Differente impatto sul rimodellamento cellulare e strutturale del ventricolo sinistro dell'ipertrofia geneticamente determinata e da sovraccarico pressorio.

La cardiomiopatia ipertrofica è una patologia ereditaria caratterizzata da una massiva ipertrofia del setto interventricolare, associata a mutazioni nei geni che codificano prevalentemente per proteine sarcomeriche. Al giorno d’oggi sono conosciute più di 100 mutazioni in oltre 36 geni che sono causativi della patologia, con una trasmissione autosomica dominante; le mutazioni più frequenti sono quella a carico della myosin binding protein C (MYBPC3) e myosin heavy chain  (MYH7). L’ipertrofia viene definita dalla presenza di un ventricolo sinistro ipertrofico non dilatato in assenza di altre cause cardiache o sistemiche che potrebbero portare ad un fenotipo similare. L’ipertrofia è spesso presente in forma asimmetrica, con inspessimento maggiore a carico della regione del setto adiacente alla valvola aortica. Questa alterata geometria ventricolare fa si che durante la sistole il lembo anteriore della valvola mitrale sia spinto verso la regione inspessita del setto provocando l’ostruzione del tratto di efflusso configurando una condizione definita come cardiomiopatia ipertrofica ostruttiva (HOCM). Nonostante la continua scoperta di geni associati allo sviluppo della patologia, la fisiopatologia di HOCM rimane ancora oscura. Molti geni infatti, trasmessi in maniera ereditabile, responsabili di mutazioni a carico di proteine sarcomeriche, possono causare in soggetti della stessa famiglia da una parte fenotipo ipertrofico e dall’altra una totale assenza di sintomatologia. Abbiamo ipotizzato che alla base della massiva e focale ipertrofia della HOCM sia presente una alterazione del turnover cellulare con marcata proliferazione cardiomiocitaria consentita da una adeguata risposta vasculogenica. Inoltre, per comprendere se questi eventi cellulari fossero specifici della HOCM, abbiamo analizzato campioni di cuori ipertrofici da sovraccarico pressorio ottenuti da miectomie del setto di pazienti con stenosi aortica (AoS) grave. La HOCM è la maggior causa di morte cardiaca improvvisa nei giovani adulti mentre la stenosi aortica è la maggiore causa di morte tra le cardiopatie da difetti valvolari, Le analisi morfometriche effettuate su sezioni colorate con tricromica di Masson hanno evidenziato un deposito di collagene a livello interstiziale e perivascolare in entrambe le patologie con un aumento più marcato nella stenosi aortica. Inoltre, studi effettuati sul compartimento vascolare, hanno rivelato una diminuzione della densità dei capillari del 38% nei soggetti affetti da HOCM e del 46% in pazienti con AoS. E’ stato interessante notare che a livello tessutale i precursori vascolari PDGFR positivi risultavano significativamente aumentati (+27%) nel miocardio di soggetti affetti da HOCM rispetto ai valori riscontrati nelle miectomie da AoS e nei controlli. Infine, abbiamo analizzato la proliferazione cellulare mediante marcatura con Ki67,e l’incidenza di apoptosi con TUNEL assay. Rispetto al miocardio di controllo, abbiamo riscontrato valori di proliferazione dei cardiomiociti 10 volte superiori nei soggetti con HOCM e 3.9 volte superiori in pazienti con AoS. Per contro, l’apoptosi risultava significativamente maggiore nelle due patologie ma era più elevata nella AoS. I nostri dati confermano l’ipotesi iniziale secondo la quale una localizzata massiva ipertrofia cardiaca possa essere originata da un alterato turnover cellulare. Paragonata ad una ipertrofia da sovraccarico pressorio, HOCM mostra una riduzione di deposito di collagene e di morte cellulare programmata, associate ad un notevole incremento della proliferazione cardiomiocitaria. Una eccessiva crescita non accompagnata da una consensuale morte cellulare potrebbe anche implicare un sovraffollamento e disarray dei cardiomiociti a livello tissutale

Time-course transcriptome analysis of a double challenge bleomycin-induced lung fibrosis rat model uncovers ECM homoeostasis-related translationally relevant genes

Background Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is an irreversible disorder with a poor prognosis. The incomplete understanding of IPF pathogenesis and the lack of accurate animal models is limiting the development of effective treatments. Thus, the selection of clinically relevant animal models endowed with similarities with the human disease in terms of lung anatomy, cell biology, pathways involved and genetics is essential. The bleomycin (BLM) intratracheal murine model is the most commonly used preclinical assay to evaluate new potential therapies for IPF. Here, we present the findings derived from an integrated histomorphometric and transcriptomic analysis to investigate the development of lung fibrosis in a time-course study in a BLM rat model and to evaluate its translational value in relation to IPF.Methods Rats were intratracheally injected with a double dose of BLM (days 0–4) and sacrificed at days 7, 14, 21, 28 and 56. Histomorphometric analysis of lung fibrosis was performed on left lung sections. Transcriptome profiling by RNAseq was performed on the right lung lobes and results were compared with nine independent human gene-expression IPF studies.Results The histomorphometric and transcriptomic analyses provided a detailed overview in terms of temporal gene-expression regulation during the establishment and repair of the fibrotic lesions. Moreover, the transcriptomic analysis identified three clusters of differentially coregulated genes whose expression was modulated in a time-dependent manner in response to BLM. One of these clusters, centred on extracellular matrix (ECM)-related process, was significantly correlated with histological parameters and gene sets derived from human IPF studies.Conclusions The model of lung fibrosis presented in this study lends itself as a valuable tool for preclinical efficacy evaluation of new potential drug candidates. The main finding was the identification of a group of persistently dysregulated genes, mostly related to ECM homoeostasis, which are shared with human IPF

Low PD-1 expression in Cytotoxic CD8+ Tumor infiltrating Lymphocytes Confers an Immune Privileged Tissue Microenvironment in NSCLC with a Prognostic and Predictive Value

The success of immune checkpoint inhibitors strengthens the notion that tumor growth and regression are immune regulated. To determine whether distinct tissue immune microenvironments differentially impact on clinical outcome in Non Small Cell Lung Cancer (NSCLC), an extended analysis of PD-L1 and Tumor Infiltrating Lymphocytes (TILs) was performed. Experimental Design Samples from resected adenocarcinoma (ADC 42) and squamous cell carcinoma (SCC 58) and from 26 advanced diseases (13 ADC, 13 SCC) treated with nivolumab were analyzed. PD-L1 expression and the incidence of CD3, CD8, CD4, PD-1, CD57, FOXP3, CD25 and Granzyme B TILs was immunohistochemically assessed. Results PD-L1 levels inversely correlated with N involvement although did not show a statistical significant prognostic value in resected patients. The incidence and phenotype of TILs differed in SCC vs ADC in which EGFR and KRAS mutations conditioned a different frequency and tissue localization of lymphocytes. NSCLC resected patients with high CD8 pos lymphocytes lacking PD-1 inhibitory receptor had a longer Overall Survival (OS:HR=2.268, 95%CI 1.056-4.871,p=0.03). PD-1-to-CD8 ratio resulted a prognostic factor both on univariate (HR=1.952, 95%CI 1.34-3.12,p=0.001) and multivariate (HR=1.943, 95%CI 1.38-2.86,p=0.009) analysis. Moreover, low PD-1 incidence among CD8(pos) cells was a distinctive feature of nivolumab treated patients showing clinical benefit with a prolonged Progression-Free Survival (PFS:HR=4.51, 95%CI 1.45-13.94,p=0.004). Conclusions In the presence of intrinsic variability in PD-L1 expression, the reservoir of PD-1 negative effector T-lymphocytes provides an immune-privileged microenvironment with a positive impact on survival of patients with resected disease and response to immunotherapy in advanced NSCLC

Entella II. Carta archeologica del comune di Contessa Entellina dalla preistoria al medioevo

A complete publication of historical and archaeological data from the survey in the territory of the Comune of Contessa Entellina (Palermo, Sicily) is provided in four books and a maps folder. This work aims at reconstructing the settlement history of a wide area (136 kmq) in the interior of western Sicily, from Prehistory to the Middle Ages. More than 400 sites and extra-site are presented with a full publication of archaeological assemblages, including drawing, photos and a list of ceramic fabrics. Several indexes allow a full navigation into the whole work.Opera in 3 volumi con tavole fuori testo: - I. Il contesto, le ricerche, il metodo - II. Catalogo dei siti e dei materiali, tomi 1-2 - III. Le dinamiche del popolamento - Tavole fuori testo. L'opera fornisce un quadro complessivo delle dinamiche dell'insediamento umano in un'area interna della Sicilia Occidentale, nella media valle del Belice, dalla preistoria al medioevo. Di oltre 400 tra siti ed extra-sito si descrivono le caratteristiche topografiche e i materiali rinvenuti; i cataloghi sono corredati da un congruo apparato illustrativo. Indici specifici e tabelle di sintesi consentono di muoversi agevolmente in una consistente massa di dati archeologici

Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy (4th edition)

In 2008, we published the first set of guidelines for standardizing research in autophagy. Since then, this topic has received increasing attention, and many scientists have entered the field. Our knowledge base and relevant new technologies have also been expanding. Thus, it is important to formulate on a regular basis updated guidelines for monitoring autophagy in different organisms. Despite numerous reviews, there continues to be confusion regarding acceptable methods to evaluate autophagy, especially in multicellular eukaryotes. Here, we present a set of guidelines for investigators to select and interpret methods to examine autophagy and related processes, and for reviewers to provide realistic and reasonable critiques of reports that are focused on these processes. These guidelines are not meant to be a dogmatic set of rules, because the appropriateness of any assay largely depends on the question being asked and the system being used. Moreover, no individual assay is perfect for every situation, calling for the use of multiple techniques to properly monitor autophagy in each experimental setting. Finally, several core components of the autophagy machinery have been implicated in distinct autophagic processes (canonical and noncanonical autophagy), implying that genetic approaches to block autophagy should rely on targeting two or more autophagy-related genes that ideally participate in distinct steps of the pathway. Along similar lines, because multiple proteins involved in autophagy also regulate other cellular pathways including apoptosis, not all of them can be used as a specific marker for bona fide autophagic responses. Here, we critically discuss current methods of assessing autophagy and the information they can, or cannot, provide. Our ultimate goal is to encourage intellectual and technical innovation in the field