Intrahost Diversity of Feline Coronavirus: A Consensus between the Circulating Virulent/Avirulent Strains and the Internal Mutation Hypotheses?

To evaluate the most controversial issue concerning current feline coronavirus (FCoV) virology, the coexisting hypotheses of the intrahost and interhost origins of feline infectious peritonitis virus (FIPV) in regard to the pathogenesis of feline infectious peritonitis (FIP), this study aimed to assess the molecular diversity of the membrane gene FCoVs in 190 samples from 10 cats with signs of FIP and in 5 faecal samples from cats without signs of FIP. All samples from the non-FIP cats and 25.26% of the samples from the FIP cats were positive for the FCoV membrane (M) gene. Mutations in this gene consisted of SNP changes randomly scattered among the sequences; few mutations resulted in amino acid changes. No geographic pattern was observed. Of the cats without FIP that harboured FECoV, the amino acid sequence identities for the M gene were 100% among cats (Cats 1–3) from the same cattery, and the overall sequence identity for the M gene was ≥91%. In one cat, two different lineages of FCoV, one enteric and one systemic, were found that segregated apart in the M gene tree. In conclusion, the in vivo mutation transition hypothesis and the circulating high virulent-low virulent FCoV hypothesis have been found to be plausible according to the results obtained from sequencing the M gene

Immunohistochemical detection of GFAP and TGF ?1 in C57Bl6 mice during acute vesicular stomatitis virus encephalitis

Activation of astrocytes or astrogliosis is a prominent component of the inflammatory response and an indicator of injury in the brain. These astrocytes produce a large array of inflammatory mediators, growth and neuroprotective factors. This study was an investigation from astrocyte (GFAP) response and TGF- ?1 involvement during VSV acute encephalitis using immunohistochemistry to verify relation between astrocytes and TGF-?1. Animals developed symptoms around 6th day after VSV inoculation. Viral proteins were mainly detected at olfactory bulb, ventricular cell layer and disseminated to hippocampus, mesencephalon and diecephalon areas and brain stem. Also at 6th day post inoculation GFAP and TGF-?1 staining was observed in good association with virus-detected areas of brain. However, in mice with severe symptoms we observed reduction in the intensity of GFAP labeling at the same areas where TGF-?1 upregulation was observed. These areas show correlation with areas of necrosis and where are astrocytes with degenerative aspect. We observed TGF-?1 staining in damaged astrocytes, suggesting an effort of those cells in controlling inflammation in acute phase of VSV encephalitis

Tumor de células da granulosa com metástases numa gata

The clinical, gross and microscopical features of a granulosa cell tumour in the ovary of a 2-year-old cat are described. This is a rare tumour in cats, moreover because of the animal’s age. It was diagnosed clinically by ultrasound examination. The tumour, a cystic mass in the region of the left ovary, metastasized to the epiplon and lungs. Tumour cells expressed vimentin and were arranged in a diffuse sarcomatous pattern, supported by a fine fibrovascular stroma. The presence of hair loss and repeated oestrus as clinical signs are indicative of orthoendocrine paraneoplastic syndrome, due to excessive oestrogen stimulation. This tumour should be considered in the differential diagnosis of behavioural disturbances in female cats.As características clínicas, macroscópicas e microscópicas de um tumor de células da granulosa no ovário de uma gata de 2 anos de idade são descritas neste trabalho. Essa neoplasia é rara em gatos, principalmente devido à idade apresentada pelo animal. O diagnóstico foi feito clinicamente através de exame ultra-sonográfico. O tumor, uma massa cística na região do ovário esquerdo, metastatizou para o epíploo e para os pulmões. As células tumorais expressaram vimentina e arranjavam-se num padrão sarcomatoso e difuso, sustentado por fino estroma fibrovascular. A presença de sinais clínicos, como perda de pêlos e repetição de estros, é indicativa de síndrome paraneoplásica ortoendócrina, devido à excessiva estimulação estrogênica. A existência desse tipo de tumor deve ser considerada no diagnóstico diferencial de distúrbios comportamentais em gatas

Genotyping of polymorphisms in the prnp gene in Santa Ines sheep in the State of São Paulo, Brazil

Scrapie ou paraplexia enzoótica dos ovinos é uma doença neurodegenerativa fatal que acomete ovinos e raramente caprinos. A doença é influenciada por polimorfismos nos códons 136, 154 e 171 do gene prnp que codifica a proteína priônica. Os animais podem ser susceptíveis ou resistentes, de acordo com as sequências alélicas observadas nos referidos códons. No Brasil ocorreram apenas casos de animais que foram importados, sendo o país considerado livre da doença. Neste trabalho foi realizada a genotipagem dos diferentes polimorfismos associados ao desenvolvimento do scrapie e a categorização em animais susceptíveis e resistentes. Foram sequenciadas 118 amostras provenientes de ovinos da raça Santa Inês criados em propriedades localizadas no Estado de São Paulo. Destas amostras foram identificados 6 alelos e 11 genótipos (ARQ/ARQ, ARR/ARQ, ARQ/AHQ, ARQ/VRQ, AHQ/AHQ, ARR/ARR, ARR/AHQ, VRQ/VRQ, ARQ/TRQ, TRR/TRR, TRQ/TRQ), dentre os quais o genótipo ARQ/ARQ teve ocorrência de 56,7%. Em nosso estudo foi detectada a presença da tirosina no códon 136, observação rara na medida em que não existem relatos nacionais e internacionais envolvendo a raça Santa Inês descrevendo este polimorfismo. Com os resultados obtidos, foi possível determinar a existência de grande variabilidade genética relacionada à raça Santa Inês no Estado de São Paulo. Apesar da variabilidade, apenas 1,69% dos genótipos observados mostraram-se extremamente resistentes ao scrapie. Estes dados demonstram que a raça nativa Santa Inês pode ser considerada potencialmente susceptível ao scrapie

Surgical evaluation and laboratory use of homologous pericardium in serous injury by abrasion of large colon (pelvic flexure) of horses

Intra-abdominal adhesions are equine surgery complications, which can result in obstructive processes and jeopardize the survival of these animals. The present study used 10 healthy, male mongrel horses (SRD), with four and 15 years of age and weighing between 300 and 400 kilograms (kg), who underwent laparotomy left station with the aim of inducing adhesions, test intestinal membrane using pericardium as prevention and evaluating the different systemic changes and the abdominal fluid. After sedation and local anesthesia, the surgical approach was used in grade; pelvic flexure was created in an area of abrasion that in Group 1 was covered by homologous pericardium and in Group 2, washed with saline. After repositioning muscle, the skin and subcutaneous tissue were sutured. Postoperative care consisted of clinical evaluation, abdominal fluid cytology, hematology and serum biochemistry in moments M0- preoperative, and M7, M14, M21 and M28 days postoperatively. New laparotomy was performed at 30 days from the surgery to verify adhesion, appearance and intestinal biopsy. The surgical technique allowed less trauma and restricted operative field. The clinical course was satisfactory, and fibrous scar was identified between the muscle planes. Adhesions were not observed. Laboratory evaluations showed increased bilirubin, hematocrit, monocyte, blood urea and protein density and segmented leukocyte peritoneal fluid. The present study concluded that the abrasion was insufficient to promote fibrous adhesions. The implant without proven efficacy is feasible and possible, and does not result in significant differences laboratory or deleterious changes. Aderências intra-abdominais são complicações de cirurgias de equinos que podem resultar em processos obstrutivos e comprometer a sobrevida dos animais. O presente estudo utilizou dez equinos hígidos, machos, sem raça definida (SRD), com quatro a 15 anos de idade e peso vivo situado entre 300 e 400 quilogramas (kg). Os animais foram submetidos à laparotomia esquerda em estação com o objetivo de serem induzidas aderências, testar a utilização intestinal de membrana biológica de pericárdio como prevenção e avaliar as diferentes alterações sistêmicas e do líquido abdominal. Após sedação e analgesia local, foi utilizado o acesso cirúrgico em grade, na flexura pélvica foi criada uma área de abrasão que, no Grupo 1, foi coberta por pericárdio homólogo e no Grupo 2, lavada com solução fisiológica. Após reposicionamento foi realizada a sutura muscular, de subcutâneo e pele. O pós-operatório constou de avaliações clínicas, citologia do líquido abdominal, hematologia e bioquímica sérica nos momentos M0- pré-operatório e M7, M14, M21 e M28 dias de pós-operatório. Nova laparotomia foi realizada aos 30 dias para verificar aderências, aspecto e biópsia intestinal. A técnica cirúrgica possibilitou menor trauma e campo operatório restrito. A evolução clínica foi satisfatória e cicatriz fibrosa foi identificada entre os planos musculares. Aderências não foram observadas. As avaliações laboratoriais demonstraram aumento de bilirrubinas, hematócrito, monócito, ureia sanguíneos e de proteína, densidade e leucócitos segmentados no líquido peritoneal. Conclui-se que a abrasão foi insuficiente para promover aderências fibrosas. O implante, sem comprovada eficácia, é viável e possível, por não resultar em diferenças laboratoriais significativas ou alterações deletérias

Os efeitos da radiação laser arseneto de gálio (AsGa) sobre a regeneracão de tendões em cães

Trinta cães sem raça definida foram divididos em três grupos e submetidos à tenotomia e tenorrafia do tendão calcâneo comum direito e esquerdo. No membro esquerdo foi efetuada aplicação laser AsGa (4j/cm2) para avaliar o processo cicatricial dos mesmos. Posteriormente, as articulações do tarso foram imobilizadas durante 11 dias nos animais do grupo I (sacrificados nesta data) e 21 dias naqueles do grupo II (sacrificados aos 22 dias) e III (sacrificados aos 40 dias de evolução pósoperatória). Os cães do grupo III foram submetidos a caminhadas diárias de 30 minutos nas duas semanas seguintes para estimular a mobilidade do tendão. A avaliação clínica dos efeitos da terapia laser na funcionalidade dos membros foi feita através de exames físicos. Os tendões foram avaliados à necropsia através de análise macroscópica e pelo estudo microscópico realizado em todos os segmentos aos 11 (grupo I), vinte e dois (grupo II) e quarenta dias (grupo III) de evolução pós-operatória. O desempenho funcional do membro esquerdo nos animais do grupo III, exposto à radiação laser mostrou-se melhor que no membro direito. Macroscopicamente os tendões irradiados apresentaram melhor vascularização, menos aderências e cicatrização com melhor aparência estética que os tendões testemunhos. Os estudos histológicos revelaram que o laser não interferiu significativamente na produção de fibroblastos e na síntese de fibras colágenas.In order to evaluate the influence of lasertherapy on the healing process. Thirty crossbred dogs were divided into three groups (group I, II and III: dogs were sacrificed respective at day 10th, 21st and 40 th after starting the experiment) and submitted to tenotomy and tenorraphy of the calcanean common tendon of both limbs.Tarsal joints were fixed for eleven days in those dogs of group I and for twenty-one days on group II and III. All dogs from group III were submitted to daily 30 minutes walks for two weeks in order to stimulate the tendon mobility. AsGa laser was applied daily (4j/cm2) during ten days on the left limb of all dogs during the first postoperative days and the first ten days of the exercises period for group III. Clinical evaluation of lasertherapy on limb functionality was made by physical examination. Involved tendons were evaluated at necropsy and by optic microscopy at eleventh post-operative day (group I), twentieth-first day (group II) and fortieth day (group III). Functional performance of the left hind limbs, exposed to the laser beam was better than that of the right limb. Grossly irradiated tendons showed better vascularization, less adherence and better repair than the non-irradiated one. Histological studies showed that laser the rapy did not interfere significantly on fibroblast production and collagem synthesis

Case report: tuberculosis in a goat (Capra hircus)

Uma cabra da raça Saanem, com 3 anos, foi atendida no Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, com histórico de emagrecimento progressivo, com doença respiratória não responsiva a antibioticoterapia convencional. O animal apresentava perda de peso, aumento de linfonodo submandibular esquerdo e sintomas de broncopneumonia. Tendo sido considerado positivo no teste cervical comparativo foi sacrificado e à necropsia foram observadas lesões sugestivas de tuberculose nos linfonodos submandibulares e mesentéricos, pulmão e baço. Nos exames laboratoriais houve crescimento, aos 32 dias, de bacilos álcool-ácido resistentes (BAAR), no meio de cultura de Stonebrink, e a estirpe isolada foi identificada no PCR como sendo Mycobacterium bovis. A pesquisa de Corynebacterium sp. foi negativa. Na histopatologia, as lesões examinadas apresentavam características dos granulomas típicos. Usandose coloração para BAAR foi possível observação de bacilos no centro de um granuloma, sugestivo de Mycobacterium spp. Casos de tuberculose em caprinos têm sido considerados raros no BrasilA 3-year-old Saanen-breed was examined at the Veterinary Hospital of the College of Veterinary Medicine and Animal Husbandry of the University of São Paulo, with a history of progressive emaciation and respiratory disease which did not respond to conventional antibiotic therapy. The animal was underweight, had swelling of the left submandibular lymph node and signs of bronchopneumonia. As it was reactor for comparative cervical test, the goat was slaughtered and at necropsy tuberculosis-like lesions were found in its submandibular and mesenteric lymph nodes, lungs and spleen. Acid-fast bacilli growth occurred within 32 days in Stonebrink media culture and the isolate was identified by PCR as M. bovis. Diagnostic test for Corynebacterium sp. was negative. Histopathologic examination showed characteristics of tuberculosis granulomas. When the acid-fast stain was employed in lesions smears, it was possible to observe bacilli in the middle of a granuloma, suggesting Mycobacterium spp. Tuberculosis cases in goats have been considered rare in Brazi

Patologia de neonatos bovinos originados por meio da técnica de transferência nuclear de células somáticas: clonagem

Os mecanismos de morte em animais clonados a partir de células somáticas são poucos elucidados. Malformações de órgãos, alterações de tamanho e peso desses animais foram anomalias já descritas, porém em casos isolados. Desse modo, estudos nos níveis anatomo e histopatológicos são de suma importância para ajudar a compreensão dos fatores responsáveis pelos altos índices de insucessos com a utilização da TNCS (transferência nuclear de células somáticas). Assim, o presente trabalho foi realizado com o objetivo de descrever, por meio de exames anatomopatológicos, as alterações presentes em um grupo de animais gerados por TNCS, que vieram a óbito entre 1 e 19 dias de vida. Esse experimento foi realizado entre os anos de 2004 e 2008 na fazenda Tambaú, cidade de Tambaú, Estado de São Paulo. No total foram gerados 21 animais da raça Nelore (Bos indicus), sendo que 11 vieram a óbito e dez apresentaram boa evolução clínica no período perinatal. Foram realizadas as necropsias dos animais e posterior análise histopatológica de tecidos alterados. Esse estudo mostrou alta prevalência de alterações cardiopulmonares, que provavelmente foram determinantes nos mecanismos de morte dos animais. Dentre essas alterações a hipertensão pulmonar e modificações hemodinâmicas diagnosticadas através do exame histopatológico foram as mais frequentes.The death mechanisms in cloned animals are not well elucidated. There are few cases describing organ malformation, size and weight alterations in these animals. Pathologic studies are necessary to understand the high level of unsuccessful results using the NTSC (nuclear transfer somatic cell) technique. The present study was carried out to describe alterations present in a group of animals generated by NTSC technique that deceased between 0 to 19 days of life, using anatomopathologic examination. This experiment was conducted at Tambaú Farm in São Paulo State between years 2004 and 2008. Initially there were twenty one Nelore breed Bos indicus animals, but 11 of them deceased and ten survived and showed satisfactory clinical evolution in perinatal period. Animals necropsies and histopathologic analyses where performed. The results revealed a high prevalence of cardiopulmonary alterations, which were predominantly lung hypertension and hemodynamic profile changes, revealed by histopathologic analyses

Biological and immunological studies of five Brazilian rabies virus isolates

Aspects of biological behavior of Brazilian rabies virus isolated from canine, bovine, equine, vampire and insectivorous bats were studied in mice. The oral infection occurred in mice fed with infected brain of insectivours bat (8.82%), canine (8.57%) and equine (3.03%). The mean period of incubation to all the isolates was 6 days after mice intracerebral inoculation, however, symptoms were variable, since hyperexcitability (canine sample), progressive paralysis of lower limbs and prolonged clinical course until death (equine sample), and mice without clinical signs before death (insectivorous bat). By immunohistochemistry IFN was detected in brains of mice inoculated with bovine and insectivorous bat samples, TNF and iNOS were detected in brains of those inoculated with insectivorous bat, bovine and canine samples, and positive GFAP astrocytes were found in all five samples. Two commercial inactivated rabies vaccines, one imported (vaccine 1) and another manufactured in Brazil (vaccine 2) were compared to evaluate their efficacy to protect against experimental rabies infection in mice, through the NIH and the CDC potency tests, using these street isolates as challenge virus. There was no statistical significant difference between the efficaccy of both vaccines, when comparing the same potency test and challenge virus strain suggesting no need to produce specific vaccines with street isolates.Estudou-se em camundongos aspectos do comportamento biológico de amostras brasileiras de virus rábico isoladas de cão, bovino, eqüino, morcegos hematófago e insetívoro. Observou-se transmissão oral em camundongos alimentados com cérebros infectados de morcego insetívoro (8,82%), cão (8,57%) e eqüino (3,03%). O período de incubação médio para todas as amostras foi de 6 dias após a inoculação intracerebral, com sintomas variando, desde hiperexitabilidade (amostra canina), paralisia progressiva principalmente de membros posteriores e maior duração do curso clínico até a morte (eqüino) e morte repentina, sem sintomas aparentes (morcego insetívoro). Pela imunoistoquímica detectou-se produção de IFN nos cérebros dos camundongos inoculados com amostra de bovino e morcego insetívoro, TNF e iNOS nos animais infectados com amostra de cão, bovino e morcego insetívoro e reação astrocitária com aumento da expressão de GFAP em todas as cinco amostras. A eficácia de 2 vacinas comerciais inativadas, uma nacional e outra importada, para a proteção contra a infecção experimental em camundongos foi avaliada através dos testes NIH e CDC, usando as amostras de campo para o desafio. Não houve diferença significativa entre o desempenho das vacinas, quando comparadas para um mesmo teste de potência e amostra de desafio sugerindo que não há necessidade de se produzir vacinas com amostras isoladas de campo

Remielinização em camundongos Knockout para conexina 32 desmielinizados experimentalmente

Este estudo visou avaliar o papel da conexina 32 (Cx 32) durante a remielinização no sistema nervoso periférico. Uma injeção local de 0,1% de solução de brometo de etídio foi realizada no nervo ciático de camundongos deletados para a Cx 32, com eutanásia dos animais aos 1, 2, 3, 7, 15, 21 e 30 dias pós-injeção. Avaliações histoquímicas, imunoistoquímicas, por imunofluorescência e por microscopia eletrônica de transmissão foram utilizadas na análise do desenvolvimento das lesões. Nos nervos ciáticos, células de Schwann mostraram inicialmente sinais de intoxicação e rejeitaram suas bainhas. Após sete dias, observaram-se finas bainhas neoformadas, com compactação desigual e alças redundantes (tomácula). Conclui-se que a regeneração de bainhas de mielina perdidas no SNP seguiu o padrão já relatado deste modelo em outras espécies de laboratório. Portanto, estes resultados sugerem que a ausência da Cx 32 não interferiu com o padrão normal de remielinização em camundongos jovens neste modeloThe aim of this study was to evaluate the role of connexin 32 (Cx 32) during remyelination of the peripheral nervous system, through a local injection of either 0,1% ethidium bromide solution or saline in the sciatic nerve of Cx 32 knockout mice. Euthanasia was performed ranging from 1, 2, 3, 7, 15, 21 to 30 days after injection. Histochemical, immunohistochemical, immunofluorescence and transmission electron microscopical techniques were used to analyze the development of the lesions. Within the sciatic nerves, Schwann cells initially showed signs of intoxication and rejected their sheaths; after seven days, some thin newly formed myelin sheaths with uneven compactness and redundant loops (tomacula) were conspicuous. We concluded that the regeneration of lost myelin sheaths within the PNS followed the pattern already reported for this model in other laboratory species. Therefore, these results suggest that absence of Cx 32 did not interfere with the normal pattern of remyelination in this model in young miceCNPq 475029/2004-6Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior (CAPES