CD39 as a marker of pathogenic CD8+ T cells in cancer and other chronic inflammatory diseases

CD8+ T cells have long been considered crucial in the immune response against tumors. However, in the last decade a subpopulation of exhausted CD8+ T cells has been described which exhibit a dysfunctional phenotype and contribute to poor immune control of tumors and chronic viral infections...Fil: Canale, Fernando Pablo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; ArgentinaFil: Ramello, María Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Montes, Carolina Lucia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentin

Tumor-induced senescent T cells promote the secretion of pro-inflammatory cytokines and angiogenic factors by human monocytes/macrophages through a mechanism that involves Tim-3 and CD40L

Solid tumors are infiltrated by immune cells where macrophages and senescent T cells are highly represented. Within the tumor microenvironment, a cross-talk between the infiltrating cells may occur conditioning the characteristic of the in situ immune response. Our previous work showed that tumors induce senescence of T cells, which are powerful suppressors of lympho-proliferation. In this study, we report that Tumor-Induced Senescent (TIS)-T cells may also modulate monocyte activation. To gain insight into this interaction, CD4+ or CD8+TIS-T or control-T cells were co-incubated with autologous monocytes under inflammatory conditions. After co-culture with CD4+ or CD8+TIS-T cells, CD14+ monocytes/macrophages (Mo/Ma) exhibit a higher expression of CD16+ cells and a reduced expression of CD206. These Mo/Ma produce nitric oxide and reactive oxygen species; however, TIS-T cells do not modify phagocyte capacity of Mo/Ma. TIS-T modulated-Mo/Ma show a higher production of pro-inflammatory cytokines (TNF, IL-1β and IL-6) and angiogenic factors (MMP-9, VEGF-A and IL-8) and a lower IL-10 and IP-10 secretion than monocytes co-cultured with controls. The mediator(s) present in the supernatant of TIS-T cell/monocyte-macrophage co-cultures promote(s) tubulogenesis and tumor-cell survival. Monocyte-modulation induced by TIS-T cells requires cell-to-cell contact. Although CD4+ shows different behavior from CD8+TIS-T cells, blocking mAbs against T-cell immunoglobulin and mucin protein 3 and CD40 ligand reduce pro-inflammatory cytokines and angiogenic factors production, indicating that these molecules are involved in monocyte/macrophage modulation by TIS-T cells. Our results revealed a novel role for TIS-T cells in human monocyte/macrophage modulation, which may have deleterious consequences for tumor progression. This modulation should be considered to best tailor the immunotherapy against cancer.Fil: Ramello, María Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Tosello Boari, Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Canale, Fernando Pablo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Mena, Hebe Agustina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Negrotto, Soledad. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Medicina Experimental. Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires. Instituto de Medicina Experimental; ArgentinaFil: Gastman, B. Cleveland Clinic; Estados UnidosFil: Gruppi, Adriana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Acosta Rodriguez, Eva Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Montes, Carolina Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin

Inhibitory Receptor Expression on T Cells as a Marker of Disease Activity and Target to Regulate Effector Cellular Responses in Rheumatoid Arthritis

Objective: Inhibitory receptors are essential for the regulation of effector immune responses and may play critical roles in autoimmune diseases. We evaluated whether inhibitory receptor expression on T cells from patients with rheumatoid arthritis (RA) were correlated with immune activation, disease activity, and response to treatment, as well as whether inhibitory receptor–mediated pathways were functional. Methods: Using flow cytometry, we performed extensive phenotypic and functional evaluation of CD4+ and CD8+ T cells from the blood and synovial fluid (SF) of RA patients ex vivo and after culture. The relationship of each parameter with the Disease Activity Score in 28 joints using the erythrocyte sedimentation rate (DAS28-ESR) and response to treatment was examined. Results: In RA patients with low levels of T cell activation, inhibitory receptor expression showed an inverse relationship with the DAS28-ESR. The frequency of T cells expressing multiple inhibitory receptors was reduced in untreated RA patients but returned to normal levels in treated patients. RA patients who responded to treatment showed an augmented frequency of inhibitory receptor–expressing T cells that correlated with reduced inflammatory cytokine production in comparison to nonresponders. Higher frequencies of effector and memory T cells that expressed multiple inhibitory receptors were seen in SF than in peripheral blood. Notably, inhibitory pathways were operative in blood and synovial T cells from all RA patients, although cells from nonresponder patients were less sensitive to inhibition. Conclusion: Inhibitory receptor expression on T cells from RA patients is inversely correlated with effector T cell function and disease activity and may predict response to treatment. Furthermore, different inhibitory pathways are functional and cooperatively suppress synovial T cells, providing a rationale for new treatment strategies to regulate acute local inflammation.Fil: Onofrio, Luisina Inés. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Zacca, Estefanía. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Ferrero, Paola Virginia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Acosta, Cristina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Mussano, Eduardo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Onetti, Laura. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Cadile, Isaac. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Gazzoni, M. Victoria. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Jurado, Raúl. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Medicina. Hospital Nacional de Clínicas; ArgentinaFil: Tosello Boari, Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Ramello, María Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Montes, Carolina Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Gruppi, Adriana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Acosta Rodriguez, Eva Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin

IL-17RA-signaling modulates CD8+ T Cell survival and exhaustion during trypanosoma cruzi infection

The IL-17 family contributes to host defense against many intracellular pathogens by mechanisms that are not fully understood. CD8+ T lymphocytes are key elements against intracellular microbes, and their survival and ability to mount cytotoxic responses are orchestrated by several cytokines. Here, we demonstrated that IL-17RA-signaling cytokines sustain pathogen-specific CD8+ T cell immunity. The absence of IL-17RA and IL-17A/F during Trypanosoma cruzi infection resulted in increased tissue parasitism and reduced frequency of parasite-specific CD8+ T cells. Impaired IL-17RA-signaling in vivo increased apoptosis of parasite-specific CD8+ T cells, while in vitro recombinant IL-17 down-regulated the pro-Apoptotic protein BAD and promoted the survival of activated CD8+ T cells. Phenotypic, functional, and transcriptomic profiling showed that T. cruzi-specific CD8+ T cells derived from IL-17RA-deficient mice presented features of cell dysfunction. PD-L1 blockade partially restored the magnitude of CD8+ T cell responses and parasite control in these mice. Adoptive transfer experiments established that IL-17RA-signaling is intrinsically required for the proper maintenance of functional effector CD8+ T cells. Altogether, our results identify IL-17RA and IL-17A as critical factors for sustaining CD8+ T cell immunity to T. cruzi.Fil: Tosello Boari, Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; ArgentinaFil: Araujo Furlan, Cintia Liliana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Fiocca Vernengo, Facundo. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Rodriguez, Constanza. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; ArgentinaFil: Ramello, María Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Amezcua Vesely, Maria Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; ArgentinaFil: Gorosito Serran, Melisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; ArgentinaFil: Nuñez, Nicolás G.. Institute Curie; Francia. Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale; FranciaFil: Richer, Wilfrid. Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale; Francia. Institute Curie; FranciaFil: Piaggio, Eliane. Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale; Francia. Institute Curie; FranciaFil: Montes, Carolina Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; ArgentinaFil: Gruppi, Adriana. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Acosta Rodriguez, Eva Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentina. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Departamento de Bioquímica Clínica; Argentin

Extrafollicular plasmablast present in the acute phase of infections express high levels of PD-L1 and are able to limit T cell respose

During infections with protozoan parasites or some viruses, T cell immunosuppression is generated simultaneously with a high B cell activation. It has been described that, as well as producing antibodies, plasmablasts, the differentiation product of activated B cells, can condition the development of protective immunity in infections. Here, we show that, in T. cruzi infection, all the plasmablasts detected during the acute phase of the infection had higher surface expression of PD-L1 than other mononuclear cells. PD-L1hi plasmablasts were induced in vivo in a BCR-specific manner and required help from Bcl-6+CD4+T cells. PD-L1hi expression was not a characteristic of all antibody-secreting cells since plasma cells found during the chronic phase of infection expressed PD-L1 but at lower levels. PD-L1hi plasmablasts were also present in mice infected with Plasmodium or with lymphocytic choriomeningitis virus, but not in mice with autoimmune disorders or immunized with T cell-dependent antigens. In vitro experiments showed that PD-L1hi plasmablasts suppressed the T cell response, partially via PD-L1. Thus, this study reveals that extrafollicular PD-L1hi plasmablasts, whose peaks of response precede the peak of germinal center response, may have a modulatory function in infections, thus influencing T cell response.Fil: Gorosito Serran, Melisa. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Fiocca Vernengo, Facundo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Almada, Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Beccaria, Cristian Gabriel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Gazzoni, Yamila Natali. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Canete, Pablo F.. Australian National University; ArubaFil: Roco, Jonathan A.. Australian National University; ArubaFil: Tosello Boari, Jimena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Ramello, María Cecilia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Wehrens, Ellen. University of California; Estados UnidosFil: Cai, Yeping. Australian National University; ArubaFil: Zuniga, Elina Isabel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; ArgentinaFil: Montes, Carolina Lucia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Cockburn, Ian A.. Australian National University; ArubaFil: Acosta Rodriguez, Eva Virginia. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; ArgentinaFil: Vinuesa, Carola G.. Australian National University; ArubaFil: Gruppi, Adriana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Córdoba. Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología; Argentin

IL-17RA Signaling Reduces Inflammation and Mortality during Trypanosoma cruzi Infection by Recruiting Suppressive IL-10-Producing Neutrophils

Members of the IL-17 cytokine family play an important role in protection against pathogens through the induction of different effector mechanisms. We determined that IL-17A, IL-17E and IL-17F are produced during the acute phase of T. cruzi infection. Using IL-17RA knockout (KO) mice, we demonstrate that IL-17RA, the common receptor subunit for many IL-17 family members, is required for host resistance during T. cruzi infection. Furthermore, infected IL-17RA KO mice that lack of response to several IL-17 cytokines showed amplified inflammatory responses with exuberant IFN-γ and TNF production that promoted hepatic damage and mortality. Absence of IL-17RA during T. cruzi infection resulted in reduced CXCL1 and CXCL2 expression in spleen and liver and limited neutrophil recruitment. T. cruzi-stimulated neutrophils secreted IL-10 and showed an IL-10-dependent suppressive phenotype in vitro inhibiting T-cell proliferation and IFN-γ production. Specific depletion of Ly-6G+ neutrophils in vivo during T. cruzi infection raised parasitemia and serum IFN-γ concentration and resulted in increased liver pathology in WT mice and overwhelming wasting disease in IL-17RA KO mice. Adoptively transferred neutrophils were unable to migrate to tissues and to restore resistant phenotype in infected IL-17RA KO mice but migrated to spleen and liver of infected WT mice and downregulated IFN-γ production and increased survival in an IL-10 dependent manner. Our results underscore the role of IL-17RA in the modulation of IFN-γ-mediated inflammatory responses during infections and uncover a previously unrecognized regulatory mechanism that involves the IL-17RA-mediated recruitment of suppressive IL-10-producing neutrophils

Senescencia de linfocitos T inducida por tumores : un nuevo mecanismo de evasión de la respuesta inmune

Tesis (Doctora en Ciencias Químicas) - - Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas, 2015Los tumores sólidos son extensamente infiltrados por células del sistema inmune (SI). Dentro del microambiente tumoral, una dinámica interacción entre las células infiltrantes y las células neoplásicas, como asimismo entre las células infiltrantes entre sí, resulta en el establecimiento de una respuesta inmune in situ, que generalmente favorece la progresión tumoral12. Esto se debe a que las células tumorales emplean diversos mecanismos que actúan en concierto para evadir la respuesta inmune. En este sentido, se ha demostrado que líneas tumorales de diversos orígenes inducen senescencia en Linfocitos 1 (LiT) humanos de donantes sanos34. En concordancia con estos resultados, se ha reportado que LiT con características de senescencia se encuentran incrementados en sangre periférica e infiltrando tumores primarios y metástasis en pacientes con cáncer56. Asimismo, se ha reportado que LiT senescentes son capaces de suprimir respuestas linfoproliferativas35, sugiriendo que su presencia en el nicho tumoral podría favorecer la progresión tumoral. Basándonos en reportes previos y en resultados de nuestro grupo de trabajo, construimos la hipótesis que forma parte de esta Tesis Doctoral. El microambiente tumoral conforma una red muy compleja en la cual las células interaccionan entre sí, ya sea por medio de factores solubles o moléculas de superficie. Así, postulamos que las células cancerosas pueden llevar a los LiT CD4+ y CD8+ a un estado disfuncional y a adquirir un fenotipo que se correlaciona con la senescencia. Estos LiT senescentes que están arrestados en el ciclo celular y que además son capaces de suprimir una respuesta linfoproliferativa de células T, podrían modular tanto en sangre periférica como en el tumor la respuesta mediada por otras células del SI, tanto innato como adaptativo favoreciendo el desarrollo tumoral. De esta manera, la inducción de senescencia en los LiT podría plantearse como un nuevo mecanismo de evasión de la respuesta inmune. Utilizando como modelo experimental un sistema de inducción de senescencia in vitro desarrollado en nuestro laboratorio, se planteó como objetivo general evaluar si LII CD4+ y CD8+ senescentes inducidos por tumores (LiT SIT) eran capaces de modular la respuesta de otras células del SI impactando de esta manera en la respuesta inmune frente a tumores. En consecuencia, en primer lugar se propuso estudiar características fenotípicas y funcionales de la población de LiT SIT que puedan impactar en la Resumen modulación de otras poblaciones celulares. En segundo lugar, dado que macrófagos y LiT son células claves en la progresión tumoral, se propuso evaluar si LiT SIT eran capaces de modular rnnocitos/crófagos (Mo/Ma) humanos. La evaluación fenotípica y funcional de LiT SIT reveló que estas células constituyen una población disfuncional per se, ya que son incapaces de producir citoquinas como IL- 2, IFN-y, TNF, IL-6 e IL-10. Además, LiT CD8+ SIT presentan una capacidad de degranulación disminuída, sugiriendo que su capacidad citotóxica está afectada. En concordancia con su fenotipo de senescencia, que incluye pérdida de la expresión de las moléculas co-estimulatorias CD27 y CD28, y acortamiento de sus telómeros, dichas células expresan altos niveles de los receptores inhibitorios Tim-3 y KLRG-1, pero no de PD-1. Además, exhiben niveles reducidos de la cadena 1 del complejo de señalización del TCR. Por otro lado, factores de transcripción involucrados en la diferenciación y función efectora de LiT se encuentran disminuidos o ausentes en LiT SIT. Confirmando resultados previos35, se observó que los LiT SIT suprimen la proliferación de LiT autólogos. lnteresantemente, el estudio cinético de supresión de la linfoproliferación realizado reveló que la supresión mediada por LiT SIT es un evento que ocurre tempranamente, sugiriendo que los LiT SIT constituyen, además, una población regulatoria per se. De hecho, se demostró que un gran porcentaje de los LiT SIT, aún en ausencia de estímulo, expresan en superficie moléculas inmuno-moduladoras como PDLi (ligando de PD-i) y Galectina-9 (ligando de Tim-3) que han sido implicadas en el control de respuestas linfoproliferativas. Por otra parte, se demostró que LiT CD4+ y CD8+ SIT son capaces de modular la activación de Mo/Ma autólogos hacia un perfil pro-inflamatorio y pro-angiogénico. Así, luego del co-cultivo con los LiT SIT, los Mo/Ma expresaron mayores niveles de la molécula CD16 (marcador de macrófagos Mi, pro-inflamatorios) y menores de la molécula CD206 (marcador de macrófagos M2, anti-inflamatorios). Sin embargo, no mostraron cambios en su capacidad fagocítica ni en la expresión de moléculas coestimulatorias o del complejo mayor de histocompatibilidad. En concordancia con su fenotipo de activación clásica (Mi), un mayor porcentaje de los Mo/Ma modulados por los LiT SIT produjeron especies reactivas de oxígeno y nitrógeno. Además, secretaron mayores niveles de citoquinas pro-inflamatorias tales como TNF, IL-6 e lL-1p y menores cantidades de la citoquina anti-inflamatoria IL-10. En relación con su activación hacia un Resumen perfil inflamatorio, Mo/Ma modulados por los LiT SIT exhibieron una mayor activación de la vía canónica de NF-KB. De acuerdo con reportes que demuestran una estrecha relación entre la producción de citoquinas pro-inflamatorias, la activación de la vía de NF-KB y la producción de factores angiogénicos, se encontró que los Mo/Ma incrementaron la producción de IL-8, VEGF-A y MMP-9 luego del cultivo con los LiT SIT e interesantemente, mostraron cantidades reducidas del factor angiostático IP-10. De acuerdo con el rol bien establecido de estos factores en la progresión tumoral, se observó que mediador/es presente/s en los sobrenadantes de co-cultivos de los Mo/Ma con LIT SIT promueve/n la sobrevida de células tumorales y la formación de túbulos por parte de células endoteliales humanas en ensayos in vitro. En concordancia con la incapacidad de los LiT SIT para producir citoquinas, se demostró que la modulación de los Mo/Ma por dichas células requiere el contacto Mo/Ma-LiT SIT. Aunque los LiT CD4+ SIT muestran un comportamiento diferente al de los LiT CD8+ SIT, el bloqueo de la interacción entre dichas células con anticuerpos monoclonales dirigidos contra las moléculas Tim-3 y CD40L, diferencialmente expresadas en los LiT SIT, redujo significativamente la producción de citoquinas pro-inflamatorias y factores angiogénicos en la mayoría de los donantes evaluados. Aunque no es posible descartar vías adicionales, estos resultados indican que las vías Tim-3/Gal-9 y CD40L/CD40 están implicadas en la modulación de los Mo/Ma inducida por los LiT SIT. Los resultados obtenidos en esta tesis doctoral permiten demostrar que los LiT SIT son jugadores relevantes en la compleja interacción entre células tumorales y células del SI infiltrantes que potencialmente favorece la progresión tumoral. Por ello, estas interacciones deberían ser consideradas con el fin de adaptar mejor la inmunoterapia contra el cáncer.Fil: Ramello, María Cecilia. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas; Argentina

MUC1/SEC and MUC1/Y overexpression is associated with inflammation in Sjogren's syndrome

Artículo de publicación ISIOBJECTIVES: To evaluate the expression and localization of MUC1/SEC and MUC1/Y isoforms in labial salivary glands (LSG) from Sj€ogren’s syndrome patients (SS patients), as well as their in vitro expression induced by cytokines. SUBJECTS AND METHODS: Labial salivary gland from 27 primary SS patients and 22 non-SS sicca subjects were studied. Relative MUC1/SEC and MUC1/Y mRNA levels were determined by qPCR and protein levels by Western blotting. Induction of mucin mRNAs was assayed in vitro. Immunohistochemistry was used for localization. RESULTS: Relative MUC1/SEC and MUC1/Y mRNA and protein levels were significantly higher in LSG from SS patients. These mRNAs were induced by cytokines. MUC1/SEC and MUC1/Y were detected in acini apical region of control LSGs, and significant cytoplasmic accumulation was observed in acini of SS patients. MUC1/Y localized in acinar nuclei and cytoplasm of inflammatory cells of LSG from SS patients. A strong positive correlation was observed between cellular MUC1/SEC levels and glandular function determined by scintigraphy. CONCLUSIONS: We show for the first time that MUC1/SEC and MUC1/Y are expressed in LSG of both SS patients and non-SS sicca subjects. The observed overexpression and aberrant localization of MUC1/SEC and MUC1/Y and their induction by pro-inflammatory cytokines may favor the perpetuation of the inflammatory environment that disrupts the salivary glandular homeostasis in SS patients.Fondecyt-Chile 1120062 1130250 CONICYT-FONDAP 15130011 CONICYT/Programa de Investigacion Asociativa (ACT) 1111 Conicyt-Chil

Disruption of tight junction structure in salivary glands from Sjögren's syndrome patients is linked to proinflammatory cytokine exposure

Objective. Disorganization of acinar cell apical microvilli and the presence of stromal collagen in the acinar lumen suggest that the labial salivary gland (LSG) barrier function is impaired in patients with Sjögren's syndrome. Tight junctions define cell polarity and regulate the paracellular flow of ions and water, crucial functions of acinar cells. This study was undertaken to evaluate the expression and localization of tight junction proteins in LSGs from patients with SS and to determine in vitro the effects of tumor necrosis factor α (TNFα) and interferon-γ (IFNγ) on tight junction integrity of isolated acini from control subjects. Methods. Twenty-two patients and 15 controls were studied. The messenger RNA and protein levels of tight junction components (claudin-1, claudin-3, claudin-4, occludin, and ZO-1) were determined by semiquantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction and Western blotting. Tight junction protein localization was determined by immunohisto-ch