Switchable CAR T cell strategy against osteosarcoma

Immunotherapy with chimeric antigen receptor T (CAR T) cells has changed the treatment of hematological malignances, but they are still a challenge for solid tumors, including pediatric sarcomas. Here, we report a switchable CAR T cell strategy based on anti-FITC CAR T cells and a switch molecule conjugated with FITC for targeting osteosarcoma (OS) tumors. As a potential target, we analyzed the expression of B7-H3, an immune checkpoint inhibitor, in OS cell lines. In addition, we evaluate the capacity of an anti-B7-H3 monoclonal antibody conjugated with FITC (anti-B7-H3-FITC mAb) to control the antitumor activity of anti-FITC CAR T cells. The effector functions of anti-FITC CAR T cells against OS, measured in vitro by tumor cell killing activity and cytokine production, are dependent on the presence of the anti-B7-H3-FITC mAb switch. Moreover, OS cells stimulate anti-FITC CAR T cells migration. In vivo, anti-B7-H3 mAb penetrates in the tumor and binds 143B OS tumor cells. Furthermore, anti-FITC CAR T cells reach tumor region and exert antitumor effect in an OS NSG mouse model only in the presence of the switch molecule. We demonstrate that anti-B7-H3-FITC mAb redirects the cytotoxic activity of anti-FITC CAR T cells against OS tumors suggesting that switchable CAR T cell platforms might be a plausible strategy against OS.This research was funded by Instituto de Salud Carlos III (ISCIII): PI20CIII-00040 and RD21/0017/0005, Red Española de Terapias Avanzadas TERAV-ISCIII (NextGenerationEU. Plan de Recuperación Transformación y Resiliencia), the Asociación Pablo Ugarte, the Fundación Oncohematología Infantil and AFANION for grants support. LH is benefciary of a grant under the Talent Attraction Program of the Comunidad de Madrid (2018-T2/BMD-10337). AM-M is benefciary of a grant under the PhD ISCIII-PFIS program (FI18CIII/00017) and is a member of the PhD Program in Molecular Biosciences of Universidad Autónoma de Madrid. PR-G is enrolled in the Doctoral Program in Biomedical Sciences and Public Health as a trainee researcher at the UNED International Doctoral School. AntiFITC CAR single chain variable fragment (scFv) encoding plasmid was kindly provided by Dr. Michael Jensen from Seattle Children´s Research Institute, Washington, USA. The authors wish to thank the donors, and the Biobank Hospital Universitario Puerta de Hierro Majadahonda (HUPHM)/Instituto de Investigación Sanitaria Puerta de Hierro-Segovia de Arana (IDIPHISA) (PT17/0015/0020 in the Spanish National Biobanks Network) for the human specimens used in this study. Images for the graphical scheme of experiments were obtained and modifed from SMART—Servier Medical Art under a Creative Common Attribution 3.0 Unported License.S

Zebrafish fin immune responses during high mortality infections with viral haemorrhagic septicemia rhabdovirus. A proteomic and transcriptomic approach

<p>Abstract</p> <p>Background</p> <p>Despite rhabdoviral infections being one of the best known fish diseases, the gene expression changes induced at the surface tissues after the natural route of infection (infection-by-immersion) have not been described yet. This work describes the differential infected versus non-infected expression of proteins and immune-related transcripts in fins and organs of zebrafish <it>Danio rerio </it>shortly after infection-by-immersion with viral haemorrhagic septicemia virus (VHSV).</p> <p>Results</p> <p>Two-dimensional differential gel electrophoresis detected variations on the protein levels of the enzymes of the glycolytic pathway and cytoskeleton components but it detected very few immune-related proteins. Differential expression of immune-related gene transcripts estimated by quantitative polymerase chain reaction arrays and hybridization to oligo microarrays showed that while more transcripts increased in fins than in organs (spleen, head kidney and liver), more transcripts decreased in organs than in fins. Increased differential transcript levels in fins detected by both arrays corresponded to previously described infection-related genes such as complement components (<it>c3b, c8 </it>and <it>c9</it>) or class I histocompatibility antigens (<it>mhc1</it>) and to newly described genes such as secreted immunoglobulin domain (<it>sid4</it>), macrophage stimulating factor (<it>mst1</it>) and a cluster differentiation antigen (<it>cd36</it>).</p> <p>Conclusions</p> <p>The genes described would contribute to the knowledge of the earliest molecular events occurring in the fish surfaces at the beginning of natural rhabdoviral infections and/or might be new candidates to be tested as adjuvants for fish vaccines.</p

Mesoporous silica nanoparticles grafted with a light-responsive protein shell for highly cytotoxic antitumoral therapy

A novel phototriggered drug delivery nanocarrier, which exhibits very high tumor cytotoxicity against human tumoral cells, is presented. This device is based on mesoporous silica nanoparticles decorated with a biocompatible protein shell cleavable by light irradiation. The proteins that compose the protein shell (avidin, streptavidin and biotinylated transferrin) act as targeting and capping agents at the same time, avoiding the use of redundant systems. The light responsive behavior is provided by a biotinylated photocleavable cross-linker covalently grafted on the mesoporous surface, which suffers photocleavage by UV radiation (366 nm). Human tumoral cells incubated in the presence of a very low particle concentration enter into the apoptotic stage after a short irradiation time. Thus, the system described here could be applied to the treatment of exposed tumors that affect the skin, oesophagus, and stomach, among others, and are easily accessible for light irradiation

AKT and JUN are differentially activated in mesenchymal stem cells after infection with human and canine oncolytic adenoviruses

Factor de impacto: 5,987 Q1There is increasing evidence about the use of oncolytic adenoviruses (Ads) as promising immunotherapy agents. We have previously demonstrated the clinical efficiency of mesenchymal stem cells (MSCs) infected with oncolytic Ads as an antitumoral immunotherapy (called Celyvir) in human and canine patients, using ICOVIR-5 or ICOCAV17 as human and canine oncolytic Ads, respectively. Considering the better clinical outcomes of canine patients, in this study we searched for differences in cellular responses of human and canine MSCs to Ad infection that may help understand the mechanisms leading to higher antitumor immune response. We found that infection of human and canine MSCs with ICOVIR-5 or ICOCAV17 did not activate the NF-κB pathway or the interferon regulatory factors IRF3 and IRF7. However, we observed differences in the profile of cytokines secretion, as infection of canine MSCs with ICOCAV17 resulted in lower secretion of several cytokines. Moreover, we showed that infection of human MSCs with ICOVIR-5 increased the phosphorylation of a number of proteins, including AKT and c-JUN. Finally, we demonstrated that differences in regulation of AKT and c-JUN in human and canine MSCs by ICOVIR-5 or ICOCAV17 are intrinsic to each virus. Our findings suggest that ICOCAV17 induces a more limited host response in canine MSCs, which may be related to a better clinical outcome. This result opens the possibility to develop new human oncolytic Ads with these specific properties. In addition, this improvement could be imitated by selecting specific human MSC on the basis of a limited host response after Ad infection.This study was funded by Instituto de Salud Carlos III (PI14CIII/00005 and PI17CIII/00013 grants), Consejería de Educación, Juventud y Deporte of Comunidad de Madrid (P2017/BMD-3692 grant), Fundación Oncohematología Infantil, AFANION, and Asociación Pablo Ugarte, whose support we gratefully acknowledge.S

Enrichment of neural-related genes in human mesenchymal stem cells from neuroblastoma patients.

Neuroblastoma (NB) is one of the most common pediatric solid tumors and, like most human cancers, is char-acterized by a broad variety of genomic alterations. Although mesenchymal stem cells (MSCs) are known to interact with cancer cells, the relationship between MSCs and metastatic NB cancer cells in bone marrow (BM) is unknown. To obtain genetic evidence about this interaction, we isolated ΒΜ-derived MSCs from children with NB and compared their global expression patterns with MSCs obtained from normal pediatric donors, using the Agilent 44K microarrays. Significance analysis of microarray results with a false discovery rate (FDR) <5% identified 496 differentially expressed genes showing either a 2-fold upregulation or downregulation between both groups of samples. Comparison of gene ontology categories of differ-entially expressed genes revealed the upregulation of genes categorized as ‘neurological system process’, ‘cell adhesion’, ‘apoptosis’, ‘cell surface receptor linked signal transduction’, ‘intrinsic to membrane’ and ‘extracellular region’. Among the downregulated genes, several immunology-related terms were the most abundant. These findings provide preliminary genetic evidence of the interaction between MSCs and NB cancer cells in ΒΜ as well as identify relevant biological processes potentially altered in MSCs in response to NBThis study was supported by grants from the Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS; PI05/2217 and PI08/0029 to J.G.C.), MICINN (PLE2009-0115) and the Madrid Regional Government (S-BIO-0204-2006 and P2010/BMD-2420) in Spain. The experiments were approved by the appropriate committees.S

Toll-like Receptor Signaling-deficient Cells Enhance Antitumor Activity of Cell-based Immunotherapy by Increasing Tumor Homing

Cancer immunotherapy aims to activate the immune system. Some immunotherapeutic agents can be loaded in carrier cells for delivering to the tumors. However, a challenge with cell-based therapies is the selection of the appropriate cells to produce effective clinical outcomes. We hypothesize that therapies based on cells presenting a natural low proinflammatory profile ("silent cells") in the peripheral blood would result in better antitumor responses by increasing their homing to the tumor site. We studied our hypothesis in an immunotherapy model consisting of mesenchymal stromal cells (MSCs) carrying oncolytic adenoviruses for the treatment of immunocompetent mice. Toll-like receptor signaling-deficient cells (TLR4, TLR9, or MyD88 knockout) were used as "silent cells," while regular MSCs were used as control. Although in vitro migration was similar in regular and knockout carrier cells, in vivo tumor homing of silent cells was significantly higher after systemic administration. This better homing to the tumor site was highly related to the mild immune response triggered by these silent cells in peripheral blood. As a result, the use of silent cells significantly improved the antitumor efficacy of the treatment in comparison with the use of regular MSCs. While cancer immunotherapies generally aim to boost local immune responses in the tumor microenvironment, low systemic inflammation after systemic administration of the treatment may indeed enhance their tumor homing and improve the overall antitumor effect. These findings highlight the importance of selecting appropriate donor cells as therapeutic carriers in cell-based therapies for cancer treatment. Cells carrying drugs, virus, or other antitumor agents are commonly used for the treatment of cancer. This research shows that silent cells are excellent carriers for immunotherapies, improving tumor homing and enhancing the antitumor effect.This study was funded by Instituto de Salud Carlos III (grants PI14CIII/00005, PI17CIII/00013, and ISCIII-PFIS FI18CIII/00017), Consejería de Educación, Juventud y Deporte of Comunidad de Madrid (grant P2017/BMD-3692), Fundación Oncohematología Infantil, Asociación Pablo Ugarte and AFANION, whose support we gratefully acknowledge.S

Calcium-Dependent Protein Kinases from Arabidopsis Show Substrate Specificity Differences in an Analysis of 103 Substrates

The identification of substrates represents a critical challenge for understanding any protein kinase-based signal transduction pathway. In Arabidopsis, there are more than 1000 different protein kinases, 34 of which belong to a family of Ca2+-dependent protein kinases (CPKs). While CPKs are implicated in regulating diverse aspects of plant biology, from ion transport to transcription, relatively little is known about isoform-specific differences in substrate specificity, or the number of phosphorylation targets. Here, in vitro kinase assays were used to compare phosphorylation targets of four CPKs from Arabidopsis (CPK1, 10, 16, and 34). Significant differences in substrate specificity for each kinase were revealed by assays using 103 different substrates. For example CPK16 phosphorylated Serine 109 in a peptide from the stress-regulated protein, Di19-2 with KM ∼70 μM, but this site was not phosphorylated significantly by CPKs 1, 10, or 34. In contrast, CPKs 1, 10, and 34 phosphorylated 93 other peptide substrates not recognized by CPK16. Examples of substrate specificity differences among all four CPKs were verified by kinetic analyses. To test the correlation between in vivo phosphorylation events and in vitro kinase activities, assays were performed with 274 synthetic peptides that contained phosphorylation sites previously mapped in proteins isolated from plants (in vivo-mapped sites). Of these, 74 (27%) were found to be phosphorylated by at least one of the four CPKs tested. This 27% success rate validates a robust strategy for linking the activities of specific kinases, such as CPKs, to the thousands of in planta phosphorylation sites that are being uncovered by emerging technologies

c-Fos induces chondrogenic tumor formation in immortalized human mesenchymal progenitor cells

Mesenchymal progenitor cells (MPCs) have been hypothesized as cells of origin for sarcomas, and c-Fos transcription factor has been showed to act as an oncogene in bone tumors. In this study, we show c-Fos is present in most sarcomas with chondral phenotype, while multiple other genes are related to c-Fos expression pattern. To further define the role of c-Fos in sarcomagenesis, we expressed it in primary human MPCs (hMPCs), immortalized hMPCs and transformed murine MPCs (mMPCs). In immortalized hMPCs, c-Fos expression generated morphological changes, reduced mobility capacity and impaired adipogenic- and osteogenic-differentiation potentials. Remarkably, immortalized hMPCs or mMPCs expressing c-Fos generated tumors harboring a chondrogenic phenotype and morphology. Thus, here we show that c-Fos protein has a key role in sarcomas and that c-Fos expression in immortalized MPCs yields cell transformation and chondrogenic tumor formation.This work was supported by grants from the Fondo de Investigaciones Sanitarias (FIS: PI11/00377 to J.G.-C.; and RTICC: RD12/0036/0027 to J.G-C, RD12/0036/0020 to S.M.) and the Madrid Regional Government (CellCAM; P2010/BMD-2420 to J.G.-C) in Spain. A.A. was supported by Juan de la Cierva program of the Spanish Plan Nacional (MINECO) and Sara Borrell program of the ISCIII/FEDER. A.Al. was supported by the “Miguel Servet” program of the ISCIII/FEDER. We gratefully acknowledge support from Asociación Pablo Ugarte (CIF G86121019) and AFANION (CIF G02223733). The experiments were approved by the appropriate committees.S

Células madre mesenquimales (CMM) aisladas a partir de la sangre periférica

La presente invención se relaciona con células madre mesenquimales (CMM) aisladas a partir de la sangre periférica, caracterizadas porque expresan el receptor alfa-2 de la interleuquina 13 (IL 13RA2), así como con un método para aislar dichas CMM que comprende detectar la expresión de dicho IL13RA2 en células de una muestra de sangre periférica, y, si se desea, aislar dichas células que expresan IL13RA2.1. Una célula madre mesenquimal, aislada, procedente de sangre periférica o de sus hemoderivados, caracterizada porque expresa el receptor alfa-2 de la interleuquina 13 (ILl3RA2) . 2. Célula madre mesenquimal aislada según la reivindicación 1, obtenible mediante un método que comprende detectar el receptor alfa-2 de la interleuquina 13 (TLl3RA2) lOenla superficie de dicha célula y aislar dicha célula que expresa lLl3RA2. 3. Célula madre mesenquimal según la reivindicación 1, caracterizada porque además, expresa uno o más marcadores de membrana plasmática seleccionados del grupo que consiste en CAMK2Nl, CDH10, CLDNll, LSAMP, PSCAy SFRPl. 4. Célula madre mesenquimal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dicha sangre periférica o hemoderivado es de origen humano. 5. Célula madre mesenquimal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que la sangre periférica se selecciona del grupo que consiste en sangre periférica fresca o criopreservada, sangre periférica movilizada fresca o criopreservada, sangre periférica movilizada y sin movilizar obtenida por técnicas de aféresis fresca o criopreservada, fracción CD34-fresca o criopreservada obtenida de sangre periférica o sus hemoderivados movilizada, "buffy coats" y cualquiera de sus combinaciones. 6. Célula madre mesenquimal según cualquiera de las reivindicaciones I a 5, en la que la sangre periférica procede de un sujeto al que se le ha administrado un factor de estimulación. 7. Célula madre mesenquimal según la reivindicación 6, en la que el factor de estimulación se selecciona del grupo formado por el factor de crecimiento de colonias de granulocitos (G-CSF) , el factor de crecimiento de colonias granulomacrofágicas (GM-CSF) , un antagonista del receptor CXCR4, una catecolamina, y sus combinaciones. 8. Una población celular aislada que comprende células madre mesenquimales procedentes de sangre periférica o de sus hemoderivados según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7. 9. Una composición de células madre mesenquimales procedentes de sangre periférica, o de sus hemoderivados, en la que, al menos, el 50% de las células madre mesenquimales procedentes de sangre periférica, o de sus hemoderivados, que comprende dicha composición son células madre mesenquimales que expresan IL 13RA2 según cualquiera de las reivindicaciones I a 7. 10. Una composición farmacéutica que comprende una célula madre mesenquimal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, una población celular seb>lm la reivindicación 8, o una composición de células madre mesenquimales según la reivindicación 9, y un vehículo farmacéuticamente aceptable. 11. Método in vitro para la identificación y/o el aislamiento de una célula madre mesenquimal a partir de sangre periférica o de sus hemoderivados que comprende detectar la expresión del receptor alfa-2 de la interleuquina 13 (lLI3RA2) en células de una muestra de sangre periférica o de sus hemoderivados y, si se desea, aislar dichas células que expresan TL 13RA2. 12. Método según la reivindicación 11, en el que la sangre periférica utilizada se selecciona del grupo que consiste en sangre periférica fresca o criopreservada, sangre periférica movilizada fresca o criopreservada, sangre periférica movilizada y sin movilizar obtenida por técnicas de aféresis fresca o criopreservada, fracción CD34-fresca o criopreservada obtenida de sangre periférica o sus hemoderivados movilizada, "bufIY coats", y cualquiera de sus combinaciones. 13. Método según cualquiera de las reivindicaciones 11 ó 12, en el que dicha sangre periférica procede de un sujeto al que se le ha administrado un factor de estimulación. 14. Método según la reivindicación 13, en el que dicho factor de estimulación se selecciona del grupo formado por el factor de crecimiento de colonias de granulocitos (G-CSF) , el factor de crecimiento de colonias granulomacrofágicas (GM-CSF) , un antagonista del receptor CXCR4, una catecolamina, y sus combinaciones. 15. Método según cualquiera de las reivindicaciones 11 a 14, en el que dicha sangre periférica o hemoderivado es de origen humano. 16. Uso del receptor alfa-2 de la interleuquina 13 (LL13RA2) como marcador de una célula madre mesenquimal procedente de sangre periférica o de sus hemoderivados. 17. Uso según la reivindicaciónl6, para la identitlcación y/o el aislamiento in vitro de una célula madre mesenquimal a partir de sangre periférica, o de un hemoderivado de la misma, de un sujeto. 18. Uso de un reactivo capaz de detectar el receptor alfa-2 de la interleuquina 13 (ILl3RA2) para la identitlcación y/o el aislamiento de una célula madre mesenquimal a partir de sangre periférica o de sus hemoderivados, en donde dicho reactivo es un anticuerpo que se une especitlcamente a LLI3RA2. 19. Uso de una célula madre mesenquimal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o de una población celular según la reivindicación 8, o de una composición de células madre según la reivindicación 9, o de una composición farmacéutica según la reivindicación 10, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad autoinmune. 20. Uso de una célula madre mesenquimal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o de una población celular set, 'ún la reivindicación 8, o de una composición de células madre según la reivindicación 9, o de una composición farmacéutica según la reivindicación 10, en la preparación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria. 21. Uso de una célula madre mesenquimal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o de una población celular según la reivindicación 8, o de una composición de células madre según la reivindicación 9, o de una composición farmacéutica según la reivindicación 10, en la preparación de un medicamento para inducir tolerancia al trasplante. 22. Uso de una célula madre mesenquimal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o de una población celular según la reivindicación 8, o de una composición de células madre según la reivindicación 9, o de una composición farmacéutica según la reivindicación 10, en la preparación de un medicamento para la reparación y regeneración de tejidos. 23. Uso de una célula madre mesenquimal según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o de una población celular según la reivindicación 8, o de una composición de células madre según la reivindicación 9, o de una composición farmacéutica según la reivindicación 10, como sistema de transporte o vehículo de un compuesto biológicamente activo a un sitio de interés.Cuando una patente se hace internacional, se puede encontrar en el idioma de cada país en que se ha solicitado. En Espacenet se tiene acceso a los documentos en cada idioma.Instituto de Salud Carlos III; Universidad de Granada; Fundación Progreso y Salud.Solicitud de patent

Adaptación de las asignaturas básicas de primer curso de la ETSI Navales de la UPM: Actividades 2008-2009

En el marco de la reforma de las titulaciones con motivo del Espacio Europeo de Educación un grupo de profesores hemos coordinado, durante el curso 2008-2009, todas las asignaturas básicas de primer curso y una más de segundo curso en la Escuela Técnica Superior de Ingenieros Navales. Las actividades realizadas son: a) Coordinación de todas las asignaturas básicas de primer curso, con reuniones periódicas de coordinación horizontal y el establecimiento de una página web de moodle para profesores como espacio para el trabajo cooperativo. Particularmente importante es el establecimiento de un calendario conjunto de pruebas de evaluación continua. b) Redacción de guías de aprendizaje, con un formato común para todas las asignaturas, incluyendo los objetivos formativos, los contenidos, las actividades formativas, los enlaces y la bibliografía. c) Establecimiento de una plataforma de teleeducación común para todas las asignaturas, uno de los objetivos fundamentales del proyecto, ya que coexistían dos plataformas distintas. Igualmente importante ha sido reforzar los contenidos y las actividades que se podían realizar en la plataforma. d) Seguimiento del tiempo dedicado por los alumnos, hemos ido siguiendo el tiempo dedicado por los alumnos a las distintas asignaturas, para detectar si el tiempo que se dedica está en los márgenes establecidos en los créditos ECTS. Igualmente, hemos hecho dos encuestas a la mitad de cada semestre, para recoger las opiniones de los alumnos sobre las asignaturas y sobre los aspectos relevantes del proyecto. e) Organización de actividades de nivelación, para los alumnos de nuevo ingreso, con la organización de cursos cero y la participación y coordinación en la Plataforma de Punto de inicio de la UPM. f) Organización de actividades formativas, para poder llevar a cabo estas tareas, hemos organizado, en colaboración con el Centro y el Gabinete de Tele-Educación (GATE) actividades formativas relacionadas con la plataforma moodle, métodos de evaluación y de formación en competencias.En la presentación haremos una descripción de las actividades realizadas, así como una primera evaluación de las mismas. Por último, describiremos las tareas a desarrollar en los próximos cursos