Mycobacterium bovis requires P27 (LprG) to arrest phagosome maturation and replicate within bovine macrophages

Mycobacterium bovis causes tuberculosis in a wide variety of mammals, with strong tropism for cattle and eventually humans. P27, also called LprG, is among the proteins involved in the mechanisms of the virulence and persistence of M. bovis and Mycobacterium tuberculosis. Here, we describe a novel function of P27 in the interaction of M. bovis with its natural host cell, the bovine macrophage. We found that a deletion in the p27-p55 operon impairs the replication of M. bovis in bovine macrophages. Importantly, we show for the first time that M. bovis arrests phagosome maturation in a process that depends on P27. This effect is P27 specific since complementation with wild-type p27 but not p55 fully restored the wild-type phenotype of the mutant strain; this indicates that P55 plays no important role during the early events of M. bovis infection. In addition, we also showed that the presence of P27 from M. smegmatis decreases the association of LAMP-3 with bead phagosomes, indicating that P27 itself blocks phagosome-lysosome fusion by modulating the traffic machinery in the cell host.Fil: Vázquez, Cristina Lourdes. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Bianco, María Verónica. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Blanco, Federico Carlos. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; ArgentinaFil: Forrellad, Marina Andrea. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Gutierrez, Maximiliano Gabriel. The Francis Crick Institute; Reino Unido. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bigi, Fabiana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires; Argentin

Assessment of the Immune Responses Induced in Cattle after Inoculation of a Mycobacterium bovis Strain Deleted in Two mce2 Genes

The generation of efficient candidate vaccines against bovine tuberculosis will contribute to the control of this zoonotic disease. Rationally attenuated Mycobacterium bovis strains generated by knockout of virulence genes are promising candidate vaccines. However, to be effective, these candidate vaccines should at least maintain the immunological properties of their virulent parental M. bovis strains. Therefore, the aim of this study was to obtain an M. bovis strain deleted in the mce2 genes and evaluate the effect of the mutation on the immunological profile elicited by the bacteria in cattle. We showed that the activation of CD4+ T cells in cattle inoculated with the mutant strain was equivalent to that in animals inoculated with the parental strain. Moreover, after in vitro stimulation, peripheral blood mononuclear cells from animals inoculated with the mutant produced higher levels of mRNA Th-1 cytokines than the parental strain. Therefore, these results indicate that the mce2 mutant is a promising candidate vaccine against bovine tuberculosis

Impact of the deletion of the six mce operons in Mycobacterium smegmatis

The Mycobacterium smegmatis genome contains six operons designated mce (mammalian cell entry). These operons, which encode membrane and exported proteins, are highly conserved in pathogenic and non-pathogenic mycobacteria. Although the function of the Mce protein family has not yet been established in Mycobacterium smegmatis, the requirement of the mce4 operon for cholesterol utilization and uptake by Mycobacterium tuberculosis has recently been demonstrated. In this study, we report the construction of an M. smegmatis knock-out mutant deficient in the expression of all six mce operons. The consequences of these mutations were studied by analyzing physiological parameters and phenotypic traits. Differences in colony morphology, biofilm formation and aggregation in liquid cultures were observed, indicating that mce operons of M. smegmatis are implicated in the maintenance of the surface properties of the cell. Importantly, the mutant strain showed reduced cholesterol uptake when compared to the parental strain. Further cholesterol uptake studies using single mce mutant strains showed that the mutation of operon mce4 was reponsible for the cholesterol uptake failure detected in the sextuple mce mutant. This finding demonstrates that mce4 operon is involved in cholesterol transport in M. smegmatis.Fil: Klepp, Laura Ines. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. CNIA Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Forrellad, Marina Andrea. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. CNIA Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Osella, Ana Virginia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. CNIA Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Blanco, Federico Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. CNIA Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Stella, Emma Julieta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas; ArgentinaFil: Bianco, María Verónica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. CNIA Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; ArgentinaFil: Santangelo, María de la Paz. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. CNIA Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; Argentina. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas; ArgentinaFil: Sassetti, Cristopher. Massachusetts Institute of Technology; Estados UnidosFil: Jackson, Mary. State University of Colorado - Fort Collins; Estados UnidosFil: Cataldi, Ángel Adrián. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. CNIA Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Bigi, Fabiana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. CNIA Castelar. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas; ArgentinaFil: Morbidoni, Héctor Ricardo. Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentin

Assessment of the Immune Responses Induced in Cattle after Inoculation of a Mycobacterium bovis Strain Deleted in Two mce2 Genes

The generation of efficient candidate vaccines against bovine tuberculosis will contribute to the control of this zoonotic disease. Rationally attenuated Mycobacterium bovis strains generated by knockout of virulence genes are promising candidate vaccines. However, to be effective, these candidate vaccines should at least maintain the immunological properties of their virulent parental M. bovis strains. Therefore, the aim of this study was to obtain an M. bovis strain deleted in the mce2 genes and evaluate the effect of the mutation on the immunological profile elicited by the bacteria in cattle. We showed that the activation of CD4+ T cells in cattle inoculated with the mutant strain was equivalent to that in animals inoculated with the parental strain. Moreover, after in vitro stimulation, peripheral blood mononuclear cells from animals inoculated with the mutant produced higher levels of mRNA Th-1 cytokines than the parental strain. Therefore, these results indicate that the mce2 mutant is a promising candidate vaccine against bovine tuberculosis

Identification and evaluation of new Mycobacterium bovis antigens in the in vitro interferon gamma release assay for bovine tuberculosis diagnosis

Bovine tuberculosis (bTB) is a common zoonotic disease, caused by Mycobacterium bovis (M. bovis),responsible for significant economic losses worldwide. Its diagnosis is based on the detection of cellmediated immunity under the exposure to protein purified derivative tuberculin (PPD), a complex andpoorly characterized reagent. The cross-reactivity to non-tuberculous mycobacterium species (falsepositiveresults) has been crucial to develop a more proper antigen. In the present study, we selected sixM. bovis Open Reading Frames (Mb1992, Mb2031c, Mb2319, Mb2843c, Mb2845c and Mb3212c) by insilicoanalysis and evaluated them in experimental and natural infection; none of these antigens hadbeen previously assessed as diagnostic antigens for bTB. The reactivity performance was tested in animalswith both positive and negative Tuberculin Skin Test (TST) results as well as in cattle infected withMycobacterium avium subesp. paratuberculosis (MAP). The six recombinant antigens individually inducedan IFN-g response, with overall responder frequency ranging from 18.3 to 31%. Mb2845c was the mostvaluable antigen with the potential to discriminate TST-positive cattle from either TST-negative or MAPinfected animals. Mb2845c showed similar performance to that observed with ESAT-6 and PPD-B amongTST and MTC specific-PCR positive animals, although this result needs to be proven in further studieswith a higher sample size. Our data confirm the feacibility to implement bioinformatic screening toolsand suggest Mb2845c as a potential diagnostic antigen to be tested in protein cocktails to evaluate theircontribution to bTB diagnosis.Fil: Eirin, Maria Emilia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Macías, Analia Florencia. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria; ArgentinaFil: Magnano, Gabriel Gustavo. Universidad Nacional de Río Cuarto. Facultad de Agronomía y Veterinaria; ArgentinaFil: Morsella, Claudia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Mendez, Laura. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Blanco, Federico Carlos. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Bianco, María Verónica. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Severina, Walter. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Alito, Alicia. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; ArgentinaFil: Pando, María de los Ángeles. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Instituto de Investigaciones Biomédicas en Retrovirus y Sida; ArgentinaFil: Singh, Mahavir. No especifíca;Fil: Spallek, Ralph. No especifíca;Fil: Paolicchi, Fernando Alberto. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro Regional Buenos Aires Sur. Estación Experimental Agropecuaria Balcarce; ArgentinaFil: Bigi, Fabiana. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Cataldi, Ángel Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina. Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria. Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias y Agronómicas. Instituto de Biotecnología; Argentin

Proyecto de declaración ante la propuesta de crear una legislación en materia de justicia juvenil en Argentina

La iniciativa gubernamental impulsada por el Ministerio de Justicia y Derechos Humanos y el Ministerio de Seguridad de la Nación, para elaborar un proyecto de ley de Responsabilidad Penal Juvenil que derogue la Ley 22.278/80 de la última dictadura cívico-militar, nos compromete como Universidad Pública a generar un espacio que complejice el análisis y ponga en diálogo las diferentes experiencias que se vienen desarrollando con relación al tema, a través de la docencia, la investigación y la extensión.Facultad de Ciencias Jurídicas y Sociale

Programa de investigación acción participativa: Nueva constitución y procesos constituyentes : ¿Qué constitución tenemos y qué constitución deberíamos tener?

Programa de Investigación Acción Participativa sobre “Nueva Constitución y Procesos Constituyentes” del Centro de Investigación en Derecho Crítico (CiDerCrit) FCJyS (UNLP), la Cátedra Libre del Manifiesto Argentino UNLP, con la participación del Observatorio Electoral y la Cátedra 3 Derecho Político de la FCJyS (UNLP) y otras instancias de la facultad y universidad que se puedan sumar en el futuro.Facultad de Ciencias Jurídicas y Sociale

Programa de investigación acción participativa: Nueva constitución y procesos constituyentes : ¿Qué constitución tenemos y qué constitución deberíamos tener?

Programa de Investigación Acción Participativa sobre “Nueva Constitución y Procesos Constituyentes” del Centro de Investigación en Derecho Crítico (CiDerCrit) FCJyS (UNLP), la Cátedra Libre del Manifiesto Argentino UNLP, con la participación del Observatorio Electoral y la Cátedra 3 Derecho Político de la FCJyS (UNLP) y otras instancias de la facultad y universidad que se puedan sumar en el futuro.Facultad de Ciencias Jurídicas y Sociale

Programa de investigación acción participativa: Nueva constitución y procesos constituyentes : ¿Qué constitución tenemos y qué constitución deberíamos tener?

Programa de Investigación Acción Participativa sobre “Nueva Constitución y Procesos Constituyentes” del Centro de Investigación en Derecho Crítico (CiDerCrit) FCJyS (UNLP), la Cátedra Libre del Manifiesto Argentino UNLP, con la participación del Observatorio Electoral y la Cátedra 3 Derecho Político de la FCJyS (UNLP) y otras instancias de la facultad y universidad que se puedan sumar en el futuro.Facultad de Ciencias Jurídicas y Sociale