-Cov-2, o uso de máscaras para evitar transmissão tornou-se imprescindível em todo mundo,  preconizado como medida essencial para proteção, em conjunto as condutas de higienização das mãos e distanciamento social. As máscaras ideais, que fornecem maior proteção, são denominadas N95 e PFF2; já as máscaras cirúrgicas, mais utilizadas e conhecidas, têm faixas variáveis de proteção dependendo dos fornecedores. Em função da alta demanda mundial e necessidade de priorizar as máscaras de proteção e cirúrgicas aos profissionais que atuam na linha de frente no combate a pandemia, as autoridades de saúde mundialmente estimulam o uso de máscaras de tecido, também denominadas máscaras caseiras, que são produzidas artesanalmente, surgindo questionamentos da validade ou não do uso na prevenção da COVID-19. Assim, este trabalho objetivou revisar os estudos na temática, constatando que há opiniões divergentes de pesquisadores quando a eficiência desse utensílio, mas há metodologias capazes de avaliar o potencial desses utensílios, demonstrando que a eficácia está condicionada a qualidade dos materiais e técnica de confecção empregada, passível de obtenção de máscaras de tecidos com benefício na contenção dessa infecção. Assim, o trabalho disponibiliza orientações para confecção e manejo dessas máscaras; concluindo que uso de máscaras adequadas de tecidos pode representar ferramenta de grande utilidade na prevenção da COVID-19. ABSTRACTWith the pandemic of COVID-19, caused by the SARS-Cov-2 virus, the use of masks to prevent transmission has become essential worldwide, recommended as an essential measure for protection, together with hand hygiene and social distance. The ideal masks, which provide greater protection, are called N95 and PFF2; the surgical masks, more used and known, have variable protection bands depending on the suppliers. Due to the high global demand and the need to prioritize protective and surgical masks for professionals working on the front lines in the fight against the pandemic, health authorities worldwide encourage the use of fabric masks, also called homemade masks, which are produced handcrafted, raising questions about the validity or not of use in the prevention of COVID-19. Thus, this study aimed to review the studies on the theme, noting that there are divergent opinions from researchers when the efficiency of this tool, but there are methodologies capable of evaluating the potential of these tools, demonstrating that the effectiveness is conditioned to the quality of the materials and the cooking technique employed, capable of obtaining tissue masks with benefit in containing this infection. Thus, the work provides guidelines for making and handling these masks; concluding that the use of appropriate fabric masks can represent a very useful tool in the prevention of COVID-19.Keywords: SARS-CoV-2; homemade masks; efficiency; confection. RESUMENCon la pandemia de COVID-19, provocada por el virus SARSCov-2, el uso de mascarillas para prevenir la transmisión se ha vuelto imprescindible a nivel mundial, recomendado como medida imprescindible de protección, junto con la higiene de manos y el distanciamiento social. Las máscaras ideales, que brindan mayor protección, se denominan N95 y PFF2; las mascarillas quirúrgicas, más utilizadas y conocidas, tienen bandas de protección variables según los proveedores. Debido a la alta demanda mundial y la necesidad de priorizar las mascarillas protectoras y quirúrgicas para los profesionales que trabajan en primera línea en la lucha contra la pandemia, las autoridades sanitarias de todo el mundo fomentan el uso de mascarillas de tela, también llamadas mascarillas caseras, que se producen de forma artesanal. planteando dudas sobre la validez o no del uso en la prevención de COVID-19. Así, este trabajo tuvo como objetivo revisar los estudios sobre el tema, notando que existen opiniones divergentes de los investigadores a la hora de la eficiencia de este utensilio, pero existen metodologías capaces de evaluar el potencial de estos utensilios, demostrando que la efectividad está condicionada a la calidad. de los materiales y la técnica de cocción empleada., capaz de obtener mascarillas de tejido con beneficio para contener esta infección. Por lo tanto, el trabajo proporciona pautas para la fabricación y manipulación de estas máscaras; concluyendo que el uso de máscaras de tela adecuadas puede representar una herramienta muy útil en la prevención de COVID-19.Palabras Clave: SARS-CoV-2; Máscaras caseras; Eficiencia; Confección

CARACTERIZAÇÃO FARMACOBOTÂNICA DAS FOLHAS DE Eugenia unifora L. (MYRTACEAE) COLETADAS EM SÃO LUÍS – MA, BRASIL

Eugenia unifora L. (Myrtaceae) é uma pequena árvore ou arbusto conhecida como pitangueira, que alcança 2 a 4 m de altura. O chá das folhas é utilizado na prática popular como antidiarreico, antifebril, hipotensor, diurético, antirreumático e hipoglicemiante. Este trabalho foi desenvolvido com objetivo de realizar estudo farmacobotânico das folhas adultas de Eugenia unifora coletadas em São Luís, estado do Maranhão, Brasil; visando determinar suas características morfoanatômicas. Para o estudo morfológico, as amostras frescas foram analisadas com auxílio de estereomicroscópio. Para estudo anatômico, foram realizadas secções transversais e paradérmicas da lâmina foliar, seguido de clarifcação e coloração com azul de Astra e fucsina básica. Os resultados demonstraram que as folhas desta espécie são simples, opostas, glabras, margem inteira, contorno ovalado a oblongo, ápice agudo, base arredondada até subcordada. A lâmina foliar é hipoestomática, com estômatos do tipo paracítico e anomocítico; o mesoflo é dorsiventral, onde são localizadas bolsas secretoras subepidérmicas e idioblastos, com drusas e cristais; a nervura principal é côncava-convexa, com único feixe vascular bicolateral. As características observadas neste trabalho permitem estabelecer parâmetros que possibilitam a identifcação das folhas de Eugenia unifora, contribuindo efetivamente nos estudos de autenticidade da espécie.Descritores: E. unifora; Anatomia Foliar; Caracterização Morfológica; Plantas Medicinais.Abstract: Pharmacobotanical caracterization of the leaves from Eugenia unifora L. (Myrtaceae) collected in São Luís-MA, Brazil. Eugenia unifora L. (Myrtaceae) is a small tree or shrub that reaches a height of 2 to 4m, known as pitangueira. The leaf tea is used in popular practice as antidiarrheal, antipyretic, hypotensive, diuretic, antirheumatic and hypoglycaemic. The aim of this work was to perform the pharmacobotanical study of mature leaves of Eugenia unifora collected in Sao Luis, Maranhão, Brazil, determining their morphoanatomic characteristics. For the morphological study, fresh samples were analyzed with a stereomicroscope. For anatomical study, transverse and paradermic sections were made of the leaf, followed by clearing and staining with Astra blue and basic fuchsin. The results showed that the leaves of this species are simple, opposite, glabrous, entire margin, oval to oblong contour, acute apex, rounded to subcordate base. The leaf is hypostomatic with paracitic and anomocytic stomata; the mesophyll is dorsiventral, with subepidermal secretory duct and druses and crystals in idioblasts; the midrib is concave-convex, with a single bicolateral vascular bundle. The characteristics observed in this study led us to establish parameters that allow the identifcation of the leaves of Eugenia unifora, contributing effectively on the studies of authenticity of the specie.Descriptors: E. unifora; Leaf Anatomy; Morphological Characterization; Medicinal Plants

AVALIAÇÃO MOLUSCICIDA E PERFIL FITOQUÍMICO DAS FOLHAS DE CARYOCAR BRASILIENSE CAMB.

Caryocar brasiliense Camb. (Caryocaraceae), espécie conhecida vulgarmente por pequizeiro, compreende uma árvore de grande porte, encontrada facilmente no território brasileiro, principalmente em regiões de cerrado e que apresenta frutos comestíveis. Na prática popular, a espécie é usada no combate à bronquite, resfriado e como antitumoral. Considerando a problemática da esquistossomose no Brasil, extrato hidroalcoólico das folhas de Caryocar brasiliense foi submetido a testes para detecção do seu perfil fitoquímico e de sua atividade moluscicida contra indivíduos adultos da espécie Biomphalaria glabrata. Na avaliação fitoquímica, foi comprovada a presença de saponinas, taninos, esteroides, flavonoides, cumarinas e resinas. No teste de atividade biológica, foi observada forte relação linear entre a concentração e a taxa de mortalidade, que alcançou a proporção de 100% na concentração de 0,17 mg/mL. Estes resultados demonstraram a presença de importantes metabólitos secundários nas folhas de Caryocar brasiliense e o potencial desta planta para ser empregada como agente moluscicida.Palavras-chave: Caryocar brasiliense. Provas fitoquímicas. Atividade moluscicida.MOLLUSCICIDE ASSESSMENT AND PHYTOCHEMISTRY PROFILE OF THE LEAVES OF CARYOCAR BRASILIENSE CAMBAbstract: Caryocar brasiliense Camb (Caryocaraceae), species known as pequi tree, is a large tree, easy founded in Brazilian territory, especially in cerrado regions and has eatable fruits. In popular practice, it has been used in bronchitis and cold struggle as well as antitumor. Considering the Brazilian schistosomiasis problem, the hydroalcoholic extract from the Caryocar brasiliense sleeves was submitted to tests to detection of its phytochemistry profile and its molluscicide activity against Biomphalaria glabrata species adult individuals. In the phytochemistry assessment, it was detected the presence of saponin, tannin, steroids, flavonoids, coumarin and resins. In the biological activity test, it was observed strong linear relation between the concentration and the mortality rate, reached the proportion of 100% concentration in 0,17 mg/mL. These results demonstrate the presence of important Secondary metabolite in C. brasiliense leaves and this plant potential to be used as a molluscicide agent.Keywords: Caryocar brasiliense. Phytochemical tests. Molluscicidal activity.EVALUACIÓN MOLUSQUICIDA Y PERFIL FITOQUÍMICO DE LAS HOJAS DE CARYOCAR BRASILIENSE CAMB.Resumen: Caryocar brasiliense Camb (Caryocaraceae), especie conocida comúnmente como pequizeiro, es un árbol grande encontrado facilmente en Brasil, principalmente en regiones de cerrado y que presenta frutos comestibles. En la práctica popular, es usada en el combate de la bronquitis, resfriado y como antitumoral. Teniendo en cuenta el problema de la esquistosomiasis en Brasil, este trabajo tuvo el objetivo de realizar el estudio fitoquímico y la evaluación de la atividad molusquicida contra Biomphalaria glabrata del extracto hidroalcoholico de las hojas de C. brasiliense. En la evaluación de la fitoquímica, se detectó la presencia de saponinas, taninos, esteroides, flavonoides, cumarinas y resinas. En la prueba de actividad biológica, se observó la fuerte relación linear entre la concentración y la tasa de mortalidad, que alcanzó la proporción de 100% en la concentración de 0,17 mg/mL. Estos resultados demuestraron la presencia de importantes metabolitos secundarios en las hojas de C. brasiliense y el potencial de esta planta para ser empleada como un agente molusquicida.Palabras clave: Caryocar brasiliense. Pruebas fitoquímicas. Actividad molusquicida

Toxicidade e avaliação de atividade moluscicida de folhas de Turnera ulmifolia L.

Turnera ulmifolia L. (Turneraceae) is an indigenous herb from tropical America, occurring naturally in empty urban lands. In folk medicine, it is used for treating pains, fever, rheumatism, bleeding and digestive disorders. The hydroalcoholic extract of leaves of T. ulmifolia was analysed for molluscicidal activity against adult snails of Biomphalaria glabrata, for cytotoxicity potential with brine shrimp assay and for phytochemistry characterization. The hydroalcoholic extract was active in the brine shrimp lethality bioassay (LC50 = 224.56 µg/mL) and did not show any activity against adult snails of B. glabrata after 72 hours from treatment onset. The results indicated the presence of secondary metabolites as cyanogenic glycosides, hydrolysable tannins, flavonoids, steroids and alkaloids. These results suggest the potential of T. ulmifolia leaves for obtaining actives compounds, mainly with antitumoral activity.Turnera ulmifolia L. (Turneraceae) é uma erva nativa da América tropical, que ocorre espontaneamente em terrenos baldios. Na medicina popular, é utilizada no combate à bronquite, leucorréia, dores em geral, febre, má digestão, reumatismo e hemorragias. O extrato hidroalcoólico das folhas de T. ulmifolia foi submetido a testes para avaliar sua atividade moluscicida contra indivíduos adultos da espécie Biomphalaria glabrata, sua citotoxicidade geral através do ensaio de letalidade contra Artemia salina e para a detecção do seu perfil fitoquímico. O extrato testado foi ativo contra larvas de A. salina com DL50 de 224,56 µg/mL e inativo contra caramujos adultos da espécie B. glabrata, não havendo mortalidade até 72 horas do início do experimento. Observou-se resultados positivos para glicosídeos cianogênicos, taninos hidrolisáveis, flavonóides, esteróides e alcalóides. Estes resultados mostram o potencial das folhas de T. ulmifolia para a obtenção de substâncias bioativas, principalmente com atividade antitumoral

ESTUDOS PRÉ-CLÍNICOS DE ATIVIDADE GIARDICIDA DE Chenopodium ambrosioides L. E A PADRONIZAÇÃO DOS EXTRATOS NA PESQUISA E DESENVOLVIMENTO DE FITOTERÁPICOS

Chenopodium ambrosioides L. (Chenopodiaceae), conhecida como erva-de-Santa-Maria ou mastruz, representa espécie exótica, de grande ocorrência no estado do Maranhão, muito utilizada na prática popular para diversos fins terapêuticos. Estudos farmacológicos têm comprovado o potencial da espécie para desenvolvimento de bioprodutos como alternativa terapêutica. Assim, o objetivo deste trabalho foi desenvolver metodologia analítica para padronização dos extratos de C. ambrosioides empregando ensaios químicos e biológicos de atividade anti-Giardia, visando o desenvolvimento de tecnologia farmacêutica na obtenção de novos fármacos no tratamento da giardíase. Foram obtidos extratos das folhas de C. ambrosioides por planejamento fatorial dos parâmetros: natureza do solvente (etanol 70% e água), operação de extração (maceração, percolação e extração por Soxhlet) e hidromódulo; submetidos a análise química e avaliação da atividade giardicida in vitro. Os resultados permitem concluir que a obtenção dos extratos hidroalcoólicos das folhas de C. ambrosioides pelo procedimento extrativo de percolação e maceração representam os extratos com melhor perfil químico e/ou atividade giardicida; evidenciando que a natureza do solvente, o procedimento extrativo e o hidromódulo são variáveis que  infuenciam na obtenção dos extratos da espécie em estudo.Descritores: Chenopodium ambrosioides; Padronização de Extratos; Atividade Giardicida; in vitro.Abstract: Chenopodium ambrosioides L., Chenopodiaceae, (herb-of-Santa-Maria or mastruz), represents high occurrence alien species, in the State of Maranhão, widely used in popular practice for many therapeutic purposes. Pharmacological studies have demonstrated the potential of species to develop therapeutic bioproducts such as new alternatives. Thus, the goal of this work was to developanalytical methodology for standardized extracts of Chenopodium. ambrosioides employing chemical and biological tests of giardicidal activity, aiming at the development of pharmaceutical technology in getting new drugs for Giardia treatment. Were obtained extracts of leaves of C. ambrosioides by factorial planning factors: nature of solvent (ethanol 70 and water), operation of extraction (maceration, percolation and Soxhlet extraction) and hydromodule (plant:solvent); subjected to chemical analysis and evaluation of giardicidal activity  in vitro. The results suggest that the obtaining of hydroalcoholic extracts from the leaves of C. ambrosioides extractive of percolation and maceration represents the extract with better chemical profle and/or giardicidal activity; evidencing that the nature of the solvent, extractive procedure and hydromodule are variables that infuence in obtaining extracts of the species under study.Descriptors: Chenopodium ambrosioides; Standardization of Extracts; Giardicidal Activity; in vitro

Eugenia uniflora

Eugenia uniflora L. is a member of the Myrtaceae family and is commonly known as Brazilian cherry tree. In this study, we evaluated the chemical composition of Eugenia uniflora L. essential oil (EuEO) by using gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and assessed its anti-Leishmania activity. We also explored the potential mechanisms of action and cytotoxicity of EuEO. Thirty-two compounds were identified, which constituted 92.65% of the total oil composition. The most abundant components were sesquiterpenes (91.92%), with curzerene (47.3%), γ-elemene (14.25%), and trans-β-elemenone (10.4%) being the major constituents. The bioactivity shown by EuEO against promastigotes (IC50, 3.04 μg·mL−1) and amastigotes (IC50, 1.92 μg·mL−1) suggested significant anti-Leishmania activity. In the cytotoxicity determination, EuEO was 20 times more toxic to amastigotes than to macrophages. Hemolytic activity was 63.22% at the highest concentration tested (400 μg·mL−1); however, there appeared to be no toxicity at 50 μg·mL−1. While the data show that EuEO activity is not mediated by nitric oxide production, they do suggest that macrophage activation may be involved in EuEO anti-Leishmania activity, as evidenced by increases in both the phagocytic capacity and the lysosomal activity. More studies are needed to determine in vivo activity as well as additional mechanisms of the anti-Leishmania activity

PROSPECÇÃO FITOQUÍMICA E ATIVIDADE MOLUSCICIDA DE FOLHAS DE MOMORDICA CHARANTIA L

Momordica charantia L. (melão-de-São-Caetano - Cucurbitaceae) é uma trepadeira que se adaptou perfeitamente ao Brasil, sendo usada na medicina popular, no combate a leucorréia, como antidiabética, cicatrizante e antireumática. Este trabalho objetivou realizar o perfil fitoquímico e avaliar a ação moluscicida das folhas de M. charantia. As folhas foram maceradas por 10 dias com etanol 70% e éter etílico. As avaliações fitoquímicas dos extratos revelaram a presença de alcaloides, fenóis, catequinas, esteróides e saponinas. Foram obtidos resultados negativos para glicosídeos cianogênicos, antraquinonas, cumarinas, resinas e triterpenos. O extrato hidroalcoólico das folhas desta espécie apresentou atividade moluscicida significante, com 85% de mortalidade na concentração de 100 ppm. Estes resultados contribuirão com a avaliação da integridade dessa espécie, como também demonstram o potencial desta planta no controle de moluscos.Palavras-chave: Momordica charantia. Testes fitoquímicos. Atividade moluscicida.ABSTRACTMomordica charantia L. (melão-de-São-Caetano - Cucurbitaceae) is a climber that is perfectly adapted to Brazil and in popular medicine, is used to combat leukorrhea as antidiabetic, healing and antirheumatic. This study aimed to do the phytochemical profile and the evaluation of the molluscicidal action of the leaves from M. charantia. The leaves were macerated for 10 days with 70% ethanol and ethyl ether. The phytochemical evaluations of the extracts showed the presence of alkaloids, phenols, catechins, steroids and saponins. Negative results were obtained for cyanogen heterosides, antraquinones, coumarins, resins and triterpenes. The hydroalcoholic extract showed a significant molluscicidal activity with 85% of mortality at 100 ppm. This results will contribute to assessing the integrity of this spice, but also demonstrate the potential use of this plant in the snail control.Keywords: Momordica charantia. Phytochemical tests. Molluscicidal activity.RESUMENMomordica charantia L. (melão-de-São-Caetano - Cucurbitaceae) es una enredadera que se adaptó perfectamente en Brasil, siendo utilizada en la tradición popular, en el combate de la leucorrea, diabetes, como cicatrizante y para el reumatismo. Este trabajo tuvo el objetivo de realizar el estudio fitoquímico y la evaluación de la acción molusquicida de las hojas de M. charantia. Las hojas fueron extraidas por 10 días con etanol 70% y eter etílico. Las evaluaciones fitoquímicas de los extractos revelaron la presencia de alcaloides, fenoles, catechinas, esteroides y saponinas. Fueron obtenidos resultados negativos para glicósidos cianogênicos, antraquinonas, cumarinas, resinas y triterpenos. El extracto hidroalcoholico de las hojas de este especie presentó una significativa actividad molusquicida, con 85% de mortalidad en la concentración de 100 ppm. Los resultados contribuirán con la evaluación de la integridad, bien como demuestran el potencial empleo de esta planta en el control de moluscos.Palabras clave: Momordica charantia. Pruebas fitoquímicas. Actividad molusquicida

Toxicidade e avaliação de atividade moluscicida de folhas de Turnera ulmifolia L.

Turnera ulmifolia L. (Turneraceae) is an indigenous herb from tropical America, occurring naturally in empty urban lands. In folk medicine, it is used for treating pains, fever, rheumatism, bleeding and digestive disorders. The hydroalcoholic extract of leaves of T. ulmifolia was analysed for molluscicidal activity against adult snails of Biomphalaria glabrata, for cytotoxicity potential with brine shrimp assay and for phytochemistry characterization. The hydroalcoholic extract was active in the brine shrimp lethality bioassay (LC50 = 224.56 µg/mL) and did not show any activity against adult snails of B. glabrata after 72 hours from treatment onset. The results indicated the presence of secondary metabolites as cyanogenic glycosides, hydrolysable tannins, flavonoids, steroids and alkaloids. These results suggest the potential of T. ulmifolia leaves for obtaining actives compounds, mainly with antitumoral activity.Turnera ulmifolia L. (Turneraceae) é uma erva nativa da América tropical, que ocorre espontaneamente em terrenos baldios. Na medicina popular, é utilizada no combate à bronquite, leucorréia, dores em geral, febre, má digestão, reumatismo e hemorragias. O extrato hidroalcoólico das folhas de T. ulmifolia foi submetido a testes para avaliar sua atividade moluscicida contra indivíduos adultos da espécie Biomphalaria glabrata, sua citotoxicidade geral através do ensaio de letalidade contra Artemia salina e para a detecção do seu perfil fitoquímico. O extrato testado foi ativo contra larvas de A. salina com DL50 de 224,56 µg/mL e inativo contra caramujos adultos da espécie B. glabrata, não havendo mortalidade até 72 horas do início do experimento. Observou-se resultados positivos para glicosídeos cianogênicos, taninos hidrolisáveis, flavonóides, esteróides e alcalóides. Estes resultados mostram o potencial das folhas de T. ulmifolia para a obtenção de substâncias bioativas, principalmente com atividade antitumoral

Syzygium cumini (L.) Skeels essential oil and its major constituent α-pinene exhibit anti-Leishmania activity through immunomodulation in vitro

AbstractEthnopharmacological relevanceSyzygium cumini (L.) Skeels (Myrtaceae), commonly known as “jambolão” in Brazil is widely used in folk medicine against leishmaniasis, inflammation, chronic diarrhea, and ulcers. It is one of the most commonly used plants for the treatment of diabetes worldwide. In previous studies, Syzygium cumini was shown to possess antihyperlipidemic and anti-allergic properties, and to exhibit good performance as an antimicrobial agent against bacteria, fungi, and protozoa parasites of the genus Leishmania and Trypanosoma. This study was aimed at evaluating the effects of S. cumini essential oil (ScEO) and its major component α-pinene on Leishmania (Leishmania) amazonensis, as well as their cytotoxicity and possible mechanisms of action.Materials and methodsTo evaluate the anti-proliferative effect on Leishmania, effects on promastigote and axenic amastigote forms were assessed using tetrazolium salt (MTT) assay. The intramacrophagic amastigotes were exposed to ScEO and α-pinene to determine the survival index. To gain insight into the mechanism of action involved in the effect on the samples, we evaluated the modulation of macrophage activation state by observing structural (phagocytic and lysosomal activities) and cellular (nitric oxide increase) changes. To assess the safety profile of ScEO and α-pinene, murine macrophages and human red blood cells were treated with ScEO and α-pinene and the selectivity index was calculated for each treatment.Resultsα-Pinene was effective against Leishmania amazonensis promastigote forms, with a half-maximal inhibitory concentration (IC50) value of 19.7µg/mL. α-Pinene was more active (IC50 values of 16.1 and 15.6µg/mL against axenic and intracellular amastigotes, respectively) than ScEO (IC50 values of 43.9 and 38.1µg/mL against axenic and intracellular amastigotes, respectively). Our results showed that the anti-Leishmania effects were mediated by immunomodulatory activity, as evidenced by the observed increases in both phagocytic and lysosomal activity, and the elevated NO levels. ScEO and α-pinene exhibited low cytotoxicity against murine macrophages and human erythrocytes. The 50% cytotoxicity concentration (CC50) values for the macrophages in the MTT assay were 614.1 and 425.2µg/mL for ScEO and α-pinene, respectively, while the corresponding half-maximal hemolytic concentration (HC50) values were 874.3 and 233.3µg/mL.ConclusionsTaken together, the results demonstrate that ScEO and its major constituent α-pinene have significant anti-Leishmania activity, modulated by macrophage activation, with acceptable levels of cytotoxicity in murine macrophages and human erythrocytes. Further work is warranted, involving more in-depth mechanistic studies and in vivo investigations