Comparação entre o sistema automatizado e PCR na identificação e susceptibilidade de isolados clínicos de Enterococcus spp

Enterococci are increasingly responsible for nosocomial infections worldwide. This study was undertaken to compare the identification and susceptibility profile using an automated MicrosScan system, PCR-based assay and disk diffusion assay of Enterococcus spp. We evaluated 30 clinical isolates of Enterococcus spp. Isolates were identified by MicrosScan system and PCR-based assay. The detection of antibiotic resistance genes (vancomycin, gentamicin, tetracycline and erythromycin) was also determined by PCR. Antimicrobial susceptibilities to vancomycin (30 µg), gentamicin (120 µg), tetracycline (30 µg) and erythromycin (15 µg) were tested by the automated system and disk diffusion method, and were interpreted according to the criteria recommended in CLSI guidelines. Concerning Enterococcus identification the general agreement between data obtained by the PCR method and by the automatic system was 90.0% (27/30). For all isolates of E. faecium and E. faecalis we observed 100% agreement. Resistance frequencies were higher in E. faecium than E. faecalis. The resistance rates obtained were higher for erythromycin (86.7%), vancomycin (80.0%), tetracycline (43.35) and gentamicin (33.3%). The correlation between disk diffusion and automation revealed an agreement for the majority of the antibiotics with category agreement rates of >; 80%. The PCR-based assay, the van(A) gene was detected in 100% of vancomycin resistant enterococci. This assay is simple to conduct and reliable in the identification of clinically relevant enterococci. The data obtained reinforced the need for an improvement of the automated system to identify some enterococci.Os enterococos são cada vez mais responsáveis por infecções hospitalares em todo o mundo. Este estudo foi realizado para comparar a identificação e perfil de suscetibilidade entre o sistema automatizado MicrosScan e a técnica molecular de PCR em espécies de Enterococcus spp. Foram avaliados 30 isolados clínicos de Enterococcus spp. Os isolados foram identificados pelo sistema MicrosScan® e pela técnica de PCR. A detecção de genes de resistência a antibióticos (vancomicina, gentamicina, tetraciclina e eritromicina) foi determinada por PCR. Suscetibilidades antimicrobianas à vancomicina (30 µg), gentamicina (120 µg), tetraciclina (30 µg) e eritromicina (15 µg), foram testados pelos métodos automatizados e pelo disco difusão, de acordo com as orientações do CLSI. No que diz respeito à identificação de Enterococcus em geral entre os dados obtidos pelo método de PCR e pelo sistema automático foi de 90,0% (27/30). Para todos os isolados de E. faecium e E. faecalis observamos concordância de 100%. Freqüências de resistência foi maior em E. faecium do que em E. faecalis. As taxas de resistência obtidas foi maior para eritromicina (86,7%), vancomicina (80,0%), tetraciclina (43,35%) e gentamicina (33,3%). A correlação entre a técnica de disco difusão e automação revelou-se de acordo para maioria dos antibióticos com taxas >; 80%. O gene van(A) foi detectado em 100% dos Enterococcus resistentes á vancomicina. O ensaio baseado em PCR é de simples realização e de confiança para identificação de enterococos clinicamente relevantes. Os dados obtidos reforçam a necessidade de melhoria no sistema automatizado para identificar alguns enterococos

Antibacterial efficacy of Enterococcus microencapsulated bacteriocin on Listeria monocytogenes, Listeria innocua and Listeria ivanovi

This study focused on the microencapsulation of enterocin from Enterococcus durans (E. durans MF5) in whey powder (WP) using a spray-drying technique followed by the evaluation of how complexation can preserve the enterocin structure and antimicrobial activity against foodborne pathogens. Crude enterocin samples (1 and 5%) were microencapsulated in 10% WP. The antimicrobial activity of unencapsulated (crude) enterocin and microencapsulated enterocin was tested against the target bacteria Salmonella Typhimurium, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Listeria innocua, and Listeria ivanovi. The microencapsulation yields were 31.66% and 34.16% for concentrations of 1 and 5% enterocin, respectively. There was no significant difference between these concentrations. Microencapsulated enterocin was efficient for up to 12 h of cocultivation with Listeria sp., and the concentration required to inhibit the growth of target bacteria presented values of 6400 AU/ mL (arbitrary unit). Microencapsulated enterocin demonstrated enhanced efficacy against Listeria species and E. coli when compared with crude enterocin (p < 0.05). Fourier transform-infrared spectroscopy and differential scanning calorimetry results confirmed the presence of enterocin in the microparticles. Scanning electron microscopy showed cell damage of the target bacteria. The results showed that complexation with WP preserved enterocin antimicrobial activity during spray-drying, indicating its potential use as a food preservative.This work was supported by Fundação Araucária/Governo do Paraná—Brazil, UTFPR-Londrina Campus and State University of Londrina-Paraná. The authors thank the “Central Analítica Multiusuário da UTFPR Campo Mourão (CAMulti-CM)¨ and “Laboratório Multiusuário da UTFPR Campus Londrina (LabMulti-LD)¨ for the analyses. Fernanda V. Leimann (process 039/2019) thanks to Fundação Araucária (CP 15/2017- Programa de Bolsas de Produtividade em Pesquisa e Desenvolvimento Tecnológico) and to CNPq (process number 421541/2018-0, Chamada Universal MCTIC/CNPq n.° 28/2018).info:eu-repo/semantics/publishedVersio

Transformação genética de Trypanosoma cruzi mediada por Agrobacterium tumefaciens

Orientador : Marco Aurélio KriegerTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 2006Inclui bibliografiaTrypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas, e constitui alvo de inúmeros estudos que visam desde a elucidação dos mecanismos biológicos, apresentados por este parasita, até o desenvolvimento de quimioterapicos e vacinas. Este protozoário apresenta um ciclo heteroxênico, caracterizado pela expressão diferencial de genes, sendo que alguns deles já foram clonados e estudados. Contudo o sistema de transferência gênica em T. cruzi tem sido um obstáculo, pois envolvem a introdução de plasmídeos pela técnica de eletroporação, e o emprego desta metodologia leva a uma perda celular significativa devido as elevadas voltagens aplicadas. A transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens (ATMT), uma bactéria Gram-negativa, representa um método de mutagênese insercional, uma vez que ocorre a transferência e integração, no cromossomo da célula hospedeira, de uma região denominada de T-DNA presente no plasmídeo bacteriano. Portanto, este trabalho visou o desenvolvimento de uma metodologia de transformação de células de T. cruzi mediado por Agrobacterium

Revisão: Aspectos gerais das bacteriocinas

Resumo Bacteriocinas são peptídeos antimicrobianos sintetizados nos ribossomos, tendo sido descrita uma grande diversidade de bacteriocinas, as quais diferem entre si quanto a composição de aminoácidos, biossíntese, transporte e modo de ação. Nos alimentos, as bacteriocinas podem ser encontradas naturalmente como produtos da microbiota normal ou introduzida (cultura starter ou probióticos). Devido às suas aplicabilidades frente a organismos patogênicos contaminantes em alimentos, vários estudos têm sido publicados, tornando o uso destes peptídeos uma alternativa aos conservantes químicos tradicionais. Considerando-se as propriedades das bacteriocinas e sua potencial aplicação como bioconservadores de alimentos e alternativa aos antibióticos, o presente estudo busca acercar-se de uma visão geral das bacteriocinas quanto aos aspectos históricos, sistemas de classificação, biossíntese e transporte, modo de ação, abordando também algumas de suas aplicações na indústria de alimentos