Adaptabilidad conformacional de apolipoproteína A-I en complejos lipoproteícos discoidales

El objetivo general en esta tesis fue someter a prueba las siguientes hipótesis: 1) En contraposición con las dHDL obtenidas por diálisis de micelas mixtas con detergentes, aquellas generadas por la reacción directa de apoAI con vesículas lipídicas o por la interacción con células tendrían un único arreglo de la proteína en el borde del disco. 2) En éste, los pares de hélices Y 3-4 de cada molécula de apoAI quedarían enfrentados y en estrecho contacto entre sí. 3) Esto permitiría la formación de un ramillete de hélices intermolecular que constituye un dominio de inserción en membranas. 4) Tanto el tamaño de los discos como su contenido de colesterol podrían modular la capacidad de formar el ramillete intermolecular o el dominio de inserción activo. Objetivos específicos: Objetivo 1. Obtener información sobre la configuración de apoAI en dHDL formadas por células en comparación con dHDL reconstituídas. Objetivo 2. Obtener información sobre los cambios conformacionales en el dominio central de apoAI inducidos por los cambios de tamaño y composición lipídica (contenido de colesterol y fosfolípidos negativos) de las dHDLFacultad de Ciencias Exacta

Apolipoprotein A-I configuration and cell cholesterol efflux activity of discoidal lipoproteins depend on the reconstitution process

Discoidal high-density lipoproteins (D-HDL) are critical intermediates in reverse cholesterol transport. Most of the present knowledge of D-HDL is based on studies with reconstituted lipoprotein complexes of apolipoprotein A-I (apoA-I) obtained by cholate dialysis (CD). D-HDL can also be generated by the direct microsolubilization (DM) of phospholipid vesicles at the gel/fluid phase transition temperature, a process mechanistically similar to the "in vivo" apoAI lipidation via ABCA1. We compared the apoA-I configuration in D-HDL reconstituted with dimyristoylphosphatidylcholine by both procedures using fluorescence resonance energy transfer measurements with apoA-I tryptophan mutants and fluorescently labeled cysteine mutants. Results indicate that apoA-I configuration in D-HDL depends on the reconstitution process and are consistent with a "double belt" molecular arrangement with different helix registry. As reported by others, a configuration with juxtaposition of helices 5 of each apoAI monomer (5/5 registry) predominates in D-HDL obtained by CD. However, a configuration with helix 5 of one monomer juxtaposed with helix 2 of the other (5/2 registry) would predominate in D-HDL generated by DM. Moreover, we also show that the kinetics of cholesterol efflux from macrophage cultures depends on the reconstitution process, suggesting that apoAI configuration is important for this HDL function.Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plat

Apolipoprotein A-I configuration and cell cholesterol efflux activity of discoidal lipoproteins depend on the reconstitution process

Discoidal high-density lipoproteins (D-HDL) are critical intermediates in reverse cholesterol transport. Most of the present knowledge of D-HDL is based on studies with reconstituted lipoprotein complexes of apolipoprotein A-I (apoA-I) obtained by cholate dialysis (CD). D-HDL can also be generated by the direct microsolubilization (DM) of phospholipid vesicles at the gel/fluid phase transition temperature, a process mechanistically similar to the "in vivo" apoAI lipidation via ABCA1. We compared the apoA-I configuration in D-HDL reconstituted with dimyristoylphosphatidylcholine by both procedures using fluorescence resonance energy transfer measurements with apoA-I tryptophan mutants and fluorescently labeled cysteine mutants. Results indicate that apoA-I configuration in D-HDL depends on the reconstitution process and are consistent with a "double belt" molecular arrangement with different helix registry. As reported by others, a configuration with juxtaposition of helices 5 of each apoAI monomer (5/5 registry) predominates in D-HDL obtained by CD. However, a configuration with helix 5 of one monomer juxtaposed with helix 2 of the other (5/2 registry) would predominate in D-HDL generated by DM. Moreover, we also show that the kinetics of cholesterol efflux from macrophage cultures depends on the reconstitution process, suggesting that apoAI configuration is important for this HDL function.Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plat

Apolipoprotein A-I configuration and cell cholesterol efflux activity of discoidal lipoproteins depend on the reconstitution process

Discoidal high-density lipoproteins (D-HDL) are critical intermediates in reverse cholesterol transport. Most of the present knowledge of D-HDL is based on studies with reconstituted lipoprotein complexes of apolipoprotein A-I (apoA-I) obtained by cholate dialysis (CD). D-HDL can also be generated by the direct microsolubilization (DM) of phospholipid vesicles at the gel/fluid phase transition temperature, a process mechanistically similar to the "in vivo" apoAI lipidation via ABCA1. We compared the apoA-I configuration in D-HDL reconstituted with dimyristoylphosphatidylcholine by both procedures using fluorescence resonance energy transfer measurements with apoA-I tryptophan mutants and fluorescently labeled cysteine mutants. Results indicate that apoA-I configuration in D-HDL depends on the reconstitution process and are consistent with a "double belt" molecular arrangement with different helix registry. As reported by others, a configuration with juxtaposition of helices 5 of each apoAI monomer (5/5 registry) predominates in D-HDL obtained by CD. However, a configuration with helix 5 of one monomer juxtaposed with helix 2 of the other (5/2 registry) would predominate in D-HDL generated by DM. Moreover, we also show that the kinetics of cholesterol efflux from macrophage cultures depends on the reconstitution process, suggesting that apoAI configuration is important for this HDL function.Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plat

Configuración de apolipoproteína A-I en HDL discoidales generadas espontáneamente por la reacción con vesículas de DMPC

Para obtener información detallada sobre la configuración de apoAI en dHDL generadas espontáneamente (y con la meta futura de disponer de un método que permita estudios configuracionales en dHDL generadas por células), hemos construido tres mutantes de cisteína (K107C, K133C y K226C), las que fueron marcadas con Alexa-Fluor 488. Las distancias intermoleculares entre los residuos marcados fueron estimadas en dHDL generadas espontáneamente por la reacción con vesículas de DMPC a 24°C de la eficiencia de homotransferencia de energía.Facultad de Ciencias Médica

Influencia de la restauración ecológica sobre la calidad fisicoquímica y biológica del agua, caso quebrada La Colorada

The present study evaluated the physicochemical and biological quality of the Quebrada La Colorada in different pluviometric periods of the years 2011, 2014 and 2016, in the municipality of Villa de Leyva, Boyacá - Colombia, through monitoring physicochemical characteristics and the biological community of macroinvertebrates. Two sampling stations were selected in the system, one in tropical forest areas restored after forest fires, and the other in unrestricted areas adjacent. The physicochemical parameters evaluated were dissolved oxygen, pH, temperature, nitrites, nitrates, phosphates and conductivity, and the analysis of the community of macroinvertebrates was performed through biotic indexes of diversity, dominance and similarity. For the two study areas four classes were recorded (Gastropoda, Arachnida, Malacostraca, Clitellata and Insecta); 8 orders, 26 families and 25 macroinvertebrate morphotypes. As a result of the physical-chemical and biological quality analysis in the La Colorada quebrada for the study periods, an improvement was obtained in the water quality, where it is concluded that the restoration process has influence on the water system, Since this study showed a positive impact on some actions such as biological diversity, change in the physicochemical structure of the system, variation of microhabitats, changes in rainfall history of sampling times, nutrient contribution and productive capacity of the ecosystem.Keywords: Ecological restoration, water quality, physicochemical parameters and macroinvertebrates.El presente estudio evaluó la calidad fisicoquímica y biológica de la quebrada La Colorada en diferentes períodos pluviométricos de los años 2011, 2014 y 2016, en el municipio de Villa de Leyva, Boyacá - Colombia, a través de seguimiento de características fisicoquímicas y la comunidad biológica de macroinvertebrados. Se seleccionaron 2 estaciones de muestreo en el sistema, una en áreas de bosque tropical restauradas luego de presentar episodios de incendios forestales, y la otra en zonas no restauradas aledañas. Los parámetros fisicoquímicos evaluados fueron: Oxígeno disuelto, pH, temperatura, nitritos, nitratos, fosfatos y conductividad. De igual manera se realizó el análisis de la comunidad de macroinvertebrados por medio de índices bióticos de diversidad, dominancia y similitud. Para las dos zonas de estudio se registraron 4 clases (Gastropoda, Arachnida, Malacostraca, Clitellata e Insecta); 8 órdenes, 26 familias y 25 morfotipos de macroinvertebrados. A partir del análisis de calidad físico-químico y biológica en la quebrada La Colorada para los períodos de estudio, se obtuvo como resultado un mejoramiento en la calidad del agua logrando concluir que el proceso de restauración si tiene influencia sobre el sistema hídrico, puesto que con estos resultados se demuestra un impacto positivo en algunas acciones como la diversidad biológica, cambio en la estructura fisicoquímica del sistema, variación de microhábitats, cambios en los históricos pluviométricos de las épocas de muestreo, aporte de nutrientes y la capacidad productiva del ecosistema.Palabras clave: Restauración ecológica, calidad del agua, parámetros fisicoquímicos y macroinvertebrados

Configuración de la apolipoproteína A-I (ll5/2 en dHDL) fisiológicamente activa en la remoción de colesterol de células RAW

Objetivos del trabajo: A) Comparar la configuración de apoAI en las dHDL generadas espontáneamente con aquellas obtenidas por diálisis con detergentes. Para ello, nos propusimos determinar ciertas distancias intermoleculares por medidas de homotransferencia de energía de resonancia (homo FRET) usando dos mutantes de triptófano único (W@104 y W@108) y tres mutantes de cisteína marcada con Alexa-488 (K107C, K133C y K226C) B) Comparar la funcionalidad de las dHDL obtenidas por ambos métodos midiendo su capacidad para remover colesterol de células en cultivo (macrófagos murinos RAW 264,7).Facultad de Ciencias Médica

Bioindicadores de la calidad del agua en áreas con restauración ecológica de la quebrada la colorada, Villa de Leyva, Boyacá

El presente estudio evaluó la calidad ecológica de la Quebrada La Colorada en diferentes períodos pluviométricos de los años 2014 y 2015, en el municipio de Villa de Leyva, Boyacá - Colombia, a través de caracterización de macroinvertebrados, seguimiento de parámetros fisicoquímicos y aplicación de índices bióticos. Se seleccionaron 2 estaciones de muestreo en el sistema, una en áreas de bosque tropical restauradas luego de presentar episodios de incendios forestales, y la otra en zonas no restauradas aledañas. En cada estación de muestreo se capturaron macroinvertebrados con una red Surber a lo largo de 100 metros. Los resultados muestran diferencias significativas en la composición de la comunidad bentónica asociada a las áreas restauradas con la presencia de 4 clases (Gastropoda, Oligochaeta, Turbellaria e Insecta); 10 órdenes, 15 familias y un total de 18 morfotipos de macroinvertebrados, en la zona control sin restauración se encontraron organismos de la 2 clases (Gastropoda e Insecta), 5 órdenes, 6 familias y un total de 7 morfotipos de macroinvertebrados y se presentan 6 géneros comunes en las 2 estaciones. Lo anterior se asocia a cambios físico-químicos del sistema, variación de microhábitats y condiciones pluviométricas de las épocas de muestreo. Los análisis de diversidad muestran diferencias significativas entre las 2 estaciones; al igual que los valores de dominancia. Los valores de similitud relacionan una alta variabilidad en la composición de especies entre estaciones, los especímenes comunes entre estaciones presentan condiciones de hábitat asociados a aguas limpias y rápidas con presencia de material autóctono, además de poca tolerancia a la contaminación orgánica

Apolipoproteína A-I Helsinki: su relación con acil-coa colesterol aciltransferasa (ACAT)

Apolipoproteína A-I (apoA-I), es la proteína mayoritaria de las lipoproteínas de alta densidad (HDL) la misma juega un rol clave en la respuesta antiaterogénica y en el transporte de colesterol reverso (TCR). Esta proteína está mayoritariamente compuesta por repeticiones de a-hélices anfipáticas de tipo A. Existen también dos regiones conformadas por hélices de tipo Y con una distribución particular de cargas; las mismas han sido propuestas que juegan un rol central en el eflujo lipídico mediado por apoA-I. Pacientes portadores de una variante de apoA-I con una deleción en una hélice de tipo Y en la región central (DK107) tienen el metabolismo de las HDL alterado y un incrementado riesgo aterogénico.Facultad de Ciencias Médica

Phytoremediation in wastewater without previous treatment, Case: Tierra Negra Boyacá

La investigacion se llevo a traves de un proceso de fitorremediacion, empleando buchon de agua (Eichhornia crassipes), en el tratamiento de aguas residuales de tipo domesticas, industriales e institucionales, generadas por la poblacion del sector Tierra Negra, jurisdiccion del municipio de Ventaquemada, vertidas a la quebrada La Pinocha. Se diseno el proceso de fitorremediacion, con cuatro piscinas de flujo horizontal, recubiertas con plastico negro para evitar la infiltracion y contaminacion del suelo. Las plantas macrofitas flotantes, buchones de agua (Eichhornia crassipes), empleadas en el proceso, se extrajeron de las piscinas de enfriamiento de la Termoelectrica de Paipa. La investigacion fue cuantitativa, descriptiva, experimental y explicativa. En la primera fase se establecieron los tipos de metales presentes en la planta, la materia organica y se hizo la caracterizacion fisica y quimica. Igualmente, se llevo a cabo la caracterizacion biologica de microorganismos patogenos que estan presentes en el agua residual, antes y despues del proceso de fitorremediacion. Al respecto, se llevaron a cabo los ensayos de laboratorio de absorcion atomica de metales pesados, tanto en el agua residual como en la planta buchon de agua. Asi mismo, se hizo un monitoreo in situ los dias lunes, miercoles y viernes durante cinco semanas para medir los parametros fisicos como Ph, conductividad y turbidez del agua en las cuatro piscinas. Con base en los resultados obtenidos en los analisis respectivos se concluyo que la eficiencia del proceso de fitorremediacion, usando la planta denominada buchon de agua, en el tratamiento de aguas residuales, fue de mas del 71% en las poblaciones de unidades formadoras de colonias (UFC). De la misma manera, sustentado con este y los otros analisis se concluye que los humedales artificiales son utiles para sitios en donde no existen plantas de tratamiento de aguas residuales o para complementar dicho proceso.The present investigation was carried out through a process of phytoremediation using water buzzard (Eichhornia crassipes) in the treatment of domestic, industrial and institutional wastewater generated by the population of the Tierra Negra sector, jurisdiction of the municipality of Ventaquemada, in the brook La Pinocha, the design of the phytoremediation process was executed, which consisted of four pools of horizontal flow, with a black plastic coating in order to avoid the infiltration and contamination of the soil. The floating macrophyte plants of water hyacinths (Eichhornia crassipes) used in the process were extracted from the cooling pools of the Paipa Thermoelectric Plant. The research had a descriptive, experimental, quantitative and explanatory scope. As a first phase, the type of metals present in the plant and the organic matter were established. In turn, the biological characterization of pathogenic microorganisms that are present in the wastewater before and after the phytoremediation process was carried out. Laboratory tests of atomic absorption of heavy metals were carried out both in the wastewater and in the buchon water plant. In addition, an on-site monitoring was made on Monday, Wednesday and Friday for six weeks to measure physical parameters such as pH, conductivity and turbidity of the water in the four pools. According to the results obtained in the analysis, it is concluded that the efficiency of the phytoremediation process using the buchon water plant in the treatment of wastewater was 71.19% in the colony forming units (CFU) populations. According to the above, artificial wetlands are useful where there are no wastewater treatment plants or to supplement said process.Facultad de Ciencias Exacta