Fabrication and dielectric properties of modified calcium (Pb0.75Ba0.25)(Zr0.7Ti0.3)O3 ceramics

The aim of the present work is to report investigations concerning the influence of homovalent modificators on relaxor properties of PBZT 25/70/30 ceramics. The selection of the proper homovalent additive was very important. Literature reports as well as data taken from the periodic table indicated, that calcium ions substitute themselves for lead ions with high likelihood of occurrence. The investigations showed that the substitution significantly changed the microstructure of ceramics – with grains of calcium modified ceramics decreasing and density increasing. The XRD measurements indicate that the pure PBZT ceramics as well as calcium dopant were characterised by tetragonal structure with space group I4/mmm. Addition of calcium leads to a slight decrease in the lattice constant and crystal structure. The calcium modification also changes the dielectric properties. The temperature characteristic of the dielectric constant achieved a broadened maximum at temperature Tm, which decreases with increasing Ca content. The properties typical for ferroelectric relaxors weaken with increasing calcium dopant

Troska o zdrowie w aspekcie społecznym. Cz. 2

Praca recenzowana / peer-reviewed pape

Epidemiology and prevention strategies of SARS-CoV-2 infection in pediatric hematology and oncology centers in Poland

IntroductionEpidemiological analysis of severe acute respiratory syndrome coronavirus-2 (SARS-CoV-2) infections in pediatric hematology and oncology (PHO) and hematopoietic cell transplant (HCT) centers in a Polish nationwide study, as well as analysis of the preventive strategies in these centers. MethodsAll of the 18 PHO/HCT centers participated in eight surveys and questionnaires conducted over the first 5 months of the SARS-CoV-2/coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic in Poland. Epidemiological data were collected at eight regular time points, and the strategy of preventive management was done once after 4 months of the pandemic. ResultsDuring this analyzed period, eight patients were positive for SARS-CoV-2. The estimated incidence of SARS-CoV-2 positivity in Polish PHO/HCT centers was 0.5%. After exclusion of HCT patients (with one patient being infected), the estimated incidence of SARSCoV-2 positivity was between 0.5 and 0.6%. In all but one case, the course of COVID-19 was asymptomatic or mild, and it was moderate in one case. None of them developed SARS or respiratory insufficiency, none of them required treatment in the intensive care unit (ICU), and no patient died due to SARS-CoV-2 infection. As of July 1, parents staying in the hospital together with their children were regularly tested for the virus in 13 centers. Asymptomatic healthcare personnel were regularly tested for the virus in seven centers. ConclusionsThe estimated incidence of SARS-CoV-2 infection among PHO/HCT patients is lower than in Western Europe; however, these patients cannot be regarded as a low-risk group. The low COVID-19 incidence should be interpreted as a result of strictly and continuously implemented detailed preventive measures in the PHO/HCT wards and in hospitals

Overexpression and characterization of the Sll0034 protein as a carboxypeptidase involved in cell wall metabolism of cyanobacterium Synechocystis sp. PCC6803

Niewiele wiadomo na temat enzymów uczestniczących w metabolizmie ściany komórkowej sinic. DD-karboksypeptydazy uważane są za enzymy biorące udział w procesie wydłużania i sieciowania peptydoglikanu. Celem niniejszej pracy była ekspresja sinicowego białka Sll0034 z metką histydynową w komórkach Escherichia coli, oczyszczenie i wstępna charakterystyka enzymu. Wektory do transformacji E. coli wytworzono metodą bezszwowego klonowania DNA. Gen sll0034 z Synechocystis sp. PCC6803namnożono w reakcji PCR, wykorzystując polimerazę o wysokiej wierności replikacji. Plazmid pUC19 sklonowano z wektora pUC19_control wykorzystując tę samą polimerazę DNA. Sklonowany gen sll0034 został wprowadzony do wektora pUC19. Mieszaniną ligacyjną transformowano bakterie kompetentne metodą szoku cieplnego. Segregację transformantów prowadzono na podłożu selekcyjnym z dodatkiem ampicyliny. Wyizolowano plazmid, który wykorzystano do transformacji czterech różnych ekspresyjnych szczepów bakteryjnych: BL21, C43R, Rosetta PLYS oraz PRIL, a następnie stransformowane szczepy wysiano na szalki z antybiotykiem. Po dwukrotnym pasażu wybrano pojedyncze kolonie i nimi inokulowano płynne pożywki. Ekspresję białka Sll0034 indukowano dodając IPTG. Po nocnej inkubacji hodowle sonikowano, przeprowadzono denaturację chemiczno-cieplną, a następnie elektroforezę SDS-PAGE. Żel podzielono na połowy, zawierające te same próbki białka, a następnie jedną połowę wybarwiono błękitem Coomassie, a drugą wykorzystano do przeprowadzenia elektrotransferu oraz immunodetekcji przeciwciałami anty-6xHis. Założono po 30 ml hodowli szczepów Rosetta oraz BL21. Indukowano ekspresję dodając IPTG. Bakterie sonikowano, zwirowano, nadsącz naniesiono na uprzednio zrównoważone kolumny kobaltowe i eluowano białko. W celu sprawdzenia obecności białka Sll0034 w płynie elucyjnym przeprowadzono elektroforezę w warunkach denaturujących, a następnie żel wybarwiono błękitem Coomassie. Najwięcej spodziewanego białka w porównaniu do innych białek znajdujących się w eluacie znajdowało się w eluacie pochodzącym od szczepu BL21 co może wskazywać na jego najwydajniejszą ekspresję właśnie w tym szczepie. Stopień czystości uzyskanego preparatu uznano za niezadowalający, a procedurę oczyszczania za wymagającą dalszej optymalizacji.There is little knowledge about the enzymes involved in cyanobacterial cell wall metabolism. DD-carboxypeptidases are considered to be involved in the process of peptidoglycan elongation and cross-linking. The aim of this study was the expression of cyanobacterial Sll0034 protein with histidine tag in Escherichia coli, purification and initial characterization of the enzyme. E. coli transformation vectors were generated by seamless DNA cloning. The sll0034 gene from Synechocystis sp. PCC6803 was amplified by PCR using a polymerase with high fidelity of replication. Plasmid pUC19 was cloned from the pUC19_control vector using the same DNA polymerase. Cloned sll0034 gene was entered into the pUC19 vector. The ligation mixture was transformed into competent bacteria by heat shock. Segregation of transformants was carried out on selective medium with the addition of ampicillin. Plasmid was isolated and used to transform four different expression strains: BL21, C43R, Rosetta PLYS and PRIL, and then transformed strains were plated on antibiotic dishes. After two passages, individual colonies were selected and inoculated liquid media. Expression of the Sll0034 protein was induced by the addition of IPTG. After overnight incubation, the cultures were sonicated and then after chemo-thermal denaturation, supernatant was used for SDS-PAGE electrophoresis. The gel was divided into halves containing the same protein samples, then one half was stained with Coomassie blue, and the other was used for electrotransfer and immunodetection with anti-6xHis antibody. 30 ml cultures of Rosetta and BL21 strains were established. Expression was induced by adding IPTG. Bacteria were sonicated, centrifuged and then the supernatant applied to pre-equilibrated cobalt columns for protein elution. To check the presence of the Sll0034 protein in the elution fluid, electrophoresis was performed under denaturing conditions and then gel was stained with Coomassie blue. The most expected protein compared to other proteins was found in the eluate derived from the BL21 strain which may indicate its most efficient expression in this strain. Purity level of the resulting preparation was considered unsatisfactory and the purification procedure requires further optimization

Experimental verification of a putative role of Sll0034 protein as a carboxypeptidase involved in cell wall metabolism of cyanobacterium Synechocystis sp. PCC6803, through generation of sll0034 gene deletion mutant

Komórka cyjanobakterii otoczona jest ścianą komórkową składającą się z zewnętrznejbłony komórkowej, warstwy peptydoglikanu i błony cytoplazmatycznej, które biorą udział w transporcie niezbędnych związków do komórki. Peptydoglikan jest zbudowany z łańcuchów N-acetyloglukozaminy i kwasu N-acetylomuraminowego połączonych wiązaniami β-l,4-glikozydowymi oraz usieciowanych kowalencyjnie przyłączonymi oligopeptydami, w których skład wchodzą, m. in. D-alanina i kwas-D-glutaminowy. Peptydoglikan znajdujący się w ścianie komórkowej sinic tworzy znacznie grubszą warstwę i jest znacznie bardziej usieciowany niż u innych bakterii gram ujemnych.Niewiele wiadomo na temat enzymów uczestniczących w metabolizmie ściany komórkowej sinic. DD-karboksypeptydazy uważane są za enzymy biorące udział w procesie wydłużania peptydoglikanu i tworzeniu septy. Podejrzewa się, że białka Sll0777 i Sll0034 biorą udział w dojrzewaniu i metabolizmie peptydoglikanu w komórkach Synechocystissp. PCC6803. U wielu organizmów prokariotycznych występują geny o dużym podobieństwie do genu sll0777, jednak geny wykazujące znaczne podobieństwo do genu sll0034 występują tylko u sinic.Celem pracy było wytworzenie i wstępna charakterystyka sinic pozbawionych enzymów Sll0034 lub Sll0777 w celu zbadania ich roli fizjologicznej.Metodą klonowania bezszwowego przygotowano konstrukty do transformacji sinic, w których zamiast genów sll0034 i sll0777 wstawiono geny oporności na antybiotyki. Tak przygotowanym wektorem transformowano sinice. Sinice są naturalnie kompetentne, zdolne do pobrania materiału genetycznego z otoczenia i włączenia go do genomu na zasadzie rekombinacji homologicznej. Segregację transformantów prowadzono na podłożu selekcyjnym z dodatkiem antybiotyku. Po czterokrotnym pasażowaniu transformantów przeprowadzono test oporności na antybiotyki działające na ścianę komórkową: karbenicylinę, polimyksynę B i kolistynę. Wytworzony szczep z delecją genu sll0034 okazał się znacznie bardziej wrażliwy na działanie karbenicyliny niż szczep typu dzikiego.Wytworzony mutant sll0034- będzie stanowił podstawę do kontynuacji badań nad szczegółową charakterystyką białka Sll0034 i jego roli w komórkach sinic.Cyanobacterial cell is surrounded by a cell wall consisting an outer cell membrane, peptidoglycan layer and cytoplasmic membrane. Peptidoglycan is composed of chains of N-acetylglucosamine and N-acetylmuramic acid linked by β-1,4-glycosidic bonds and covalently linked oligopeptides, including D-alanine and D-glutamic acid. The peptidoglycan of cyanobacterial cell wall forms thicker layer and is more crosslinked than the ones from other types of gram-negative bacteria.Little is known about enzymes involved in cyanobacterial cell wall metabolism. DD-carboxypeptidases are predicted to be involved in peptidoglycan elongation. Sll0777 and Sll0034 proteins are suspected to be engaged in peptidoglycan metabolism in cyanobacterium Synechocystis sp. PCC6803. Genes with high similarity to the sll0777 geneare found innumerous prokaryotic organisms, while genes showing significant resemblance to the sll0034 gene are found only in cyanobacteria.The aim of this work was to construct deletion strains sll0034- and sll0777- of Synechocystis sp. PCC6803, in order to verify involvement of Sll0034 and Sll0777 proteins in cell wall physiology.Seamless cloning method was employed to prepare transformation vectors, in which genes of interest were replaced with antibiotic resistance genes. Cyanobacteriaare naturally competent organisms able to uptake genetic material and incorporate it into the genome via homologous recombination process. Transformants were segregated on a selective medium supplemented with proper antibiotic. After four passages antibiotic resistance test was conducted. The new sll0034- strain exhibited significantly increased sensitivity to carbenicillin, as compared to the wild type. The new mutant strain sll0034-generated in this work will be further characterized in the future projects aiming at detailed elucidation of physiological role of Sll0034 protein