Effetto dell'oncosoppressore BRCA1 nella riparazione del DNA in Saccharomyces cerevisiae

Il gene umano BRCA1 è un oncosoppressore che codifica per una proteina appartenente ad un complesso multiproteico coinvolto nella riparazione del DNA. È stato ampiamente dimostrato che, nelle donne, una mutazione del gene BRCA1 determina l’80% di rischio di sviluppare cancro al seno ed il 55% di rischio di sviluppare cancro ovarico. Nel laboratorio dove ho svolto la tesi, è stato messo a punto un saggio in Saccharomyces cerevisiae che permette di distinguere le mutazioni missenso di BRCA1 associate a tumore dai polimorfismi o varianti neutre. È stato dimostrato che l’espressione di BRCA1 mutato aumenta la ricombinazione omologa mitotica in lievito. Poiché gli stessi “pathway” di riparazione e ricombinazione del DNA presenti nelle cellule umane si ritrovano anche nel lievito Saccharomyces cerevisiae, abbiamo cercato di approfondire l’effetto di BRCA1 nella riparazione del DNA in questo organismo modello. È noto dalla letteratura che i domini maggiormente implicati nel giusto funzionamento della proteina sono quelli all’estremità ammino e carbossi terminale; per questo motivo le varianti neutre e patogenetiche considerate ricadono in queste posizioni ed in particolare sono: K45Q, C61G, R1751Q, M1775R. L’obiettivo finale di questo progetto è utilizzare il lievito come sistema genetico modello per chiarire il ruolo di BRCA1 nella cancerogenesi; in particolare, lo scopo della tesi è determinare se BRCA1 influenza la riparazione e la ricombinazione in lievito. Abbiamo dapprima misurato, con esperimenti di Real-Time PCR e Western blot, i livelli d’espressione in lievito delle quattro varianti considerate, sia come proteine “full length” che fuse al cromoforo “mCherry”, e paragonate con il corrispondente BRCA1 wild-type. In seguito, abbiamo determinato l’effetto dell’espressione di BRCA1 wild-type e delle varianti sulla sopravvivenza e ricombinazione mitotica indotta da metil metansulfonato (MMS). Infine, mediante microscopia a fluorescenza, abbiamo valutato la localizzazione di BRCA1-mCherry in cellule di lievito trattate con MMS. I risultati del Western blot hanno evidenziato che il livello di BRCA1 wild-type è maggiore di quello raggiunto dalle varianti. Gli esperimenti di Real-Time PCR indicano che la variante BRCA1-C61G viene espressa ad un livello minore rispetto a BRCA1 wild-type, mentre la variante BRCA1-M1775R viene espressa ad un livello simile a BRCA1 wild-type; nel caso invece dell’espressione di proteine fuse a mCherry, la variante BRCA1-C61G risulta leggermente più espressa rispetto a BRCA1 wild-type. Le altre varianti fuse con mCherry vengono espresse allo stesso livello della wild-type. Per determinare l’effetto di BRCA1 e delle varianti missenso sulla ricombinazione omologa indotta, le cellule sono state inoculate per 24 ore in terreno di crescita, trasferite in terreno contenente galattosio (che induce l’espressione della proteina) per 17 ore in presenza di MMS. In seguito le cellule sono state piastrate in terreno sia completo che selettivo per determinare la sopravvivenza e il numero di ricombinanti. I risultati finora ottenuti indicano che i ceppi BRCA1 sono più sensibili all’MMS e che l’MMS induce meno eventi di ricombinazione nei ceppi che esprimono le varianti patogenetiche. Per valutare l’effetto dell’MMS sulla localizzazione di BRCA1 abbiamo espresso nelle cellule di lievito BRCA1 wild-type o le sue varianti missenso come proteine di fusione con mCherry. Quindi ci siamo chiesti se ci fossero differenze nella localizzazione tra varianti neutre e patogenetiche, e se il danno al DNA potesse influenzare la loro localizzazione. I nostri risultati dimostrano che BRCA1 si localizza nel nucleo. BRCA1 si localizza in due modi differenti; una localizzazione più diffusa ed una sottoforma di focus. In particolare, nel ceppo che esprime BRCA1 wild-type o le varianti neutre K45Q e R1751Q, il numero delle cellule con foci nucleari aumenta significativamente. I risultati dimostrano quindi che BRCA1 influenza la ricombinazione indotta dal MMS in lievito; ciò potrebbe indicare che BRCA1 interferisca con la riparazione del DNA in lievito. In conclusione, il lievito Saccharomyces cerevisiae si riconferma essere un efficace sistema genetico per la approfondire i meccanismi che stanno alla base dell’insorgenza dei tumori

Knowledge and adherence to the Mediterranean diet in individuals practicing regular amatorial physical activity: a cross-sectional study conducted in the Metropolitan Area of Palermo, Italy

IntroductionMediterranean Diet (MD) is a universal model of nutrition that prevents several metabolic, cardiovascular, and oncological diseases. Main objective of the present study was to analyze adherence and knowledge regarding MD principles in a sample of individuals practicing amatorial sports from the Metropolitan Area of Palermo. MethodsA cross-sectional study was conducted in 10 Sports Centers, between October 2020 and September 2021, through a previously validated anonymous questionnaire structured in five sections including 74 items. ResultsOverall, 337 subjects answered to the questionnaire. Based on the multivariable analysis conducted, a higher knowledge score (KS) on MD principles was observed among individuals daily consuming vegetables (OR: 3.32; CI95%: 1.82-6.02) and in the ones more adherent to MD principles (OR: 10.15; CI95%:5.47-18.85). More in depth, using MEDAS score to analyze the adherence to MD, a significant lower adherence was observed among overweight/obese (OR: 0.57; CI95%:0.33-0.99) and among employed subjects (OR: 0.52; IC95%: 0.28-0.98); while, a higher adherence was highlighted among daily consumers of vegetables (OR: 2.52; CI95%:1.52-4.17), daily consumers of fruit (OR: 1.77; CI95%:1.08-2.90), and in individuals that have daily breakfast (OR: 4.29; CI95%:1.15-15.96). DiscussionIn accordance with the WHO Europe Gaining Health Campaign, Public Health Authorities should simplify accessibility to healthy food among general population, promoting principles and accessibility to MD

Increased adherence to influenza vaccination among Palermo family pediatricians: a study on safety and compliance of qLAIV vaccination

Background: Influenza represents a serious public health threat, especially for the management of severe cases and complications of the disease, requiring the implementation of control measures. We aimed to assess the acceptance and impact of qLAIV vaccination among a representative sample of family paediatricians (FPs) operating in Palermo Local Health Authority (LHA). To this end we evaluated vaccination coverage rates, comparing it with that observed in Sicilian context, while actively monitoring possible adverse reactions and their severity. Methods: An observational descriptive non-controlled study was conducted in two phases, from September 2022 to June 2023. The first phase involved a formative and educational intervention with a pre-intervention questionnaire to assess the knowledge and attitudes of FPs on paediatric influenza vaccination. The second phase consisted of an active surveillance on qLAIV safety and acceptance among the paediatric population assisted by the participating FPs, from October 2022 to April 2023. Frequencies, chi-squared tests, and comparisons statistics were performed using Stata/MP 14.1. Results: The overall coverage rate among the paediatric population involved in the intervention was 13.2%, with an I.M./qLAIV ratio of vaccine administered of 1/4.25. This coverage rate was significantly higher (p-value <0.001) when compared to the average values reported in the population under the Palermo Local Health Authority (LHA) (6.7%) and in the entire Sicily (5.9%). Adverse events in the qLAIV group were mild, with only 3.3% experiencing them, primarily presenting as a feverish rise (3.2%). No severe adverse reaction was reported. Conclusions: The educational intervention significantly raised paediatric influenza vaccination rates among the participating FPs, and in general improved influenza vaccination coverage rates in the Palermo's LHU. Minimal, non-serious adverse events underscored the vaccine's safety. Training sessions ensured paediatricians stayed informed, enabling them to provide comprehensive information to parents for secure and informed vaccination decisions in their practices

Decade-long insights: tracking asbestos-related health impacts among formerly exposed workers in Palermo, Italy

Background: Asbestos is a foremost occupational carcinogen globally. Despite the prohibition under Law 257/1992, Italy persists as one of the European nations most burdened by asbestos-related diseases (ARDs). This research assessed ARD cases in asbestosexposed workers from the Province of Palermo, Italy, spanning 2010-2021. Methods: Data acquisition utilized the epidemiological dataset from the 'Service of Prevention and Safety on Work Environment' under the Prevention Department of Palermo's Local Health Authority (LHA). Results: Between 2010 and 2021, we identified 245 ARD instances, comprising 163 Asbestosis/Pleural plaques, 41 Lung Cancers, 38 Mesotheliomas, and 3 unspecified cases. Multivariate analysis indicated a notable decline in temporal exposure for mesothelioma (HR=0.933; 95% CI=0.902-0.965) and lung cancer (HR=0.93; 95% CI=0.90-0.978) relative to pleural plaques/asbestosis. Tobacco use displayed a pronounced correlation with lung cancer (smoker HR=64.520 95% CI=13,075-318.390; former smoker HR=20.917 95% CI=4,913-89.048). A significant link was observed between mesothelioma and pleural plaques/asbestosis in those employed in shipbuilding and repair (HR=0.371 95% CI=0.155-0.892). Conclusions: ARDs persist in clinical observations, even following the 1992 cessation of asbestos-related activities, emphasizing an enduring public health challenge. Enhancing prevention strategies is paramount, focusing on amplifying anamnestic and occupational data collection, thereby facilitating superior early diagnosis strategies for these maladies in the occupationally exposed cohort

Protein docking using an ensemble of spin labels optimized by intra-molecular paramagnetic relaxation enhancement

Macromolecular Biochemistr