Brucella antigens possible application to enzyme inmunoassays : review of literature

La presente es una visión general sobre los antígenos de Brucella, elaborada con el objeto de ampliar, más que limitar, su aplicación a las pruebas inmunoenzimáticas (ELISA). A pesar de la poca justificación inmunológica para incluir aquí las exotoxinas, las nucleoproteínas o el peptidoglican como antígenos, es muy difícil no hacerlo sin estar juzgando arbitrariamente la potencialidad de la tecnología inmunoenzimática. Lo anterior no implica que no se puedan sacar conclusiones sobre cuáles deban ser los antígenos más convenientes para ELISA. Cuando se requiere información diagnóstica, económica y rápida sobre un conjunto de antígenos, es comprensible el uso de células bacterianas completas o extractos crudos. Sin embargo, a medida que las inquietudes científicas se hacen más complicadas y refinadas, los antígenos deberán ser cada vez más selectivos. En los últimos años, a pesar de las dificultades que ha sido necesario vencer dada la tendencia de los antígenos de Brucella a formar complejos, se han empleado componentes purificados como el s-LPS y las proteínas. Más recientemente se han estudiado subunidades y aun epítopes purificados de estos antígenos, debido parcialmente al potencial de los anticuerpos monoclonales como sondas monitoras. Por consiguiente, es evidente que, tanto los extractos crudos como los componentes purificados de las especies de Brucella tendrán sus aplicaciones, que la ELISA, será una tecnología flexible capaz de acomodarse a este amplio espectro de antígenos y a diversos diseños experimentales.The present review has taken a general outlook on Brucella antigens so as to expand, rather than limit, possible applications to the enzyme immunoassay or EIA. Hence, although there is little justification for including exotoxins, nucleoproteins or peptidoglycan as antigens, it was difficult to exclude these without placing arbitrary judgement on their uses to EIA technology. That is not to say that one cannot draw conclusions as to the direction of EIA antigens. There will always be merit in using either whole cells or crude extract when an economical, rapidly produced array of antigens is required for diagnostic purposes. However, as the research questions become more intricate and refined, so will the reagents. Within the last few years, purified components of the bacterium, such as s-LPS and proteins, have been used (a sizeable hurdle given the nature of Brucella antigens to form complexes and to be purified with difficulty). More recently subunits and even epitopes of these purified reagents have been examined, partly due to the impact of monoclonal antibodies as probes. It is therefore evident that crude extracts or purified components of Brucella species will both have their uses, and that the EIA will be a flexible technology that will be able to accommodate this broad range of antigens for diverse experimental design

Respuesta inmune en bovinos a proteínas estructurales del virus de la rinotraqueitis infecciosa bovina (RIB)

Se realizó el seguimiento de las poblaciones de leucocitos mononucleares circulantes en bovinos, obtenidas mediante gradiente de densidad y se evaluó su respuesta al estímulo ocasionado por la inoculación de una vacuna a virus vivo modificado y de un antígeno de subunidades protéicas de membrana del virus de la RIB. Los marcadores celulares seleccionados fueron los de inmunoglobulinas de superficie (Igs) para linfocitos B, formación de rosetas E para linfocitos T y la capacidad fagocítica para monocitos. 3 grupos de bovinos denominados grupo 1, grupo 2 y control fueron sangrados durante 18 días para el establecimiento de los niveles celulares básicos. Posteriormente los animales del grupo 1 fueron vacunados vía intranasal con vacuna viva y los animales del grupo 2 con antígeno de subunidades protéicas en adyuvante por vía intramuscular. A continuación se siguió la evaluación celular durante un mes, período al cabo del cual los animales fueron desafiados vía intranasal con virus vivo virulento y evaluados durante 20 días, para un total de 67 muestreos. Se encontró que la vacunación con el antígeno de subunidades indujo elevación en la concentración linfoide Y y en la capacidad fagocítica, mayor conversión serológica y manifestaciones clínicas menos severas después de la vacunación y el desafío, así como neutralización del virus a nivel local. Lo anterior, unido a la eliminación del riesgo de diseminación e inducción de latencia viral demostró la mejor calidad del estímulo, sobre la vacuna de virus vivo. Se considera importante profundizar en el estudio de marcadores celulares más específicos y el seguimiento de las actividades citotóxica y blastogénica para la evaluación integral de la capacidad protectora de estos sistemas de vacunación.Cellular aspects of immune response to infectious bovine rhinotracheitis (IBR) virus infection were evaluated through the quantitation of mononuclear cell population from bovine peripheral blood, isolated by density gradient method. The cellular differential markers used were, surface immunoglobulin (Igs) for B-lymphocytes, the formation of "E" rosettes for T-lymphocytes and phagocytic activity for monocytes. Eleven animals distributed in three groups named, control, group 1 and group 2, were monitored one day apart during 18 days, in order to stablish basic cellular levels. Afterwards, groups 1 and 2 were vaccinated intranasally with viral purified membrane antigen respectivelly, and the same parameters evaluated during a month; subsequently, the groups were challenged with live virulent IBR virus and evaluated for an extra 20 days period, up to a total of 67 samplings. Following vaccination and challenge, group 2 showed high T-lymphocytes and phagocytic activity values, as well as severe clinical signs suggesting that the purified antigen stimulus was better than that produced with the live vaccine. Higher antibody titers and serological conversion in animals from this group as well as reduced risk of virus disemination and latency confirmed the former conclusion. Complementary, experiments for the evaluation of the protective capacity of this vaccination approach are considered of special importance.Ganado de doble propósito-Ganaderia doble proposit

Respuesta humoral a rinotraqueitis infecciosa bovina evaluada por seroneutralización e inmunodifusión en ganado lechero vacunado.

En Colombia el aislamiento y las evidencias serológicas sobre el virus de la rinotraqueitis infecciosa bovina (RIB o IBR), así como las manifestaciones clínicas e histopatológicas compatibles justifican su estudio. En este trabajo se siguió la evolución de los anticuerpos séricos a RIB y se observó el comportamiento clínico de una población bovina mayor de 6 meses, después de vacunación. Se buscó con esto conocer a nivel de campo el grado de protección conferido por los anticuerpos y simultáneamente la posibilidad de utilización de la inmunodifusión doble (IDD) como prueba tamiz con respecto a la tradicional seroneutralización (SN). Un total de 150 bovinos de una explotación lechera de la sabana de Bogotá (Colombia), fueron estudiados en su producción de anticuerpos humorales durante 16 meses por las técnicas de seroneutralización e inmunodifusión después de vacunación a virus vivo modificado, vía intranasal. Se detectó elevación significativa (p menor o igual que 0.05) de títulos neutralizantes a la primera sangría post-vacunación. Los títulos en general se mantuvieron elevados hasta el cuarto mes, tiempo en el cual empezaron a descender hasta alcanzar niveles significativamente más bajos (p menor o igual que 0.05) que los valores iniciales, observándose simultáneamente una baja protección a la infección respiratoria. La evaluación de los sueros por las técnicas de seroneutralización e inmunodifusión permitió corroborar la confiabilidad de la inmunodifusión como prueba de selección para reactores positivos. Se analizaron factores de especificidad y sensibilidad la mismaGanado de leche-Ganadería lech

La técnica de Elisa en el diagnóstico serológico de la leucosis bovina en Colombia.

En Colombia, la técnica más difundida para el diagnóstico de la leucosis bovina es la inmunodifusión en agar con antígeno gp-58. Con el objeto de ampliar los conocimientos, mejorar el diagnóstico y el control de la infección, buscando normalizar y comparar con la inmunodifusión las metodologías inmuno-enzimáticas se hizo el análisis de 786 bovinos pertenecientes a explotaciones con alta reactividad serológica a la infección. Según diagnóstico, previamente realizado por inmunodifusión, se obtuvo un aumento significativo en el establecimiento de animales positivos. Por lo anterior se recomienda el empleo combinado y complementario de la técnica de inmunodifusión actualmente empleada, con la de la técnica inmuno-enzimática, en programas de control que busquen en el corto o mediano plazo la erradicación de la infección en algunos hatos o regiones sometidos a programas especiales. Se describen las condiciones para la normalización de la técnica inmuno-enzimática aplicada al diagnóstico serológico de la infección por leucosis bovina. Se sugiere la aplicación de está metodología a otras entidades virales que afectan a la población bovina, siempre y cuando se cuente con un elevado número de controles negativos, antígenos altamente purificados y análisis estadísticos que garanticen la repetibilidad de los resultadosGanado de carne-Ganadería carneGanado de leche-Ganadería lech

Linfosarcoma bovino en Colombia: presentación de la forma adulta de la enfermedad.

En el presente estudio se describe un caso de linfosarcoma bovino, forma adulta en una vaca Holstein, y se incluyen: la historia clínica, alteraciones en hematocrito, hemoglobina, recuento leucocitario total y diferencial, fraccionamiento electroforético en las proteínas séricas y presencia de anticuerpos específicos contra el virus del linfosarcoma bovino por la prueba de inmunodifusión. Se estudió una hembra de 5 años de edad, proveniente del municipio de Sopó, Cundinamarca, Colombia, la cual permaneció en decúbito toráxico durante una semana antes de ingresar al Laboratorio de Investigaciones Médicas Veterinarias del ICA. En el laboratorio, el animal sobrevivió en decúbito toráxico por 7 días durante los cuales se tomaron muestras de sangre con y sin anticoagulantes para determinaciones de hematocrito, hemoglobina, recuento leucocitario total y diferencial, morfología de los leucocitos, concentración de proteínas séricas totales, concentración de globulinas y presencia de anticuerpos contra el linfosarcoma bovino. Se describen las lesiones neoplásicas macro y microscópicas observadas en las porciones lumbar y sacra de la médula espinal, nervio ciático izquierdo, corazón, músculos intercostales, diafragma, hígado, abomaso, riñones y en algunos ganglios linfáticos. Macroscópicamente, el útero no presentó ninguna alteración, sin embargo microscópicamente se observó infiltración y proliferación linfoide neoplásica severa en el endometrioGanado de leche-Ganadería lech

Comparación de metodologías para la purificación de proteínas de membrana externa de Brucella abortus.

Las proteínas de la membrana externa de la Brucella abortus, Cepa 19 y RB-51 se purificaron por dos métodos, el primero basado en la extracción secuencial por tratamientos sucesivos con detergentes y lisozima y el segundo, en la formación del saco de peptidoglican con sus proteínas asociadas, utilizando dodecil sulfato de so-dio (SOS) a 50°C y extracción directa de las proteínas de la membrana externa con 50 mM de MgCl2 en SDS-23 Mercaptoetanol a 37°. Se utilizó la sonicacion para lograr la ruptura bacterial y su efecto se comprobó por microscopia electrónica. Las proteínas obtenidas se caracterizaron por electroforesis en geles de poliacrilamida. El método de extracción por detergentes aniònicos débiles y dipolares y tratamiento con lisozima, comprobó ser superior en calidad, selectividad y concentración de las proteínas de interés. Los pesos moleculares obtenidos para las proteínas denominadas porinas van de 37 a 41 kilo Daltons (k0), asi mismo se detecta una proteína de bajo peso molecular (14kI3). Se detecto reacción especifica de las proteínas en sueros controles de bovinos con infección natural de B. abortus por to técnica de inmunotransferencia en papel de nitrocelulosa.Outer membrane proteins of Bruce/la abortus strain 19 and strain RB-51 were purified using two methods. One based on sequential detergent extraction plus iysosyme treatment and the other obtaining peptidoglican saculae associated proteins by sodium dodecil sulfate (SDS) treatment at 50°C, and external protein extraction with SDS-23 mercaptoetanol, 50 mM MgCl2 at 37°C. Sonication was used in order to disrupt the cells and its effect was monitored by electron microscopy. The proteins were characterized by polycrilamide gel electrophoresis. Detergent and lysozyme treatment demonstrated superiority over SDS extraction regarding selectivity, antigenicity and yield. The proteins obtained from strain RB-51 had less LPS contamination. The molecular weights of the porin proteins obtained ranged between 37 and 41 kD, and a 14 kD protein was also detected. Specific reaction of the purified proteins was detected by western-blotting with positive bovine control serums.Ganado de leche-Ganadería lech

Prevalencia serológica de leucosis bovina en el área central del valle de Sogamoso durante 1982.

Debido a que la infección causada por el virus de leucosis bovina se viene diagnosticando cada vez en forma más frecuente en hatos orientados hacia la producción de leche, se hizo un estudio en el área central del valle de Sogamoso, cuyo objetivo fue conocer la prevalencia de la infección en esta zona. Para esta investigación se analizó una muestra de 646 sueros, obtenida por la aplicación de un modelo de distribución binomial, estableciéndose por la prueba de distribución binomial, estableciéndose por la prueba de inmunodifusión en gel una prevalencia de 9,75 más 2,34 por ciento (P menor o igual que 0,05). Se determinó que esta tasa es mayor en algunas fincas y especialmente en el municipio de Sogamoso (11,6 por ciento), discutiéndose el posible papel de algunos factores epidemiológicos. Se sugiere la realización de estudios similares en otras áreas y se recomiendan algunas medidas para el control de la infecciónGanado de leche-Ganadería lech

Gestión del conocimiento. Perspectiva multidisciplinaria. Volumen 10

El libro “Gestión del Conocimiento. Perspectiva Multidisciplinaria”, Volumen 10, de la Colección Unión Global, es resultado de investigaciones. Los capítulos del libro, son resultados de investigaciones desarrolladas por sus autores. El libro es una publicación internacional, seriada, continua, arbitrada de acceso abierto a todas las áreas del conocimiento, que cuenta con el esfuerzo de investigadores de varios países del mundo, orientada a contribuir con procesos de gestión del conocimiento científico, tecnológico y humanístico que consoliden la transformación del conocimiento en diferentes escenarios, tanto organizacionales como universitarios, para el desarrollo de habilidades cognitivas del quehacer diario. La gestión del conocimiento es un camino para consolidar una plataforma en las empresas públicas o privadas, entidades educativas, organizaciones no gubernamentales, ya sea generando políticas para todas las jerarquías o un modelo de gestión para la administración, donde es fundamental articular el conocimiento, los trabajadores, directivos, el espacio de trabajo, hacia la creación de ambientes propicios para el desarrollo integral de las instituciones

Provision of pharmaceutical care by community pharmacists across Europe: is it developing and spreading?

Rationale, Aims & Objectives: Pharmaceutical care involves patient-centred pharmacist activity to improve medicines management by patients. The implementation of this service in a comprehensive manner, however, requires considerable organisation and effort and indeed it is often not fully implemented in care settings. The main objective was to assess how pharmaceutical care provision within community pharmacy has evolved over time in Europe. Method: A cross-sectional questionnaire-based survey of community pharmacies, using a modified version of the Behavioural Pharmaceutical Care Scale (BPCS) was conducted in late 2012/early 2013 within 16 European countries and compared with an earlier assessment conducted in 2006. Results: The provision of comprehensive pharmaceutical care has slightly improved in all European countries that participated in both editions of this survey (n=8) with progress being made particularly in Denmark and Switzerland. Moreover, there was a wider country uptake, indicating spread of the concept. However, due to a number of limitations, the results should be interpreted with caution. Using combined data from participating countries, the provision of pharmaceutical care was positively correlated with the participation of the community pharmacists in patient-centred activities, routine use of pharmacy software with access to clinical data, participation in multi-disciplinary team meetings and having specialised education. Conclusion: The present study demonstrated a slight evolution in self-reported provision of pharmaceutical care by community pharmacists across Europe, as measured by the BPCS. The slow progress suggests a range of barriers which are preventing pharmacists moving beyond traditional roles. Support from professional bodies and more patient centred community pharmacy contracts, including remuneration for pharmaceutical care services, are likely to be required if quicker progress is to be made in the future