Effect of seminal plasma on the sperm motility patterns and their relationship to the cryopreservation of llama semen

La pregunta que nos hacemos todos los que trabajamos en camélidos sudamericanos (CSA) es “¿Porqué si se insemina con la misma cantidad de espermatozoides motiles/vivos no se preña con semen criopreservado y si con el semen fresco? ”. La criopreservación de gametos permite conservar el material genético de reproductores de alta calidad genética por tiempo ilimitado y además permite transportar este material a lugares distantes de donde se encuentre el reproductor. La criopreservación de semen de camélidos sudamericanos (CSA) no ha tenido el mismo éxito que se ha observado en la especie bovina. Tanto en la llama como en la alpaca, aún se insemine con semen criopreservado el mismo número de espermatozoides vivos y móviles que con semen fresco, se obtienen muy bajos porcentajes de preñez (0 al 26%) (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Huanca et al., 2007; Giuliano et al., 2012a). Como consecuencia de esta situación, no hay campañas masivas de inseminación artificial (IA) con semen criopreservado. Diversos protocolos se han desarrollado con el fin de mejorar los resultados post-descongelado. Con respecto a los crioprotectores penetrantes, el glicerol al 7% (equilibrado a 5 °C) ha sido prácticamente el único crioprotector empleado (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Santiani et al., 2005; Morton et al., 2010). En menor medida se ha probado etilenglicol en alpacas (Santiani et al., 2005; 2013). En nuestro laboratorio, determinamos que el equilibramiento a temperatura ambiente y el uso de dimetilformamida al 7% como crioprotector penetrante, conservó la movilidad, viabilidad e integridad funcional de la membrana plasmática espermática y a su vez conservó la integridad y condensación de la cromatina de los espermatozoides de llama (Carretero et al., 2014). En el mismo trabajo, utilizando glicerol al 7%, observamos que un 87- 100% de los espermatozoides tenían el ADN fragmentado. Hasta la actualidad, la mayoría de los estudios realizados sobre criopreservación de semen de CSA se han centrado en determinar los efectos de diferentes crioprotectores y concentraciones de los mismos, temperaturas de equilibramiento y curvas de congelamiento sobre la viabilidad y la movilidad espermática.Everyone who work with camelids ask themselves “Why the pregnancy rate is higher using fresh semen versus frozen semen?”, This results are obtain even when the same amount of motile and viable spermatozoa are use in the artificial insemination. Gamete cryopreservation preserves the genetic material of males with superior genetic quality for unlimited time and also it allows the transport of this material to distant places where the males are located. Cryopreservation of South American Camelids (SAC) semen, didn’t had the same success that has been observed in cattle. Low pregnancy rates are obtain in llamas and alpacas when they are inseminated with frozen thawed spermatozoa (0 to 26%), even when the same amount of live and motile spermatozoa are inseminated compared to fresh semen used (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Huanca et al., 2007; Giuliano et al., 2012a). Because of these results no massive campaigns of artificial insemination (AI) with frozen/thawed semen are performed. Several protocols have been developed in order to improve outcomes, different cryoprotectants like glycerol 7% had been tested and is [practically the most used in cryopreserved semen (Bravo et al., 2000a; Aller et al., 2003; Vaughan et al., 2003; Santiani et al., 2005; Morton et al., 2010). A small use has been giving to ethylene glycol but is been tested in alpaca semen (Santiani et al., 2005; 2013). In our laboratory, we determine that the equilibration at room temperature using dimethylformamide (7%) as a penetrating cryoprotectant can preserve motility, viability and membrane functional integrity of llama spermatozoa (Carretero et al., 2014). In this same work, we found 87- 100% of sperm with fragmented DNA using glycerol 7% as cryoprotectant. To the present, most studies on cryopreservation of camelids semen have focused on determining the effects of different cryoprotectants and concentrations, temperature equilibration and freezing curves on the viability and motility sperm.Fil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Carretero, Maria Ignacia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Giuliano, Susana María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; Argentin

Plasma IGF1 and 17β-Estradiol Concentrations During the Follicular Wave in Llamas

The aim of this study was to characterize the temporal association between follicular waves and circulating concentrations of 17β-estradiol (E2) and IGF1 in llamas. Follicular waves could be clearly divided in three phases: growth, plateau and regression; with a mean duration of 18.8 ± 0.32 days. All follicular waves showed overlapping, so that as one dominant follicle was regressing, another one was growing. E2 plasma concentration showed a wavelike pattern, similar to that followed by the dominant follicle; reaching its maximum concentration at the end of the growth phase and decreasing at the end of the plateau phase. IGF1 also showed variations during the follicular wave. It tended to increase during the growth phase and decreased toward Days 14 and 16. IGF1 reached its maximum concentration before E2 did (5 ± 0.8 vs. 7.2 ± 0.5 days after wave emergence) and before the maximum follicular diameter was attained (10.2 ± 0.46 days after wave emergence). Both hormones started to rise again in coincidence with the development of a new follicular wave. The observed profiles allow to suggest that IGF1 could have a role on folliculogenesis and ovarian steroideogenesis in llamas, as reported for other species.Fil: Gallelli, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Bianchi, Carolina Paula. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Tandil. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil. Provincia de Buenos Aires. Gobernación. Comision de Investigaciones Científicas. Centro de Investigación Veterinaria de Tandil; ArgentinaFil: Zampini, Enzo German. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Aba, Marcelo Alfredo. Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Gambarotta, Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentin

Sincronización de llamas donantes de embriones con un análogo sintético de la GnRH : resultados preliminares

El objetivo del trabajo es desarrollar un protocolo simple y económico para la sincronización de la onda folicular en llamas donantes de embriones, mediante la aplicación de dos dosis de buserelina. Las hembras fueron divididas en cuatro grupos según la fase de la onda folicular determinada por ultrasonografía transrectal en dos mediciones diarias sucesivas: Grupo I (fase de crecimiento): folículos en crecimiento < 7 mm; grupo II (fase de dominancia): folículo dominante en crecimiento ≥ 7 mm; grupo III (fase de estática): folículos con variaciones menores a 0,5 mm y grupo IV (fase de regresión): folículos que disminuyen su diámetro. El día 0 se aplicó una dosis de 8 μg de buserelina (análogo sintético de GnRH) para la inducción de la ovulación. Ocho días posteriores, se administró una nueva dosis de buserelina seguida de una dosis de 250 μg de cloprostenol (prostaglandina sintética). El día 15 cada grupo recibió una dosis de cloprostenol y aquellas hembras que presentaron un folículo ≥ 6 mm, se les indicó servicio natural con un macho de fertilidad probada junto con una dosis de buserelina. Ocho días luego del servicio natural, se realizó el lavaje uterino transcervical a fin de recuperar el embrión. Hasta el momento, se utilizaron 10 hembras donantes de embriones (Grupo I: n=1; Grupo II: n=4; Grupo III: n=2; Grupo IV: n=3), de las cuales 7 (70%) respondieron en forma positiva al tratamiento de sincronización folicular y recibieron servicio natural (Grupo I: n=0/1 (0%); Grupo II: n=3/4 (75%); Grupo III: n=1/2 (50%); Grupo IV: n=3/3 (100%)). Se obtuvieron cuatro embriones. Como conclusión, sería posible sincronizar llamas donantes de embriones utilizando dos dosis de buserelina separadas por 8 días junto con una dosis de prostaglandina. Palabras clave: llamas, sincronización, embrión.Fil: Zampini, Enzo. Universidad de Buenos AiresFil: Gallelli, Florencia. Buenos Aires (Argentina). Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET).Fil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos AiresFil: Trasorras, Virginia. Buenos Aires (Argentina). Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET)

Criopreservación de semen equino: efecto de Trehalosa y Duodecil Sulfato de Sodio (SDS) adicionados a un diluyente base

El objetivo del trabajo fue evaluar el efecto protector de Trehalosa (T) y la combinación de T y SDS, a diferentes concentraciones T0; T1,6 (0,156%); T3,3 (0,312%); T6,3 (0,624%) y T3,3 con SDS12 (0,125%); SDS20 (0,250%); SDS50 (0,500%), adicionadas a un diluyente (DIL) base EDTA-Lactosa con 20% de yema de huevo y 5% de dimetilformamida sobre el espermatozoide equino durante el proceso de congelación y descongelación. Los eyaculados de equinos raza Criolla Argentino (n=10, r=2), fueron filtrados y se evaluaron las características macroscópicas: Color, Aspecto, Volumen (ml) y microscópicas: Movilidad (M) (AndroVision®, MinitübGmbH, Tiefenbach, Germany), Porcentaje de vivos (PV; tinción de Eosina-nigrosina); prueba de HOS (% de colas enrolladas post incubación en solución de lactosa 50mOsm) y Acrosomas intactos (AI; conjugado de FITC-PSA). El semen fue diluido 1:1 en un diluyente Kenney, dividido en alícuotas, centrifugado, resuspendido a 200 x 106 esp/mL en el diluyente base con diferentes concentraciones de T y las combinaciones de T y SDS. El semen fue empaquetado en pajuelas de 0,5 ml y congelado sobre vapores de nitrógeno líquido. Las pajuelas fueron descongeladas a 37° durante 1 minuto y sometidas a las mismas pruebas que el semen fresco. Las comparaciones entre tratamientos (DIL) se realizaron mediante el análisis de varianza utilizando el procedimiento GLIMIX de SAS® para mediciones repetidas entiempo. Se observó que el DIL conteniendo T3,3 fue más efectivo en proteger la membrana acrosomal cuando se comparó con las combinaciones de T3,3SDS12 y T3,3SDS20. A su vez, se observó un efecto deletéro del SDS a altas concentraciones sobre la célula espermática del equino.Eje: Salud AnimalFacultad de Ciencias Veterinaria

Uterine and corpus luteum blood flow evaluation prior to uterine flushing in llama embryo donors

The aim of this study was to assess the uterine blood flow (UBF) and corpus luteum blood flow (CLBF) in llamas 8 days post-mating, using color-Doppler ultrasonography (CDU), to determine the possible relationship between vascularization and the presence of an embryo. Adult females (n = 25) were used to monitor ovarian dynamics by palpation and transrectal ultrasonography until detection of a ≥6 mm growing follicle. Females were randomly assigned to one of two groups: Group I (n = 19), were mated and ovulation was induced by a single dose of buserelin (GnRH analog) that same day (Day 0); and Group II (n = 6), only ovulation was induced (control). On Day 8, UBF and CLBF were evaluated transrectally in both groups. The color-flow images obtained were analyzed with Image J1.52a software to determine the vascularization area and the percentage of corpus luteum with blood flow emission (CLBF%) together with the percentage for each uterine horn (UBF%). Statistical analysis was performed using an ANOVA test. In Group I, uterine flushing was performed to obtain the embryos, thus dividing the females into Group I+ (n = 10), when an embryo was recovered and Group I- (n = 9), when no embryo was recovered. Embryo recovery rate was 52.63% (10/19). In Group I+, UBF% was significantly higher compared to Group I- and Group II (P 0.05). In conclusion, it is possible to detect a local increase of UBF in the presence of an embryo on day 8 post-mating in llamas. This could be useful to achieve an early pregnancy diagnosis or to decide whether to carry out the uterine flushing in a llama embryo transfer program.Fil: Zampini, Enzo German. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Gallelli, Maria Florencia. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; ArgentinaFil: Chaves, María Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Neild, Deborah M.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gambarotta, Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo H.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Trasorras, Virginia Luz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentin

Effect of location and stage of development of dominant follicle on ovulation and embryo survival rate in alpacas

This study was designed to determine the effect of location of the preovulatory dominant follicle and stage of ovarian follicle development on ovulation rate and embryo survival in alpacas. In Experiment 1, mature lactating alpacas were randomly assigned to one of two groups according to the location of the dominant follicle detected by ultrasonography: (a) Right ovary (RO, n=96) or (b) Left ovary (LO, n=108). All females were mated once by an intact adult male. Ovulation rate, CL diameter and embryo survival rate (heartbeat) were assessed by ultrasonography on Days 2 (Day 0. =mating), 8 and 30, respectively. Ovulation rate (96.5 and 96.3% for RO and LO group, respectively), corpus luteum (CL) diameter (10.2 and 10.6. mm for RO and LO group, respectively) and pregnancy rate (60.2 and 56.7% for RO and LO group, respectively) did not differ among groups. In Experiment 2, lactating alpacas (n=116) were submitted to ultrasonic-guided follicle ablation to synchronize follicular wave emergence. Afterwards, daily ultrasonography examinations were performed and females were randomly assigned to the following groups according to the growth phase and diameter of the dominant follicle: (a) early growing (5-6. mm, n=27), (b) growing (7-12. mm, n=30); (c) static (7-12. mm, n=30), or (d) regressing phase (12-7. mm, n=29). All alpacas were mated with a proven intact male, except five alpacas from early growing group that rejected the male. Females were examined by ultrasonography on Day 2 (ovulation rate), Day 8 (CL diameter), and Days 15, 20, 25, 30 and 35 (embryo survival by the presence of embryo proper and heartbeat). No differences were detected in ovulation rate among groups (96%, 97%, 100%, and 97%) or in CL size (10.3, 11.7, 11.1, and 11.1. mm, for early growing, growing, early static and regressing, respectively). Although, embryo survival rate at Day 35 after mating was numerically greatest in growing (65.5%), intermediate in early growing (52.4%) and static (53.3%), and least in regressing phase (42.9%), there were no differences among groups. Results suggest that neither location nor stage of development of the dominant follicle has an influence on ovulation and embryo survival rate in alpacas. © 2011 Elsevier B.V

Criopreservación seminal en equinos: Efecto de la Trehalosa sobre la célula espermática

En los últimos años, el desarrollo de las técnicas de criopreservación de semen en el equino ha permitido congelar semen de padrillos con escasa tolerancia a la criopreservación. La composición del diluyente utilizado es uno de los factores críticos en la congelación espermática, ya que de ella depende que la célula espermática resista el descenso de temperatura a la que es sometida. Los disacáridos entre ellos la trehalosa, incorporada al diluyente de congelación ejerce un efecto osmótico y protege las membranas celulares en semen de varias especies por medio de su acción estabilizante

Development of a GnRH-PGF2α based synchronization and superstimulation protocol for fixed-time mating in llama embryo donors

The aim of the present study was to evaluate the application of a GnRH-PGF2α based synchronization and superstimulation protocol for fixed-time natural mating in llama embryo donors. All females (n = 8) received 8 μg IM of GnRH analog (GnRHa; buserelin) on day 0, regardless of follicular status. After eight days, another GnRHa dose was administered followed by 250 μg IM PGF2α (cloprostenol). A dose of 1000 IU IM of equine chorionic gonadotrophin (eCG) was applied on day 12 and a new dose of PGF2α was administered on day 13. All embryo donors were mated with a male of proven fertility followed by a GnRHa dose on day 18. 24 h later, mating was repeated with a different male. Transcervical uterine flushing for embryo recovery was carried out on all females on day 26. Recipient females received one dose of GnRHa (day 0) two days after the first mating of embryo donor females. A 75% (6/8) of embryo donors responded to the superstimulation treatment with a range of 2 to 5 corpus luteums (CLs) on embryo recovery day. A total of 24 CLs were registered, with a mean of 4 ± 0.9 CLs per female. Embryo recovery rate was 66.7% (16/24), with a range of 0 to 4 embryos and a mean of 2.7 ± 1.5 embryos per female. Regarding quality of the recovered embryos, 56.2% were grade I, 6.2% were grade II and 37.5% were grade V (untransferable; arrested morulae). Grade I and II embryos (n = 10) were transcervically transferred into recipient females (n = 10) six days after inducing their ovulation. At 24 days after embryo transfer (ET), a 50% pregnancy rate was registered. In conclusion, a group of llama embryo donors can be synchronized and superstimulated using a fixed-time mating protocol based on GnRHa, PGF2α, and eCG without the necessity of using ultrasonography in the field.Fil: Zampini, Enzo German. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Veiga, Maria Fernanda. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Fumuso, Fernanda Gabriela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cabido, Luciana. Gobierno de la Provincia de Jujuy. Dirección Provincial de Desarrollo Ganadero; ArgentinaFil: Neild, Deborah Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Chaves, María Graciela. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo Horacio. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Trasorras, Virginia Luz. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Transfer of cooled llama embryos obtained from synchronized females

This study evaluated the efficiency of a synchronization protocol based on GnRH and PGF2α on embryo donor llamas for fixed timed mating and assessed the viability of embryos maintained at 5 ◦C and 15 ◦C for 24 h, using the Equitainer® and the Botu-BOX® as cooling devices respectively. Llamas were divided into four follicular wave groups: growth, dominance, static and regression; they received a GnRH analogue on day 0 followed by a second dose plus cloprostenol on day 8 and 15 and mating was indicated in females with a follicle ≥ 6 mm. Embryos were recovered 8 days post mating. Synchronization rate was 80% for the treated embryo donors, with no significant differences among groups. Uterine flushing was performed in 70% of the treated females (87.5% of mated llamas) and an embryo was recovered in 50%. Fourteen embryos were assigned randomly to 5 ◦C (Equitainer® group) and 15 ◦C (Botu-BOX® group) preservation for 24 h to be transferred later. In the Equitainer® group, we obtained 14% pregnancies and a female offspring was born. In the Botu-BOX® group, 28% resulted pregnant but subsequently pregnancies were lost. This protocol was effective for synchronizing follicles in growth phase in 80% of embryo donor llamas. In addition, cooling llama embryos using the Equitainer® and the Botu-BOX® as cooling devices to 5 ◦C and 15 ◦C respectively, preserves its morphology and viability for 24 h.Fil: Zampini, Enzo German. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Fernanda Veiga, María. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Arraztoa, Claudia Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; ArgentinaFil: Gallelli, Maria Florencia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Moncalvo, Carla Evangelina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Gambarotta, Mariana. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias; ArgentinaFil: Neild, Deborah Margarita. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Miragaya, Marcelo. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; ArgentinaFil: Trasorras, Virginia Luz. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Parque Centenario; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Instituto de Investigacion y Tecnología en Reproducción Animal; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Area de Teriogenología; Argentin