Primary care randomized clinical trial: manual therapy effectiveness in comparison with TENS in patients with neck pain

This study investigated effectiveness of manual therapy (MT) with transcutaneous electrical nerve stimulation (TENS) to reduce pain intensity in patients with mechanical neck disorder (MND). A randomized multi-centered controlled clinical trial was performed in 12 Primary Care Physiotherapy Units in Madrid Region. Ninety patients were included with diagnoses of subacute or chronic MND without neurological damage, 47 patients received MT and 43 TENS. The primary outcome was pain intensity measured in millimeters using the Visual Analogue Scale (VAS). Also disability, quality of life, adverse effects and sociodemographic and prognosis variables were measured. Three evaluations were performed (before, when the procedure ?nished and six months after). Seventy-one patients (79%) completed the follow-up measurement at six months. In more than half of the treated patients the procedure had a clinically relevant ?short term? result after having ended the intervention, when either MT or TENS was used. The success rate decreased to one-third of the patients 6 months after the intervention. No differences can be found in the reduction of pain, in the decrease of disability nor in the quality of life between both therapies. Both analyzed physiotherapy techniques produce a short-term pain reduction that is clinically relevant.Ministerio de SanidadInstituto de Salud Carlos II

Design, Synthesis and Biological Evaluation of Therapeutic B2,2 -Sulfamidate-Containing Peptides

A lo largo de esta Tesis Doctoral se han presentado varios resultados experimentales y teóricos, que permiten establecer estas conclusiones: Se ha estudiado la reactividad de sulfamidatos que presentan alfa-metilisoserina en su estructura combinando técnicas experimentales y cálculos computacionales. Se determinó que se puede controlar dicha reactividad dependiendo de los sustituyentes que tenga el sulfamidato en la posición N- o C- terminal. Si la posición N-terminal del sulfamidato no se encuentra protegida, las reacciones de tipo SN2 y E2 no tienen lugar. Sin embargo, cuando este se encuentra protegido con grupos carbonilo (carbamato o amida), se activa la reactividad en el carbono cuaternario y el grupo metilo terciario. Por otro lado, dependiendo del grupo que ocupe la posición C-terminal (ester o amida) se puede controlar la quimioselectividad de la reacción (SN2 vs E2). Se han conseguido acoplar alfa-aminoácidos en los extremos carboxilo y sulfonamida del sulfamidato en fase homogénea, obteniendo así una pequeña librería de alfa/beta2,2-di- y tri-péptidos hibridos. Algunos de ellos fueron activados protegiendo la posición N-terminal del sulfamidato en forma de acetamida y se llevaron a cabo reacciones de apertura con un nucleófilo débil empleado como disolvente (piridina), obteniendose alfa/beta2,2-di- y tri-péptidos hibridos cargados positivamente. Los experimentos de 2D-NOESY y simulaciones de dinámica molecular, confirmaron que estos péptidos cargados positivamente muestran interacciones aromáticas no covalentes entre el anillo aromático de los alfa-aminoácidos acoplados al sulfamidato y el grupo piridinio cuaternario. Se ha conseguido incorporar el sulfamidato en fase sólida para sintetizar péptidos de mayor tamaño y de interés biológico. En primer lugar se exploraran diferentes estrategias para incorporar el sulfamidato como building block en fase sólida y se diseñaron una nueva clase de rompedores de láminas beta (BSBP, en inglés) conformacionalmente restringidos basados en el core hidrofóbico de la proteína beta-amiloide (betaA), incorporando el sulfamidato de alfa-metilisoserina. Los péptidos que incorporan el sulfamidato son capaces de inhibir la agregación del betaA, tal y como se confirmó mediante análisis de fluorescencia de tioflavina-T y dicroísmo circular. Esta nueva familia de BSBPs pueden ser prometedores para el desarrollo de nuevos medicamentos para el tratamiento de enfermedades neurogenerativas como el síndrome de Alzheimer. Se han conseguido llevar a cabo reacciones de apertura en fase sólida sobre péptidos que contienen nuestro sulfamidato, presentando la ventaja de que la reacción es más eficiente y genera menos subproductos, simplificando el proceso de purificación. De esta manera, se han obtenido alfa,beta2,2-péptidos etiquetados químicamente, pre-funcionalizados para llevar a cabo química click y glicosilados con buenos rendimientos. Hemos diseñado un nuevo linker lábil, aprovechando la capacidad que posee el sulfamidato de alfa-metilisoserina para liberar los sustituyentes de tipo carbonilo unidos a su posición N-terminal. Se ha demostrado que la presencia de determinados nucleófilos en el medio o el pH del mismo afectan de manera significativa a esa reactividad, pudiendo ser usada esta estrategia para la liberación de fármacos y moléculas de interés biológico de forma controlada. Se han estudiado reacciones de apertura intramolecular de péptidos que contienen el sulfamidato de -metilisoserina, observando que grupos carbonilo unidos a su extremo N-terminal favorecen reacciones de NS transacilación en lugar de apertura. Sin embargo, la presencia de grupos sulfonilo, como dansilo o nosilo en la misma posición, activa la reacción de apertura nucleófila intramolecular. Esta metodología fue usada para la síntesis de un nuevo análogo fluorescente del lantipéptido citolisina, CylLS, en el cual su anillo A incorpora el beta2,2-aminoácido, alfa-metil-beta-alanina (alfaMebetaAla). Durante mi estancia breve de investigación en el grupo del profesor Wilfred van der Donk (Universidad de Illinois en Urbana-Champaign, EEUU), se diseñaron y sintetizaron inhibidores de proteasas, basados en una breve secuencia de consenso reconocida por la enzima para liberar los denominados leader peptides, antes de la excreción de lantipéptidos antimicrobianos al espacio extracelular. Estos péptidos se funcionalizaron con aldehídos y aceptores de Michael en su extremo C-terminal con el propósito de unirlos covalentemente a la enzima LahT150. La estructura del complejo enzima-inhibidor se resolvió cristalográficamente, proporcionando información sobre el sitio activo y el modo de unión y reconocimiento del sustrato peptídico

Design, Synthesis and Biological Evaluation of Therapeutic B2,2 -Sulfamidate-Containing Peptides

A lo largo de esta Tesis Doctoral se han presentado varios resultados experimentales y teóricos, que permiten establecer estas conclusiones: Se ha estudiado la reactividad de sulfamidatos que presentan alfa-metilisoserina en su estructura combinando técnicas experimentales y cálculos computacionales. Se determinó que se puede controlar dicha reactividad dependiendo de los sustituyentes que tenga el sulfamidato en la posición N- o C- terminal. Si la posición N-terminal del sulfamidato no se encuentra protegida, las reacciones de tipo SN2 y E2 no tienen lugar. Sin embargo, cuando este se encuentra protegido con grupos carbonilo (carbamato o amida), se activa la reactividad en el carbono cuaternario y el grupo metilo terciario. Por otro lado, dependiendo del grupo que ocupe la posición C-terminal (ester o amida) se puede controlar la quimioselectividad de la reacción (SN2 vs E2). Se han conseguido acoplar alfa-aminoácidos en los extremos carboxilo y sulfonamida del sulfamidato en fase homogénea, obteniendo así una pequeña librería de alfa/beta2,2-di- y tri-péptidos hibridos. Algunos de ellos fueron activados protegiendo la posición N-terminal del sulfamidato en forma de acetamida y se llevaron a cabo reacciones de apertura con un nucleófilo débil empleado como disolvente (piridina), obteniendose alfa/beta2,2-di- y tri-péptidos hibridos cargados positivamente. Los experimentos de 2D-NOESY y simulaciones de dinámica molecular, confirmaron que estos péptidos cargados positivamente muestran interacciones aromáticas no covalentes entre el anillo aromático de los alfa-aminoácidos acoplados al sulfamidato y el grupo piridinio cuaternario. Se ha conseguido incorporar el sulfamidato en fase sólida para sintetizar péptidos de mayor tamaño y de interés biológico. En primer lugar se exploraran diferentes estrategias para incorporar el sulfamidato como building block en fase sólida y se diseñaron una nueva clase de rompedores de láminas beta (BSBP, en inglés) conformacionalmente restringidos basados en el core hidrofóbico de la proteína beta-amiloide (betaA), incorporando el sulfamidato de alfa-metilisoserina. Los péptidos que incorporan el sulfamidato son capaces de inhibir la agregación del betaA, tal y como se confirmó mediante análisis de fluorescencia de tioflavina-T y dicroísmo circular. Esta nueva familia de BSBPs pueden ser prometedores para el desarrollo de nuevos medicamentos para el tratamiento de enfermedades neurogenerativas como el síndrome de Alzheimer. Se han conseguido llevar a cabo reacciones de apertura en fase sólida sobre péptidos que contienen nuestro sulfamidato, presentando la ventaja de que la reacción es más eficiente y genera menos subproductos, simplificando el proceso de purificación. De esta manera, se han obtenido alfa,beta2,2-péptidos etiquetados químicamente, pre-funcionalizados para llevar a cabo química click y glicosilados con buenos rendimientos. Hemos diseñado un nuevo linker lábil, aprovechando la capacidad que posee el sulfamidato de alfa-metilisoserina para liberar los sustituyentes de tipo carbonilo unidos a su posición N-terminal. Se ha demostrado que la presencia de determinados nucleófilos en el medio o el pH del mismo afectan de manera significativa a esa reactividad, pudiendo ser usada esta estrategia para la liberación de fármacos y moléculas de interés biológico de forma controlada. Se han estudiado reacciones de apertura intramolecular de péptidos que contienen el sulfamidato de -metilisoserina, observando que grupos carbonilo unidos a su extremo N-terminal favorecen reacciones de N→S transacilación en lugar de apertura. Sin embargo, la presencia de grupos sulfonilo, como dansilo o nosilo en la misma posición, activa la reacción de apertura nucleófila intramolecular. Esta metodología fue usada para la síntesis de un nuevo análogo fluorescente del lantipéptido citolisina, CylLS, en el cual su anillo A incorpora el beta2,2-aminoácido, alfa-metil-beta-alanina (alfaMebetaAla). Durante mi estancia breve de investigación en el grupo del profesor Wilfred van der Donk (Universidad de Illinois en Urbana-Champaign, EEUU), se diseñaron y sintetizaron inhibidores de proteasas, basados en una breve secuencia de consenso reconocida por la enzima para liberar los denominados leader peptides, antes de la excreción de lantipéptidos antimicrobianos al espacio extracelular. Estos péptidos se funcionalizaron con aldehídos y aceptores de Michael en su extremo C-terminal con el propósito de unirlos covalentemente a la enzima LahT150. La estructura del complejo enzima-inhibidor se resolvió cristalográficamente, proporcionando información sobre el sitio activo y el modo de unión y reconocimiento del sustrato peptídico

Elusive dehydroalanine derivatives with enhanced reactivity

For the first time, a simple methodology for the chemical synthesis and use of highly reactive 4-methylenoxazol-5(4H)-ones from serine is presented. These dehydroalanine derivatives, which resemble the natural 4-methylidenimidazole-5-one (MIO) cofactor present in lyases and aminomutases, undergo rapid reaction with carbon nucleophiles such as silyl enol ethers, as well as cycloaddition reactions with diazo compounds and reactive dienes, under very mild conditions and without any need for metal catalysts or ring-strain activation, offering potential for bioconjugation

Elusive dehydroalanine derivatives with enhanced reactivity

For the first time, a simple methodology for the chemical synthesis and use of highly reactive 4-methylenoxazol-5(4H)-ones from serine is presented. These dehydroalanine derivatives, which resemble the natural 4-methylidenimidazole-5-one (MIO) cofactor present in lyases and aminomutases, undergo rapid reaction with carbon nucleophiles such as silyl enol ethers, as well as cycloaddition reactions with diazo compounds and reactive dienes, under very mild conditions and without any need for metal catalysts or ring-strain activation, offering potential for bioconjugation

Substituent Effects on the Reactivity of Cyclic Tertiary Sulfamidates

The reactivity of cyclic tertiary sulfamidates derived from α-methylisoserine strongly depends on the substitution at the C and N termini. These substrates are one of the very few examples able to undergo nucleophilic ring opening at a quaternary carbon with complete inversion of the configuration, as demonstrated both experimentally and computationally. When the sulfonamide is unprotected, the characteristic ring-opening reaction is completely silenced, which explains that the majority of the ring-opening reactions reported in the literature invoke <i>N</i>-alkyl or <i>N</i>-carbonyl-protected sulfamidates. Accumulation of negative charge at the NSO₃ moiety in the transition state, especially when the sulfonamide NH is deprotonated, drastically raises the activation barrier for the nucleophilic attack. On the other hand, ester groups at the carboxylic position favor ring opening, whereas amides allow competition between the substitution and elimination pathways. Using pyridine as a nucleophilic probe, we have demonstrated both experimentally and computationally that a proper selection of the substitution scheme can enhance the synthetic scope of α-methylisoserine-derived sulfamidates, switching off and on the nucleophilic ring-opening in a controlled manner. This is particularly convenient for hybrid α/β-peptide synthesis, as demonstrated recently by our group