Investigação das atividades anti-inflamatória e antiproliferativa de porfirina catiônica

Orientador : Prof. Dr. Michel Fleith OtukiTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 19/06/2015Inclui referências : f. 136-151Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatosResumo: A psoríase é uma doença inflamatória crônica da pele, com características tanto imunológicas quanto hiperproliferativas. Os tratamentos tradicionais para essa doença apresentam algumas desvantagens, dentre elas falta de adesão e toxicidade. A terapia fotodinâmica (TFD) tem sido usada, cada vez mais, no tratamento de algumas doenças, inclusive cutâneas. Consiste na utilização de luz, oxigênio e um agente fotossensibilizador onde ocorre uma reação fotoquímica com o objetivo de causar destruição seletiva de um tecido. Nesse trabalho a porfirina Iodeto de 5,10 -difenil - 15, 20 (N-metilpiridino-4-il) porfirina (Di-cis-Py+) foi utilizada como fotossensibilizador e seus possíveis efeitos anti-inflamatório e antiproliferativo foram avaliados em modelos de inflamação cutânea. A aplicação tópica de Di-cis-Py+, quando fotoativada, reduziu significativamente o edema de orelha induzido pela aplicação de agentes flogísticos como óleo de cróton e TPA, bem como a migração leucocitária para o foco inflamatório. A atividade anti-inflamatória da Di-cis-Py+ também foi evidenciada pela redução das citocinas inflamatórias IL-6, IL1-? e TNF-? induzidas por ambos agentes flogísticos. Além do efeito anti-inflamatório, no modelo induzido por múltiplas aplicações de óleo de cróton, a Di-cis-Py+, quando fotoativada, levou à redução da hiperproliferação epidérmica, evidenciada através da inibição dos níveis e da expressão do marcador de proliferação PCNA. Também foi capaz de reduzir a viabilidade celular de queratinócitos humanos imortalizados (HaCaT). Seu efeito anti-inflamatório, porém, não ocorre através de receptores de glicocorticoide, uma vez que não houve a reversão do efeito da Di-cis-Py+, quando fotoativada, após o tratamento com o antagonista de receptores de glicocorticoide, mifepristona. Além disso, provavelmente, não ocorre sua absorção, ao contrário da dexametasona. Os resultados apresentados sugerem que a Di-cis-Py+, quando fotoativada , pode ser uma molécula com potencial para o desenvolvimento de um novo agente fotossensibilizador para o tratamento de doenças inflamatórias proliferativas cutâneas, apresentando vantagens por ser de aplicação tópica, não ocorrendo uma aparente fotossensibilidade, com efeitos similares aos da dexametasona, uma droga de primeira linha para o tratamento de doenças inflamatórias hiperproliferativa. Palavras-chave: Terapia Fotodinâmica, Porfirina, Inflamação, Hiperproliferação, Psoríase.Abstract: Psoriasis is a chronic inflammatory skin disease, with immunological and hyperproliferative characteristics. Traditional treatments for this disease present some disadvantages, as lack of adherence and toxicity. Photodynamic therapy (PDT) is getting more and more applied in the treatment of certain diseases, including skin ones. It consists in the use of light, oxygen and a photosensitizer agent in which a photochemical reaction occurs in order to cause a selective destruction of a tissue. In this work the porphyrin iodide 5, 10-diphenyl - 15 20 (N-methylpyridinium-4-yl) porphyrin (Di-cis-Py +) was applied as a photosensitizer; and their possible anti-inflammatory and antiproliferative effects were assessed in skin inflammation models. The topical application of Di-cis-Py+, when photoactivated, reduced significantly the ear edema induced by the application of phlogistic agents such as croton oil and TPA, as well the leukocyte migration into the inflammatory focus. The anti-inflammatory activity Di-cis-Py+, when photoactivated, was also noticed by the reduction of the inflammatory cytokines IL-6, IL1-? and TNF-? induced by both phlogistic agents. Besides the anti-inflammatory effect, in the model induced by multiple croton oil application, Di-cis-Py +, when photoactivated, led to a reduction of epidermal hyperproliferation, noticed by the inhibition of the levels and expression of the proliferation PCNA marker. It was also able to reduce the cell viability of human immortalized keratinocytes (HaCaT). Its anti-inflammatory effect, however, does not occur through glucocorticoid receptors, once there was no reversion of the Di-cis-Py+, when photoactivated, effect after the treatment with the antagonist of glucocorticoid receptors, mifepristone. Moreover, probably no absorption occurs, different from dexamethasone. The presented results suggest that Di-cis-Py +, when photoactivated, can be a molecule with potential for developing a new photosensitizing agent to treat proliferative inflammatory skin diseases, offering advantages for being topically applied, without an apparent photosensitivity, with similar dexamethasone effects, a high level drug for treating inflammatory hyperproliferative disease. Keywords: Photodynamic Therapy, Porphyrin, Inflammation, Hyperproliferation, Psoriasis

Cytotoxic activity of the sub-fraction 2125 from Vernonia scorpioides against Sarcoma 180 tumor cells in mice

The effect of the selected sub-fraction SF-2125 of the Vernonia scorpioides leaf extract on Sarcoma 180 (S180) ascitic tumor-bearing mice was investigated. The animals were treated with SF-2125 at a concentration of 5 mg/kg, administered intraperitoneally and intravenous during the development of the tumor. Treatment with SF-2125 5 mg/kg i.p. increased the lifespan of the animals, maintained their body and the ascitic tumor showed no development. Intravenous treatment did not reduce the tumor volume

Investigação das atividades anti-inflamatória e antiproliferativa de porfirina catiônica

Orientador : Prof. Dr. Michel Fleith OtukiTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 19/06/2015Inclui referências : f. 136-151Área de concentração: Insumos, medicamentos e correlatosResumo: A psoríase é uma doença inflamatória crônica da pele, com características tanto imunológicas quanto hiperproliferativas. Os tratamentos tradicionais para essa doença apresentam algumas desvantagens, dentre elas falta de adesão e toxicidade. A terapia fotodinâmica (TFD) tem sido usada, cada vez mais, no tratamento de algumas doenças, inclusive cutâneas. Consiste na utilização de luz, oxigênio e um agente fotossensibilizador onde ocorre uma reação fotoquímica com o objetivo de causar destruição seletiva de um tecido. Nesse trabalho a porfirina Iodeto de 5,10 -difenil - 15, 20 (N-metilpiridino-4-il) porfirina (Di-cis-Py+) foi utilizada como fotossensibilizador e seus possíveis efeitos anti-inflamatório e antiproliferativo foram avaliados em modelos de inflamação cutânea. A aplicação tópica de Di-cis-Py+, quando fotoativada, reduziu significativamente o edema de orelha induzido pela aplicação de agentes flogísticos como óleo de cróton e TPA, bem como a migração leucocitária para o foco inflamatório. A atividade anti-inflamatória da Di-cis-Py+ também foi evidenciada pela redução das citocinas inflamatórias IL-6, IL1-? e TNF-? induzidas por ambos agentes flogísticos. Além do efeito anti-inflamatório, no modelo induzido por múltiplas aplicações de óleo de cróton, a Di-cis-Py+, quando fotoativada, levou à redução da hiperproliferação epidérmica, evidenciada através da inibição dos níveis e da expressão do marcador de proliferação PCNA. Também foi capaz de reduzir a viabilidade celular de queratinócitos humanos imortalizados (HaCaT). Seu efeito anti-inflamatório, porém, não ocorre através de receptores de glicocorticoide, uma vez que não houve a reversão do efeito da Di-cis-Py+, quando fotoativada, após o tratamento com o antagonista de receptores de glicocorticoide, mifepristona. Além disso, provavelmente, não ocorre sua absorção, ao contrário da dexametasona. Os resultados apresentados sugerem que a Di-cis-Py+, quando fotoativada , pode ser uma molécula com potencial para o desenvolvimento de um novo agente fotossensibilizador para o tratamento de doenças inflamatórias proliferativas cutâneas, apresentando vantagens por ser de aplicação tópica, não ocorrendo uma aparente fotossensibilidade, com efeitos similares aos da dexametasona, uma droga de primeira linha para o tratamento de doenças inflamatórias hiperproliferativa. Palavras-chave: Terapia Fotodinâmica, Porfirina, Inflamação, Hiperproliferação, Psoríase.Abstract: Psoriasis is a chronic inflammatory skin disease, with immunological and hyperproliferative characteristics. Traditional treatments for this disease present some disadvantages, as lack of adherence and toxicity. Photodynamic therapy (PDT) is getting more and more applied in the treatment of certain diseases, including skin ones. It consists in the use of light, oxygen and a photosensitizer agent in which a photochemical reaction occurs in order to cause a selective destruction of a tissue. In this work the porphyrin iodide 5, 10-diphenyl - 15 20 (N-methylpyridinium-4-yl) porphyrin (Di-cis-Py +) was applied as a photosensitizer; and their possible anti-inflammatory and antiproliferative effects were assessed in skin inflammation models. The topical application of Di-cis-Py+, when photoactivated, reduced significantly the ear edema induced by the application of phlogistic agents such as croton oil and TPA, as well the leukocyte migration into the inflammatory focus. The anti-inflammatory activity Di-cis-Py+, when photoactivated, was also noticed by the reduction of the inflammatory cytokines IL-6, IL1-? and TNF-? induced by both phlogistic agents. Besides the anti-inflammatory effect, in the model induced by multiple croton oil application, Di-cis-Py +, when photoactivated, led to a reduction of epidermal hyperproliferation, noticed by the inhibition of the levels and expression of the proliferation PCNA marker. It was also able to reduce the cell viability of human immortalized keratinocytes (HaCaT). Its anti-inflammatory effect, however, does not occur through glucocorticoid receptors, once there was no reversion of the Di-cis-Py+, when photoactivated, effect after the treatment with the antagonist of glucocorticoid receptors, mifepristone. Moreover, probably no absorption occurs, different from dexamethasone. The presented results suggest that Di-cis-Py +, when photoactivated, can be a molecule with potential for developing a new photosensitizing agent to treat proliferative inflammatory skin diseases, offering advantages for being topically applied, without an apparent photosensitivity, with similar dexamethasone effects, a high level drug for treating inflammatory hyperproliferative disease. Keywords: Photodynamic Therapy, Porphyrin, Inflammation, Hyperproliferation, Psoriasis

Vernonia scorpioides ethyl acetate III subfraction effect evaluation in model of in vivo and in vitro murine melanoma

Vernonia Scorpioides tem sido utilizada popularmente no Brasil para tratar problemas de pele e úlceras crônicas, como as úlceras de perna decorrentes de diabetes. No presente estudo foi investigado o efeito da subfração acetato de etila III obtida do extrato bruto das folhas de Vernonia scorpioides in vitro, onde células de melanoma murino B16F10 foram submetidas à tratamento com várias concentrações no período de 24, 48, 72 e 96 horas, com o propósito de analisar a citotoxicidade da subfração frente às células. Percebemos uma alta citotoxicidade da subfração matando as células nas concentrações acima de 5 μg/ml, as células que receberam o tratamento de 1 g/ml não sofreram morte celular total. A morte celular foi elucidada com laranja de acridina e brometo de etídio. Um estudo mais detalhado das células foi feito com microscopia eletrônica. No estudo in vivo foi investigada a ação da subfração acetato de etila III na concentração de 5mg/Kg em camundongos C57BL6 com o objetivo de verificar a ação da subfração, sete dias de tratamento após dez dias da inoculação, tratamento profilático em dose única no primeiro dia da inoculação e tratamento precoce após 48 horas da inoculação com intervalos de dois dias. Os animais receberam via subcutânea, na região lombar dorsal 1,5 x 105 células de melanoma B16F10. Percebemos que o local em que a subfração acetato de etila III consegue disseminar-se pela massa tumoral ocorre a morte do tumor, extensa área de necrose é observada, quanto mais cedo e precoce o tratamento melhor o comportamento da massa tumoral a subfração acetato de etila III, o único órgão que reage é o baço se apresenta muito reativo proporcionalmente ao tamanho do tumor, os demais órgão não apresentam lesões, a subfração não causou nefrocitotoxicidade e hepatotoxicidade aparente.Vernonia scorpioides has been tradionally used in Brazil in order to treat skin disorders and chronic wounds, such as leg ulcers in result to diabetes. The present study investigated the ethyl acetate III subfraction effect obtained from fresh leaves of Vernonia scorpioides in vitro, where B16F10 murine melanoma cells were submitted to treatment with several concentrations during 24, 48, 72 and 96 hours, to analyze citotoxicity subfraction before the cells. A high citotoxicity level of subfraction could be noticed killing cells above 5 μg/ml concentration, the cells which received 1 g/ml treatment have not suffered total cellular death. This death was elucidated with acridine orange/ethidium bromide staining, a deeper study of the cells was performed with electron microscopy, the action of ethyl acetate III subfraction in the 5mg/Kg concentration in C57BL6 mice was investigated in the in vivo study so that it is possible to verify the action of the subfraction seven days of treatment after ten days of inoculation, single dose of prophylactic treatment on the first day of inoculation and precocious treatment after 48 hours of inoculation with 48-hour intervals. The animals received subcutaneously 1,5 x 105 B16F10 murine melanoma cells. Tumor death is noticeable in the area where the ethyl acetate III subfraction could disseminate inside, a comprehensive necrosed area was observed, the sooner and more precocious the treatment the better the tumor will react to the ethyl acetate III subfraction, the only organ that reacts is the spleen which presents itself very reactive to the size of the tumor, the other organs do not display wounds, the subfraction did not cause apparent nefrotoxicity and hepatoxicity

Effects of the topical application of an ethyl acetate fraction from Vernonia scorpioides on excisional wounds infected with Staphylococcus aureus in rats

We investigated the healing process on excisional wounds infected with Staphylococcus aureus in rats, treated with 50 µL of ethyl acetate III from Vernonia scorpioides (Lam.) Pers., Asteraceae, rifamycin diethylamide B 25 mg, or saline. The lesions were measured daily and after seven days were surgically removed and histologically processed. The results indicate a favorable action of the EAIII, demonstrated by the increased wound contraction, smaller area of necrotic tissue, good development of granulation tissue, extensive extracellular matrix deposition and epithelial regeneration. This sub-fraction was phytochemically investigated in parallel studies, revealing the presence of sesquiterpene lactones (glaucolides and hirsutinolides) such as diacethylpiptocarphol and related hirsutinolides, flavonoids and cinnamic acid derivatives and also a new polyacetylene, which have been previously published. Results support the effectiveness of V. scorpioides antimicrobial activity in infected wound healing in rats